Name: measuring the kinetics of mrna transcription in single living cells
Uploaded: 2011-08-25T13:00:00
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YS - T은 과학적 연구와 개발을위한 독일 - 이스라엘 재단 유럽 연구위원회 (ERC), 이스라엘 과학 재단 (ISF) (250/06), ISF - Bikura, 이스라엘 암 연구 기금 (ICRF), (GIF 지원됩니다 ), 미국 - 이스라엘 Binational 과학 재단 (BSF), 독일 - 이스라엘 프로젝트 협력 (DIP), 그리고 과학 건강의 이스라엘 부처와 바 - 일란 대학에서 생명 과학의 제인 스턴 Lebell 패밀리 연구원입니다. YB는 Azrieli 활동의 수상 Azrieli 재단에 감사합니다.

사용 전지 시스템은 태그 살아있는 세포에서 mRNA를위한 MS2 반복 시퀀스를 포함하는 통합 유전자 구조를 포함해야합니다. 5 &#39;유전자의가 락 연산자가 포함되어 있습니다 (이 프로토콜에서 우리는 찬란 (그림 1A) 다음과 같이 DNA, RNA 및 단백질 수준 8 분류되는 안정 통합 β - 굴지의 유전자를 품고 인간 U2OS 세포 라인을 사용하여 lacO) 반복 - 이러한 유전자를 (DNA)?...

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	<li>Wada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+wave+of+nascent+transcription+on+activated+human+genes.">A wave of nascent transcription on activated human genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 18357-18361 (2009).</li><li>Singh, J., Padgett, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rates+of+in+situ+transcription+and+splicing+in+large+human+genes.">Rates of in situ transcription and splicing in large human genes.</a> Nat Struct Mol Biol. 16, 1128-1133 (2009).</li><li>Brody, Y., Shav-Tal, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+transcription+in+real-time.">Visualizing transcription in real-time.</a> Cent Eur J Biol. 3, 11-18 (2008).</li><li>Lamond, A. 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살아있는 세포에서 효소 운동 활동을 측정하는 방법은 두 부분으로 나눌 수 있습니다. 첫 번째 부분은 두 번째 부분에서 데이터가 ODE 모델을 사용하여 분석 반면, 측정 및 mRNA의 전사의 운동 데이터를 가져올 수있는 &#39;서부 유럽 표준시&#39;절차를 설명합니다. 5 연구의 숫자가 지금은 추출이 접근 방법을 활용해야 살아있는 세포 5, 6, 8, 12-14에서 전사 속도론. 이러한 연구 사이의 ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th></tr><tr><td> Doxycycline </td><td> 시그마 </td></tr><tr><td> FuGENE 6 transfection 시약 </td><td> 로체 </td></tr></tbody></table>

measuring the kinetics of mrna transcription in single living cells

RNA 중합 효소 II (폴 II)의 transcriptional 활동은 역동적인 과정이므로 생체내의 transcriptional 프로세스의 속도론을 측정하는 것은 중요하다. 폴 II의 속도론이 생화 학적 또는 분자 방법을 사용하여 측정하고 있습니다. 1-3 최근에는 새로운 시각화 방법의 개발, 그것은 하나의 살아있는 세포에서 실시간으로 발생하는 등 전사에 따라 가능한되었다 4. 여기에 우리는 방법에 대해 설명합니다 특정 유전자 로커스 (DNA), 그 mRNA의 제품 및 최종 단백질 제품이 찬란 표시 및 생체내에서 시각 수있는 세포주를 사용하여 살아있는 세포의 특정 유전자에 대한 폴 II 신장 속도론의 분석을 수행할 수 있습니다. 5, 6 , 그것은 관심의 유전자에 mRNAs의 실제 전사를 감지할 수 있습니다. 7, 8 mRNA가 찬란 mRNA의 기록의 3&#39;UTR 24 MS2 줄기 루프를 포함하는 생체내에 태그 mRNAs위한 MS2 시스템을 이용하여 태그입니다 그것이 베꼈는데 그대로 mRNA를 레이블 YFP - MS2 코트 단백질에 대한 매우 구체적인 구속력이 사이트를 제공하는 반복은 9. 우리가 (FRAP) 메서드를 Photobleaching 후 형광 복구를 사용하여 녹음의 속도론을 모니터링합니다. 녹음의 사이트에있는 YFP - MS2 - 태그 초기 기록을 photobleaching 후 시간이 지남에 따라이 신호의 복구를 수행함으로써, 우리가 새로 만든 mRNAs의 합성 속도를 얻는 5. 즉, YFP - MS2 형광 복구 생성을 반영 새로운 MS2의 형광 무료 YFP - MS2는 주변 nucleoplasm에서 입력 분자에 의해 초기 기록과 바인딩에 줄기 루프. FRAP 복구 곡선은 다음 녹음의 운동 시간 매개 변수를 검색하기 위해, 미분 방정식의 시리즈 공식 수학 기계론의 모델을 사용하여 분석하고 있습니다.

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Measuring the Kinetics of mRNA Transcription in Single Living Cells

RNA 효소 II transcriptional 운동은 살아있는 세포에서 특정 유전자를 측정합니다. 관심의 유전자에서 베꼈는데 mRNAs는 찬란 태그와 (FRAP) transcriptional 신장의 생체내 반응 속도론에있는가를 얻을 수있다 Photobleaching 후 형광 복구를 사용하고 있습니다.

싱글 생활 세포에서 mRNA의 전사의 속도론을 측정

The transcriptional activity of RNA polymerase II (Pol II) is a dynamic process and therefore measuring the kinetics of the transcriptional process in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Measurement of Viral Fusion Kinetics at the Single Particle Level

단일 입자 수준에서 바이러스성 퓨전 속도론의 측정 방법

Membrane fusion is an essential step during entry of enveloped viruses into cells. Conventional fusion assays typically report on a large number of fusion ...

연구

생물학

Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

Microinjection하여 포유 동물 세포에서 mRNA 원자력 수출 속도론 분석

In eukaryotes, messenger RNA (mRNA) is transcribed in the nucleus and must be exported into the cytoplasm to access the translation machinery. Although ...

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

생활의 이미징 셀 모양 변경 Drosophila 태아

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Photobleaching Assays (FRAP &amp; FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching Assays FRAP & FLIP to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

배아 줄기 세포 생활에서 염색질 단백질 역학을 측정하는 Assays (FRAP 및 플립)를 Photobleaching

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) and Fluorescence Loss In Photobleaching (FLIP) enable the study of protein dynamics in living cells with ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

HELA 세포 Transfection 얹는 Gaussia의 루시페라제의 mRNA의 시험 관내 스크립트 작성 및 상한에

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

신진 대사 레이블 및 유동세포계측법와 세포주기 진행의 동력학 측정

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

비례 생체 분자 비콘을 사용하여 살아있는 세포의 단일 엔지니어링 RNA 성적 증명서의 실시간 영상

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient (Pf) of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

Measuring the Osmotic Water Permeability Coefficient Pf of Spherical Cells: Isolated Plant Protoplasts as an Example

삼투 물 투수 계수 (P 측정<sub&gt; F</sub&gt;) 구형 세포 : 예를 들어 식물 절연 원형질체

Studying AQP regulation mechanisms is crucial for the understanding of water relations at both the cellular and the whole plant levels. Presented here is ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

하나 나노 미터의 정확도와 형광 이미징 (피오나)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

고해상도 시간 경과 이미징 및 생활 인간 제대 정맥 내피 세포의 미세 소관 역학의 자동 분석

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...