Name: agrobacterium-mediated virus-induced gene silencing assay in cotton
Uploaded: 2011-08-20T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton at JoVE.com

ونحن ممتنون للالدكاترة. SP - دينيش كومار وليو لعيد ميلاد المسيح TRV - VIGS النواقل ، والدكاترة. تشوك Kenerley ، تيري ويلر ، وباير جيم ستار CropScience لتوفير بذور القطن. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جبهة الخلاص الوطني ليرة سورية والمعاهد الوطنية للصحة لPH

1. زراعة شتلات القطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بذر بذور القطن المرتفعات (الكرسف أزغب) Fibermax متنوعة 832 ، Phytogen 425RF ، 480WR Phytogen وDeltapine 90 في القدور (7 سم في القطر) التي تحتوي على مزيج مترو 700 (SunGR ، Beavile ، WA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الأواني في ص?...

<ol>
	<li>Chen, Z. J., Scheffler, B. E., Dennis, E., Triplett, B. A., Zhang, T., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+sequencing+cotton+(Gossypium)+genomes.">Toward sequencing cotton (Gossypium) genomes.</a> Plant Physiol. 145, 1303-1310 (2007).</li><li>Dinesh-Kumar, S. P., Anandalakshmi, R., Marathe, R., Schiff, M., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-induced+gene+silencing.">Virus-induced gene silencing.</a> Methods Mol Biol. 236, 287-294 (2003).</li><li>Hamilton, A. J., Baulcombe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+species+of+small+antisense+RNA+in+posttranscriptional+gene+silencing+in+plants.">A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants.</a> Science. 286, 950-952 (1999).</li><li>Burch-Smith, T. M., Anderson, J. C., Martin, G. B., Dinesh-Kumar, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+and+advantages+of+virus-induced+gene+silencing+for+gene+function+studies+in+plants.">Applications and advantages of virus-induced gene silencing for gene function studies in plants.</a> Plant J. 39, 734-746 (2004).</li><li>Liu, Y., Schiff, M., Dinesh-Kumar, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-induced+gene+silencing+in+tomato.">Virus-induced gene silencing in tomato.</a> Plant J. 31, 777-786 (2002).</li><li>Estevez, J. M., Cantero, A., Romero, C., Kawaide, H., Jimenez, L. F., Kuzuyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+expression+of+CLA1,+a+gene+that+encodes+the+1-deoxyxylulose+5-phosphate+synthase+of+the+2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate+pathway+in+Arabidopsis.">Analysis of the expression of CLA1, a gene that encodes the 1-deoxyxylulose 5-phosphate synthase of the 2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate pathway in Arabidopsis.</a> Plant Physiol. 124, 95-104 (2000).</li><li>Mandel, M. A., Feldmann, K. A., Herrera-Estrella, L., Rocha-Sosa, M., Leon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLA1,+a+novel+gene+required+for+chloroplast+development,+is+highly+conserved+in+evolution.">CLA1, a novel gene required for chloroplast development, is highly conserved in evolution.</a> Plant J. 9, 649-658 (1996).</li><li>Gao, X., Wheeler, T., Li, Z., Kenerley, C., He, P., Shan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+GhNDR1+and+GhMKK2+compromised+cotton+resistance+to+Verticillium+wilt.">Silencing GhNDR1 and GhMKK2 compromised cotton resistance to Verticillium wilt.</a> Plant J. 66, 293-305 (2011).</li></ol>

وقد ثبت VIGS أن تكون أداة قوية في مجال تحليل الجينوم الوظيفي عابر يطرق باستمرار التعبير عن الجينات المحلية. في هذه الدراسة ، قمنا بتطوير VIGS الأجرعية بوساطة من خلال استخدام ناقل ثنائي TRV مقرا لها. وقد وضعت القطن CLA1 (GrCLA1) كعلامة الجينات البصرية لمراقبة كفاءة إسكات. لق?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم الكواشف والمعدات </th><th> شركة </th><th> كتالوج / الرقم التسلسلي </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> الأسطوانة أسطوانة </td><td> غلاس كولونيل ، ذ. </td><td> 099A TC108 </td><td> بكتيريا الثقافة الزراعية </td></tr><tr><td> حاضنة </td><td> شيلدون التصنيع ، وشركة </td><td> 01046209 </td><td> بكتيريا الثقافة الزراعية </td></tr><tr><td> الأشعة فوق البنفسجية / فيس معمل </td><td> بيكمان كولتر </td><td> نموذج : DU530 </td><td> قياس OD </td></tr><tr><td> الجينات بولسير </td><td> BioRad </td><td> نموذج : 1652076 ؛ المسلسل : 154BR3880 </td><td> Electroporation </td></tr><tr><td> بولسير المراقب </td><td> BioRad </td><td> نموذج : 1652098 ؛ المسلسل : 232BR4833 </td><td> Electroporation </td></tr><tr><td> Micropulser Electroporation كفيت </td><td> BioRad </td><td> 165-2081 </td><td> Electroporation </td></tr><tr><td> 1 مل الحقنة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 30962 </td><td> تلقيح الزراعية بكتيريا </td></tr><tr><td> المترو ميكس 700 </td><td> SUNGR </td><td> SKU # 553001 </td><td> تزايد الشتلات </td></tr><tr><td> تيرا كوتا وعاء </td><td> TOPlastics </td><td> GPS 3001B2 </td><td> تزايد الشتلات </td></tr><tr><td> MES مونوهيدرات </td><td> USB </td><td> 18886 </td><td> تسلل العازلة </td></tr><tr><td> Acetosyringone </td><td> سيغما </td><td> D134406 </td><td> تسلل العازلة </td></tr></tbody></table>

agrobacterium-mediated virus-induced gene silencing assay in cotton

القطن (الكرسف أزغب) هي واحدة من أهم المحاصيل في جميع أنحاء العالم. وقد بذلت جهود كبيرة في مجال تربية الجزيئية لأصناف جديدة. وقد تخلفت التحليل الجيني على نطاق واسع وظيفية في القطن وراء معظم الأنواع النباتية الحديث ، على الأرجح بسبب حجمه كبير من الجينات الوراثية من الازدواجية وتعدد الصيغ الصبغية ، طويل دورة النمو والتحول الجيني لتمردات 1. لتسهيل سرعة وظيفية عالية الدراسة الجينية / الجينومية في القطن ، ونحن نحاول تطوير المقايسات عابرة سريعة وفعالة لتقييم وظائف الجينات القطن. الفيروس المستحثة إسكات الجينات (VIGS) هي تقنية قوية التي تم تطويرها استنادا على المضيف بعد الترانسكربتي إسكات الجينات (PTGS) لقمع الانتشار الفيروسي 2،3. وقد الأجرعية بوساطة VIGS تطبيقها بنجاح في مجموعة واسعة من الأنواع مثل dicots الباذنجانية ، وأنواع البقول Arabidopsis ، والفلقة الأنواع بما في ذلك القمح والشعير والذرة ، لمختلف الدراسات الجينومية الوظيفية 3،4. حيث أن هذا النهج السريع والفعال يتجنب التحول النبات ويتغلب التكرار وظيفية ، ولا سيما انها جذابة ومناسبة للدراسة الجينوم الوظيفي في أنواع المحاصيل مثل القطن غير قابلة للتحول. في هذه الدراسة ، فإننا تقرير مفصل لنظام بروتوكول VIGS الأجرعية بوساطة في القطن. بين النواقل الفيروسية VIGS عدة ، وسمع دوي فيروس التبغ (TRV) يغزو مجموعة واسعة من المضيفين وغير قادرة على الانتشار في جميع أنحاء بقوة كامل انتاج المصنع بعد أعراض خفيفة على hosts5. لرصد مدى كفاءة إسكات ، GrCLA1 ​​، وهو الجين homolog من Cloroplastos Arabidopsis alterados 1 الجين (AtCLA1) في القطن ، تم استنساخ وإدراجها في ناقلات ثنائية VIGS pYL156. CLA1 الجين يشارك في عملية التنمية بلاستيدات الخضراء 6 ، ودراسات سابقة قد أظهرت أن أدت الخسارة من وظيفة من AtCLA1 في النمط الظاهري على الأوراق البيضاء 7 صحيحا ، وتوفير علامة بصرية ممتازة لإسكات الكفاءة. في حوالي أسبوعين آخر الأجرعية تسلل ، بدأ النمط الظاهري البيضاء لتظهر على الأوراق الحقيقية ، مع إسكات كفاءة 100 ٪ في جميع التجارب منسوخة. وأكد أيضا على إسكات الجينات الذاتية التي كتبها RT - PCR التحليل. إلى حد كبير ، يمكن أن تحدث أكثر قدرة في إسكات جميع أصناف اختبرناها ، بما في ذلك مختلف أصناف تزرع تجاريا في تكساس. هذا الفحص السريع والفعال VIGS الأجرعية بوساطة يوفر أداة قوية جدا لتحليل واسع النطاق السريع وظائف الجينات في الجينوم واسعة في مستوى القطن.

Watch this Scientific Journal Video about Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton at JoVE.com

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

نقدم بروتوكول مفصلة لالأجرعية بوساطة الجينات التي يسببها فيروس مقايسة (VIGS) في إسكات القطن. تم نشر فيروس حشرجة التبغ (TRV) المشتقة VIGS ناقلات للحث على الحمض النووي الريبي إسكات من القطن GrCLA1 ​​، Cloroplastos alterados 1 الجينات. وقد لوحظ النمط الظاهري البيضاء التي يسببها إسكات GrCLA1 ​​في مرحلة الشتلات في حدود 2 أسابيع بعد التلقيح.

الأجرعية بوساطة الفيروسات إسكات الجينات المستحثة الفحص في القطن

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

Research

JoVE Journal

Biology

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

فيروس من صنع جين إسكات (VIGS) في نيكوتيانا benthamiana والطماطم

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

يعيش التصوير الكالسيوم الخلية المشتركة مع وساطة سيرنا إسكات الجينات يحدد كا 2 + قنوات تسرب في غشاء ER وآلياتها التنظيمية

In mammalian cells, the endoplasmic reticulum (ER) plays a key role in protein biogenesis as well as in calcium signalling1. The heterotrimeric Sec61 ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

عزلة البروتينية ريبوسوم الوليدة منضم<em&gt; في المختبر</em&gt; لتحديد المواقع وقفة بالحركة على طول مرنا

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

باستخدام SecM تسلسل توقيف كأداة لعزل البروتينية منضم ريبوسوم

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

الأمثل والاستفادة من<em&gt; الأجرعية</em&gt; بوساطة إنتاج بروتين عابر في<em&gt; نيكوتيانا</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Chitosan/Interfering RNA Nanoparticle Mediated Gene Silencing in Disease Vector Mosquito Larvae

الشيتوزان / التدخل RNA الجسيمات النانوية وساطة جين إسكات في الأمراض ناقل يرقات البعوض

Vector mosquitoes inflict more human suffering than any other organism&#8212;and kill more than one million people each year. The mosquito genome projects ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

تقييم المغزل الانتصافي في ماوس البويضات التي كتبها بوساطة سيرنا إسكات

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

Silencing the Spark: CRISPR/Cas9 Genome Editing in Weakly Electric Fish

إسكات شراره: CRISPR/كاس 9 الجينوم التحرير في الأسماك الكهربائية ضعيف

Electroreception and electrogenesis have changed in the evolutionary history of vertebrates. There is a striking degree of convergence in these ...

Agrobacterium-Mediated Immature Embryo Transformation of Recalcitrant Maize Inbred Lines Using Morphogenic Genes

Agrobacterium-Mediated Immature Embryo Transformation of Recalcitrant Maize Inbred Lines Using Morphogenic Genes

البكتريا الزراعية-بوساطة تحويل الجنين غير الناضج من خطوط الذرة المستعبدة المستنعين باستخدام الجينات المورجينية

Demonstrated here is a detailed protocol for Agrobacterium-mediated genetic transformation of maize inbred lines using morphogenic genes Baby boom (Bbm) ...

Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation, Transgenic Production, and Its Application for the Study of Male Reproductive Development in Rice

Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation, Transgenic Production, and Its Application for the Study of Male Reproductive Development in Rice

البكتيريا الزراعية-بوساطة التحول الجيني، وإنتاج تحويل الجينات، وتطبيقها لدراسة التنمية الإنجابية للذكور في الأرز

Male sterility is an important agronomic trait for hybrid seed production that is usually characterized by functional defects in male reproductive ...