Name: biochemical measurement of neonatal hypoxia
Uploaded: 2011-08-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia at JoVE.com

ويتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NR011209 R01 - 03

1. جمع العينات ومعالجتها <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع عينات من الدم في أنبوب K3E 6ml K3 EDTA وهو يحرص على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غضون 2 دقيقة من جمع وأجهزة الطرد المركزي العينة بنسبة 4 في 1500 ز لمدة 10 دقيقة درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;dire...

<ol>
	<li>Harkness, R. A., Whitelaw, A. G., Simmonds, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrapartum+hypoxia:+the+association+between+neurological+assessment+of+damage+and+abnormal+excretion+of+ATP+metabolites.">Intrapartum hypoxia: the association between neurological assessment of damage and abnormal excretion of ATP metabolites.</a> J Clin Pathol. 35, 999-1007 (1982).</li><li>Shalak, L., Perlman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic-ischemic+brain+injury+in+the+term+infant-current+concepts.">Hypoxic-ischemic brain injury in the term infant-current concepts.</a> Early Hum Dev. 80, 125-141 (2004).</li><li>Webster, W. S., Abela, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+hypoxia+in+development.">The effect of hypoxia in development.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 81, 215-228 (2007).</li><li>Engerson, T. D., McKelvey, T. G., Rhyne, D. B., Boggio, E. B., Snyder, S. J., Jones, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+xanthine+dehydrogenase+to+oxidase+in+ischemic+rat+tissues.">Conversion of xanthine dehydrogenase to oxidase in ischemic rat tissues.</a> J Clin Invest. 79, 1564-1570 (1987).</li><li>Choi, E. Y., Stockert, A. L., Leimkuhler, S., Hille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+mechanism+of+action+of+xanthine+oxidase.">Studies on the mechanism of action of xanthine oxidase.</a> J Inorg Biochem. 98, 841-848 (2004).</li><li>Godber, B. L., Schwarz, G., Mendel, R. R., Lowe, D. J., Bray, R. C., Eisenthal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+human+xanthine+oxidoreductase:+the+enzyme+is+grossly+deficient+in+molybdenum+and+substantially+deficient+in+iron-sulphur+centres.">Molecular characterization of human xanthine oxidoreductase: the enzyme is grossly deficient in molybdenum and substantially deficient in iron-sulphur centres.</a> Biochem J. 388, 501-508 (2005).</li><li>Gruber, J., Tang, S. Y., Jenner, A. M., Mudway, I., Blomberg, A., Behndig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allantoin+in+human+plasma,+serum,+and+nasal-lining+fluids+as+a+biomarker+of+oxidative+stress:+avoiding+artifacts+and+establishing+real+in+vivo+concentrations.">Allantoin in human plasma, serum, and nasal-lining fluids as a biomarker of oxidative stress: avoiding artifacts and establishing real in vivo concentrations.</a> Antioxid Redox Signal. 11, 1767-1776 (2009).</li><li>Zitnanova, I., Korytar, P., Aruoma, O. I., Sustrova, M., Garaiova, I., Muchova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uric+acid+and+allantoin+levels+in+Down+syndrome:+antioxidant+and+oxidative+stress+mechanisms?.">Uric acid and allantoin levels in Down syndrome: antioxidant and oxidative stress mechanisms?.</a> Clin Chim Acta. 341, 139-146 (2004).</li><li>Siciarz, A., Weinberger, B., Witz, G., Hiatt, M., Hegyi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+thiobarbituric+acid-reacting+substances+as+potential+biomarkers+of+intrauterine+hypoxia.">Urinary thiobarbituric acid-reacting substances as potential biomarkers of intrauterine hypoxia.</a> Arch Pediatr Adolesc Med. 155, 718-722 (2001).</li><li>Buonocore, G., Perrone, S., Longini, M., Terzuoli, L., Bracci, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+hydroperoxide+and+advanced+oxidation+protein+products+in+preterm+hypoxic+babies.">Total hydroperoxide and advanced oxidation protein products in preterm hypoxic babies.</a> Pediatr Res. 47, 221-224 (2000).</li><li>Berne, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+nucleotides+in+hypoxia:+possible+role+in+regulation+of+coronary+blood+flow.">Cardiac nucleotides in hypoxia: possible role in regulation of coronary blood flow.</a> Am J Physiol. 204, 317-322 (1963).</li><li>Harkness, R. A., Lund, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+concentrations+of+hypoxanthine,+xanthine,+uridine+and+inosine:+high+concentrations+of+the+ATP+metabolite,+hypoxanthine,+after+hypoxia.">Cerebrospinal fluid concentrations of hypoxanthine, xanthine, uridine and inosine: high concentrations of the ATP metabolite, hypoxanthine, after hypoxia.</a> J Clin Pathol. 36, 1-8 (1983).</li><li>Plank, M. S., Boskovic, D. S., Sowers, L. C., Angeles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+markers+of+neonatal+hypoxia.">Biochemical markers of neonatal hypoxia.</a> Pediatric Health. 2, 485-501 (2008).</li><li>Cighetti, G., Allevi, P., Anastasia, L., Bortone, L., Paroni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+methyl+malondialdehyde+as+an+internal+standard+for+malondialdehyde+detection:+validation+by+isotope-dilution+gas+chromatography-mass+spectrometry.">Use of methyl malondialdehyde as an internal standard for malondialdehyde detection: validation by isotope-dilution gas chromatography-mass spectrometry.</a> Clin Chem. 48, 2266-2269 (2002).</li><li>Paroni, R., Fermo, I., Cighetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+methyl+malondialdehyde+as+internal+standard+for+malondialdehyde+detection+by+capillary+electrophoresis.">Validation of methyl malondialdehyde as internal standard for malondialdehyde detection by capillary electrophoresis.</a> Anal Biochem. 307, 92-98 (2002).</li><li>Cighetti, G., Debiasi, S., Ciuffreda, P., Allevi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-ethoxyacrolein+contamination+increases+malondialdehyde+inhibition+of+milk+xanthine+oxidase+activity.">Beta-ethoxyacrolein contamination increases malondialdehyde inhibition of milk xanthine oxidase activity.</a> Free Radic Biol Med. 25, 818-825 (1998).</li><li>Cighetti, G., Debiasi, S., Paroni, R., Allevi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+and+total+malondialdehyde+assessment+in+biological+matrices+by+gas+chromatography-mass+spectrometry:+what+is+needed+for+an+accurate+detection.">Free and total malondialdehyde assessment in biological matrices by gas chromatography-mass spectrometry: what is needed for an accurate detection.</a> Anal Biochem. 266, 222-229 (1999).</li><li>Yamamoto, T., Moriwaki, Y., Takahashi, S., Tsutsumi, Z., Yamakita, J., Nasako, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+human+plasma+xanthine+oxidase+activity+by+high-performance+liquid+chromatography.">Determination of human plasma xanthine oxidase activity by high-performance liquid chromatography.</a> J Chromatogr B Biomed Appl. 681, 395-400 (1996).</li><li>Fasman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Biochemistry and Molecular Biology. , (1988).</li><li>Chen, X. B., Calder, A. G., Prasitkusol, P., Kyle, D. J., Jayasuriya, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+15N+isotopic+enrichment+and+concentrations+of+allantoin+and+uric+acid+in+urine+by+gas+chromatography/mass+spectrometry.">Determination of 15N isotopic enrichment and concentrations of allantoin and uric acid in urine by gas chromatography/mass spectrometry.</a> J Mass Spectrom. 33, 130-137 (1998).</li></ol>

وصفت وسائل تسمح هنا تقييم نقص التروية نقص الأكسجة الولدان. هذا البروتوكول يجمع بين قياسات علامات الحرمان (ATP) والطاقة ، والاكسدة ، والضرر التأكسدي ، ونشاط انزيم للحصول على صورة شاملة للوجود البيوكيميائية أو حتى درجة من نقص تروية ميتة. على الرغم من جدوى هذا الأسلوب ، و?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> 6ml K3E أنبوب EDTA K3 </td><td> فيشر العلمية </td><td> 2204061 </td><td></td></tr><tr><td> 5702R الطرد المركزي </td><td> فيشر العلمية </td><td> 05413319 </td><td> مع 13 و محول 16MM </td></tr><tr><td> 1.5ml microcentrifuge أنبوب </td><td> الولايات المتحدة الأمريكية والعلم </td><td> 1615-5599 </td><td></td></tr><tr><td> 2 - Aminopurine </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A3509 </td><td></td></tr><tr><td> فاريان كاري معمل 100 </td><td> Agilant تكنولوجيز </td><td> 0010071500 </td><td></td></tr><tr><td> موهوب SpeedVac </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SC210A - 115 </td><td></td></tr><tr><td> جهاز الطرد المركزي فلتر ميكرون </td><td> فيشر العلمية </td><td> UFC501596 </td><td></td></tr><tr><td> Supelcosil LC - 18 - S العمود </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 58931 </td><td></td></tr><tr><td> Supelcosil LC - 18 - S Supelguard وحامل خرطوشة </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 59629 </td><td></td></tr><tr><td> HPLC </td><td> مياه </td><td></td><td></td></tr><tr><td> هذه النماذج فيال </td><td> فيشر العلمية </td><td> 03376607 </td><td></td></tr><tr><td> DL - آلانتوين C - 5 -13 (1) ؛ -15 N </td><td> CDN نظائر </td><td> M - 2307 </td><td> # الكثير L340P9 </td></tr><tr><td> MTBSTFA </td><td> الحرارية العلمية </td><td> 48920 </td><td></td></tr><tr><td> بيريدين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 270970 </td><td></td></tr><tr><td> 5973E GC / MSD </td><td> اجيلنت تكنولوجيز </td><td> G7021A </td><td> جزء # ل5975E GC / MS </td></tr><tr><td> 3 Ethoxymethacrolein </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 232548 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> سيغما الدريخ </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> ثنائي كلورو ميثان </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 270997 </td><td></td></tr><tr><td> البنزين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 401765 </td><td></td></tr><tr><td> Diisopropyl الأثير </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 38270 </td><td></td></tr><tr><td> BHT </td><td> سيغما الدريخ </td><td> B1378 </td><td></td></tr><tr><td> الإيثانول </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 459844 </td><td></td></tr><tr><td> الفينيل هيدرازين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P26252 </td><td></td></tr></tbody></table>

biochemical measurement of neonatal hypoxia

وتتميز الوليدية الإسكيمية نقص الأكسجين التي نضح الدم غير كافية من الأنسجة أو عدم نظامية من الأوكسجين. ويعتقد أن هذا الشرط لسبب / تفاقم الاضطرابات الولدان موثقة جيدا بما في ذلك إعاقة للجهاز العصبي 1-3. انخفض انتاج الأدينوساين ثلاثي يحدث نتيجة لنقص في الفسفرة المؤكسدة. للتعويض عن هذه الجزيئات التي تحتوي على طاقة عالية حرمان الدولة سندات الفوسفات الطاقة هي 2 المتدهورة. هذا يؤدي إلى زيادة مستويات الأدينوساين الذي تدهورت لاحقا إينوزين ، هيبوزانتين ، الزانثين ، وأخيرا إلى حمض اليوريك. يتم تنفيذ المرحلتين الأخيرتين في هذه العملية من قبل تدهور oxidoreductase الزانثين. هذا الانزيم موجود في شكل هيدروجين الزانثين في ظل ظروف normoxic ولكن يتم تحويلها إلى أوكسيديز الزانثين (XO) تحت ظروف نقص الأكسجين ضخه - 4 ، 5. خلافا نازعة الزانثين ، XO يولد بيروكسيد الهيدروجين كمنتج ثانوي للتدهور البيورين 4 ، 6. هذا بيروكسيد الهيدروجين في الجمع مع غيرها من أنواع الاكسجين التفاعلية (ريوس) التي تنتج أثناء نقص الأكسجين ، يتأكسد حمض اليوريك لتشكيل آلانتوين ويتفاعل مع الأغشية الدهنية لتوليد malondialdehyde (MDA) 7-9 ، ومعظم الثدييات ، البشر المعفاة ، تمتلك يوريكاز الانزيم الذي يحول إلى حمض اليوريك آلانتوين. في البشر ، ومع ذلك ، لا يمكن إلا أن يكون شكلتها آلانتوين ريوس بوساطة أكسدة حمض اليوريك. وبسبب هذا ، يعتبر آلانتوين أن يكون علامة من الاكسدة في البشر ، ولكن ليس في الثدييات التي لديها يوريكاز. نحن تصف أساليب توظيف ارتفاع ضغط اللوني السائل (HPLC) والغاز اللوني الطيف الكتلي (نماذج الدوران) لقياس العلامات الحيوية من نقص التروية نقص الأكسجين الوليدي ، ويستخدم الدم البشرية لمعظم الاختبارات. ويمكن أيضا أن تستخدم دم الحيوان مع الاعتراف احتمال يوريكاز المولدة آلانتوين. وترتبط الأيضات البيورين إلى نقص الأكسجين في وقت مبكر عام 1963 وموثوقية هيبوزانتين ، الزانثين ، وجرى التحقق من حمض اليوريك كمؤشرات البيوكيميائية حديثي الولادة من نقص الأكسجة المحققون عدة 10-13. طريقة HPLC المستخدمة في القياس الكمي للمركبات البيورين سريعة وموثوق بها ، وقابلة للتكرار. تم تعديل طريقة GC / MS المستخدمة في القياس الكمي للآلانتوين ، علامة جديدة نسبيا من الاكسدة ، وآخرون من غروبر 7. هذا الأسلوب يتجنب بعض التحف ويتطلب كميات منخفضة من العينة. ووصف الأساليب المستخدمة لتوليف MMDA في أماكن أخرى 14 و 15. تم تكييفها GC / MS الكمي القائم على نجمة داود الحمراء من Paroni وآخرون. وCighetti آخرون 16 و 17. تم قياس النشاط أوكسيديز الزانثين بواسطة HPLC عن طريق قياس تحويل تيرين isoxanthopterin إلى 18. أثبت هذا النهج لتكون حساسة بما فيه الكفاية وقابلة للتكرار.

Watch this Scientific Journal Video about Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia at JoVE.com

Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia

تم وصف طريقة لقياس علامات الحيوية في الأطفال حديثي الولادة نقص الأكسجين ، نقص التروية. هذا النهج يستخدم ارتفاع ضغط اللوني السائل (HPLC) واللوني للغاز طيف الكتلة (GC / MS).

البيوكيميائية قياس حديثي الولادة نقص الأكسجة

Neonatal hypoxia ischemia is characterized by inadequate blood perfusion of a tissue or a systemic lack of oxygen. This condition is thought to ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

نموذج الخنازير من الاختناق الوليدي

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

نموذج الفأر من MCAO داخل اللمعة: الدماغي التقييم عائق من قبل تلوين البنفسج الكريزيل

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

غير الغازية قياس بصري من الأيض الدماغي وديناميكا الدم في الأطفال الرضع

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

جمع وقياس وسطاء الافرازات الكيميائية الحيوية في الجرح الجروح الجراحية

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

في قياس الرحم من معدل ضربات القلب في الماوس بواسطة موسع M-وضع ضربات القلب

Congenital heart disease (CHD) is the most frequent noninfectious cause of death at birth. The incidence of CHD ranges from 4 to 50/1,000 births (Disease ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

A الخنزير الصغير نموذج من الأطفال حديثي الولادة نقص الأوكسجين، اعتلال الدماغ الإقفاري

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Simultaneous PET/MRI Imaging During Mouse Cerebral Hypoxia-ischemia

في وقت واحد التصوير PET / MRI خلال الماوس الدماغي نقص الأكسجة-نقص التروية

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

A السكتة الدماغية نموذج الخثاري بناء على عابر الدماغي نقص الأكسجة-نقص التروية

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

النمذجة دماغي من الولادة المبكرة قبل الولادة عن طريق نقص الأكسجة-نقص التروية مع lipopolysaccharide في البينية الذي يحيط بالجنين في الفئران

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...