Name: biochemical measurement of neonatal hypoxia
Uploaded: 2011-08-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia at JoVE.com

Bu çalışma Ulusal Sağlık R01 NR011209-03 Enstitüleri tarafından finanse edilmektedir

1. Örnek Toplama ve İşleme <ol><li> Buz üzerinde tutulmalıdır 6ml K3E EDTA K3 tüp kan örneği toplayın. </li><li> 2 dakika içinde toplama, 4 örnek santrifüj ° C 1500 g de 10 dk. </li><li> 1.5ml mikrosantrifüj tüp supernatant (plazma) aktarın. </li><li> 18000 g de 30 dakika süreyle 4 ° C&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Supernatant alikotları çıkarın ve pürin (200μl), allantoin (50μl), MDA (100μl) ve XO (120μl) analizi için ayrı mikrosantrifüj tüpler içine aktarabilirsiniz. Örnekleri, ...

<ol>
	<li>Harkness, R. A., Whitelaw, A. G., Simmonds, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrapartum+hypoxia:+the+association+between+neurological+assessment+of+damage+and+abnormal+excretion+of+ATP+metabolites.">Intrapartum hypoxia: the association between neurological assessment of damage and abnormal excretion of ATP metabolites.</a> J Clin Pathol. 35, 999-1007 (1982).</li><li>Shalak, L., Perlman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxic-ischemic+brain+injury+in+the+term+infant-current+concepts.">Hypoxic-ischemic brain injury in the term infant-current concepts.</a> Early Hum Dev. 80, 125-141 (2004).</li><li>Webster, W. S., Abela, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+hypoxia+in+development.">The effect of hypoxia in development.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 81, 215-228 (2007).</li><li>Engerson, T. D., McKelvey, T. G., Rhyne, D. B., Boggio, E. B., Snyder, S. J., Jones, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+xanthine+dehydrogenase+to+oxidase+in+ischemic+rat+tissues.">Conversion of xanthine dehydrogenase to oxidase in ischemic rat tissues.</a> J Clin Invest. 79, 1564-1570 (1987).</li><li>Choi, E. Y., Stockert, A. L., Leimkuhler, S., Hille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+mechanism+of+action+of+xanthine+oxidase.">Studies on the mechanism of action of xanthine oxidase.</a> J Inorg Biochem. 98, 841-848 (2004).</li><li>Godber, B. L., Schwarz, G., Mendel, R. R., Lowe, D. J., Bray, R. C., Eisenthal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+human+xanthine+oxidoreductase:+the+enzyme+is+grossly+deficient+in+molybdenum+and+substantially+deficient+in+iron-sulphur+centres.">Molecular characterization of human xanthine oxidoreductase: the enzyme is grossly deficient in molybdenum and substantially deficient in iron-sulphur centres.</a> Biochem J. 388, 501-508 (2005).</li><li>Gruber, J., Tang, S. Y., Jenner, A. M., Mudway, I., Blomberg, A., Behndig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allantoin+in+human+plasma,+serum,+and+nasal-lining+fluids+as+a+biomarker+of+oxidative+stress:+avoiding+artifacts+and+establishing+real+in+vivo+concentrations.">Allantoin in human plasma, serum, and nasal-lining fluids as a biomarker of oxidative stress: avoiding artifacts and establishing real in vivo concentrations.</a> Antioxid Redox Signal. 11, 1767-1776 (2009).</li><li>Zitnanova, I., Korytar, P., Aruoma, O. I., Sustrova, M., Garaiova, I., Muchova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uric+acid+and+allantoin+levels+in+Down+syndrome:+antioxidant+and+oxidative+stress+mechanisms?.">Uric acid and allantoin levels in Down syndrome: antioxidant and oxidative stress mechanisms?.</a> Clin Chim Acta. 341, 139-146 (2004).</li><li>Siciarz, A., Weinberger, B., Witz, G., Hiatt, M., Hegyi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+thiobarbituric+acid-reacting+substances+as+potential+biomarkers+of+intrauterine+hypoxia.">Urinary thiobarbituric acid-reacting substances as potential biomarkers of intrauterine hypoxia.</a> Arch Pediatr Adolesc Med. 155, 718-722 (2001).</li><li>Buonocore, G., Perrone, S., Longini, M., Terzuoli, L., Bracci, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+hydroperoxide+and+advanced+oxidation+protein+products+in+preterm+hypoxic+babies.">Total hydroperoxide and advanced oxidation protein products in preterm hypoxic babies.</a> Pediatr Res. 47, 221-224 (2000).</li><li>Berne, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+nucleotides+in+hypoxia:+possible+role+in+regulation+of+coronary+blood+flow.">Cardiac nucleotides in hypoxia: possible role in regulation of coronary blood flow.</a> Am J Physiol. 204, 317-322 (1963).</li><li>Harkness, R. A., Lund, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+concentrations+of+hypoxanthine,+xanthine,+uridine+and+inosine:+high+concentrations+of+the+ATP+metabolite,+hypoxanthine,+after+hypoxia.">Cerebrospinal fluid concentrations of hypoxanthine, xanthine, uridine and inosine: high concentrations of the ATP metabolite, hypoxanthine, after hypoxia.</a> J Clin Pathol. 36, 1-8 (1983).</li><li>Plank, M. S., Boskovic, D. S., Sowers, L. C., Angeles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+markers+of+neonatal+hypoxia.">Biochemical markers of neonatal hypoxia.</a> Pediatric Health. 2, 485-501 (2008).</li><li>Cighetti, G., Allevi, P., Anastasia, L., Bortone, L., Paroni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+methyl+malondialdehyde+as+an+internal+standard+for+malondialdehyde+detection:+validation+by+isotope-dilution+gas+chromatography-mass+spectrometry.">Use of methyl malondialdehyde as an internal standard for malondialdehyde detection: validation by isotope-dilution gas chromatography-mass spectrometry.</a> Clin Chem. 48, 2266-2269 (2002).</li><li>Paroni, R., Fermo, I., Cighetti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+methyl+malondialdehyde+as+internal+standard+for+malondialdehyde+detection+by+capillary+electrophoresis.">Validation of methyl malondialdehyde as internal standard for malondialdehyde detection by capillary electrophoresis.</a> Anal Biochem. 307, 92-98 (2002).</li><li>Cighetti, G., Debiasi, S., Ciuffreda, P., Allevi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-ethoxyacrolein+contamination+increases+malondialdehyde+inhibition+of+milk+xanthine+oxidase+activity.">Beta-ethoxyacrolein contamination increases malondialdehyde inhibition of milk xanthine oxidase activity.</a> Free Radic Biol Med. 25, 818-825 (1998).</li><li>Cighetti, G., Debiasi, S., Paroni, R., Allevi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+and+total+malondialdehyde+assessment+in+biological+matrices+by+gas+chromatography-mass+spectrometry:+what+is+needed+for+an+accurate+detection.">Free and total malondialdehyde assessment in biological matrices by gas chromatography-mass spectrometry: what is needed for an accurate detection.</a> Anal Biochem. 266, 222-229 (1999).</li><li>Yamamoto, T., Moriwaki, Y., Takahashi, S., Tsutsumi, Z., Yamakita, J., Nasako, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+human+plasma+xanthine+oxidase+activity+by+high-performance+liquid+chromatography.">Determination of human plasma xanthine oxidase activity by high-performance liquid chromatography.</a> J Chromatogr B Biomed Appl. 681, 395-400 (1996).</li><li>Fasman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Biochemistry and Molecular Biology. , (1988).</li><li>Chen, X. B., Calder, A. G., Prasitkusol, P., Kyle, D. J., Jayasuriya, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+15N+isotopic+enrichment+and+concentrations+of+allantoin+and+uric+acid+in+urine+by+gas+chromatography/mass+spectrometry.">Determination of 15N isotopic enrichment and concentrations of allantoin and uric acid in urine by gas chromatography/mass spectrometry.</a> J Mass Spectrom. 33, 130-137 (1998).</li></ol>

Burada açıklanan yöntemler neonatal hipoksi iskemi değerlendirme izin. Bu protokol, varlığı bile genel bir biyokimyasal resim veya hipoksik iskemi derecesi kazanmak için enerji (ATP) yoksunluk, oksidatif stres, oksidatif hasarı ve enzim aktivitesi ölçümleri belirteçleri bir araya getiriyor. Bu yöntemin yararlarına rağmen, potansiyel sınırlamalar vardır. Öncelikle, tüm testleri çalıştırmak için yeterli plazma toplamak için yaklaşık 1-2 ml kan alır. Bu, yetişkin ya da çocuk bir sorun olmaz,...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> 6ml K3E EDTA K3 tüp </td><td> Fisher Scientific </td><td> 2204061 </td><td></td></tr><tr><td> 5702R santrifüj </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05413319 </td><td> 13 ve 16mm adaptörü ile </td></tr><tr><td> 1.5ml mikrosantrifüj tüp </td><td> ABD Bilimsel </td><td> 1615-5599 </td><td></td></tr><tr><td> 2-Aminopurine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A3509 </td><td></td></tr><tr><td> Varian Cary 100 spektrofotometre </td><td> Agilant Teknolojileri </td><td> 0010071500 </td><td></td></tr><tr><td> Savant SpeedVac </td><td> Thermo Scientific </td><td> SC210A-115 </td><td></td></tr><tr><td> Micron filtre santrifüj cihazı </td><td> Fisher Scientific </td><td> UFC501596 </td><td></td></tr><tr><td> Supelcosil LC-18-S Sütun </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 58931 </td><td></td></tr><tr><td> Supelcosil LC-18-S Supelguard kartuş ve tutucu </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 59629 </td><td></td></tr><tr><td> HPLC </td><td> Waters </td><td></td><td></td></tr><tr><td> GCMS Flakon </td><td> Fisher Scientific </td><td> 03376607 </td><td></td></tr><tr><td> DL-Allantoin-5 -13 C, 1 -15 N </td><td> CDN izotoplar </td><td> M-2307 </td><td> Cinsiyet # L340P9 </td></tr><tr><td> MTBSTFA </td><td> Thermo Scientific </td><td> 48920 </td><td></td></tr><tr><td> Piridin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270970 </td><td></td></tr><tr><td> 5973E GC / MSD </td><td> Agilent Technologies </td><td> G7021A </td><td> # Bölüm 5975E GC / MS </td></tr><tr><td> 3-Ethoxymethacrolein </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 232548 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum hidroksit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> Diklorometan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270997 </td><td></td></tr><tr><td> Benzen </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 401765 </td><td></td></tr><tr><td> Diisopropyl eter </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 38270 </td><td></td></tr><tr><td> BHT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B1378 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 459844 </td><td></td></tr><tr><td> Phenylhydrazine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P26252 </td><td></td></tr></tbody></table>

biochemical measurement of neonatal hypoxia

Neonatal hipoksi iskemi yetersiz kan doku perfüzyon veya sistemik bir oksijen eksikliği ile karakterizedir. Bu durum neden / 1-3 nörolojik bozukluğu da dahil olmak üzere iyi belgelenmiş neonatal bozuklukları şiddetlendirebilir düşünülmektedir. Adenozin trifosfat üretiminin azalması, oksidatif fosforilasyon eksikliği nedeniyle oluşur. Bu enerji, yüksek enerjili fosfat bağının içeren yoksun devlet molekülleri telafi için bozulmuş 2 . Bu ve nihayet ürik asit, hipoksantin, ksantin inozin sonradan bozulmuş adenozin düzeylerinde artışa yol açar. Bu bozulma süreci son iki adımı ksantin oksiredüktaz tarafından yapılmaktadır. Bu enzim, normoksik koşullar altında ksantin dehidrogenaz formu var ancak hipoksi-reperfüzyon koşullar 4, 5 altında ksantin oksidaz (XO) dönüştürülür . Ksantin dehidrogenaz aksine, XO pürin bozulması 4, 6, bir yan ürün olarak hidrojen peroksit oluşturur. Hipoksi sırasında üretilen reaktif oksijen türleri (ROS), ile birlikte bu hidrojen peroksit, ürik asit, allantoin formu oksitler ve malondialdehit (MDA) 7-9 oluşturmak için lipid membranlar ile reaksiyona girer. Memeliler, çoğu insanlar muaf enzim uricase sahip allantoin, ürik asit dönüştürür. İnsanlarda, ancak, allantoin sadece ROS aracılı ürik asit oksidasyonu ile oluşan olabilir. Bu nedenle, allantoin uricase var memeliler insanlarda oksidatif stresin bir belirteci olarak kabul edilir ancak. Biz neonatal hipoksi iskemi biyokimyasal belirteçler ölçmek için yüksek basınçlı sıvı kromatografi (HPLC) ve gaz kromatografisi kütle spektrometresi (GCMS) istihdam yöntemleri açıklanmaktadır. İnsan kanı en testleri için kullanılır. Hayvan kan uricase oluşturulan allantoin için potansiyel kabul ederken de kullanılıyor olabilir. Pürin metabolitleri 1963 gibi erken olarak hipoksi ve hipoksantin, ksantin güvenilirliği ile bağlantılı olduğunu ve neonatal hipoksi biyokimyasal göstergeleri olarak ürik asit, bazı araştırmacılar 10-13 tarafından doğrulanmış oldu . Pürin bileşiklerin miktar tayini için kullanılan HPLC yöntemi, hızlı, güvenilir ve tekrarlanabilir. Allantoin, nispeten yeni bir oksidatif stres belirteci ölçümü için kullanılan GC / MS yöntemi, Gruber ve ark 7 uyarlanmıştır. Bu yöntem bazı eserler önler ve düşük miktarda örnek gerektirir. MMDA sentezi için kullanılan yöntemler, başka yerde 14 15 tarif edildi . GC / MS MDA tabanlı kantifikasyon Paroni ve ark uyarlanmıştır. Cighetti ve ark 16, 17. Ksantin oksidaz aktivitesi isoxanthopterin 18 pterin dönüşüm niceleme HPLC ile ölçüldü. Bu yaklaşım yeterince duyarlı ve tekrarlanabilir olduğunu kanıtladı.

Watch this Scientific Journal Video about Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia at JoVE.com

Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia

Neonatal hipoksi-iskemi biyokimyasal belirteçler ölçmek için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yaklaşım, yüksek basınçlı sıvı kromatografi (HPLC) ve Gaz Kromatografisi Kütle Spektrometresi (GC / MS) kullanmaktadır.

Yenidoğan Hipoksi Biyokimyasal Ölçüm

Neonatal hypoxia ischemia is characterized by inadequate blood perfusion of a tissue or a systemic lack of oxygen. This condition is thought to ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Yenidoğan Asfiksi Bir Domuz Modeli

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Bebeklerde Serebral Metabolizma ve Hemodinamiğin Noninvaziv Optik Ölçüm

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

Cerrahi Yaralar yılında Yara Eksuda Biyokimyasal Arabulucular Toplama ve Ölçme

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

Noninvaziv M-mod ekokardiyografi ile Fare Kalp Puan utero Ölçümünde

Congenital heart disease (CHD) is the most frequent noninfectious cause of death at birth. The incidence of CHD ranges from 4 to 50/1,000 births (Disease ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Ensefalopati A Piglet Modeli

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Simultaneous PET/MRI Imaging During Mouse Cerebral Hypoxia-ischemia

Fare Serebral Hipoksi-iskemi sırasında Eşzamanlı PET / MR Görüntüleme

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...