Name: lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo
Uploaded: 2011-05-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo at JoVE.com

وتدعم هذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة وDC052256 DC006015 ، وجبهة الخلاص الوطني 0324769 لQG - T32 وDC008072 لدرجة البكالوريوس.

1. إعداد هذا الإجراء هو السلامة الأحيائية المستوى 2 ، وبالتالي يتم إجراء جميع الاستعدادات التالية في غطاء بيولوجية حيث يتم تنفيذ الإجراء microinjection. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد وتسخين) أ (37 درجة مئوية ...

<ol>
	<li>Chen, H., Kohno, K., Gong, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+ablation+of+mature+olfactory+sensory+neurons+mediated+by+diphtheria+toxin+receptor.">Conditional ablation of mature olfactory sensory neurons mediated by diphtheria toxin receptor.</a> J Neurocytol. 34, 1-2 (2005).</li><li>Doi, K., Nibu, K., Ishida, H., Okado, H., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+epithelium+and+olfactory+bulb:+a+long-term+study.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory epithelium and olfactory bulb: a long-term study.</a> Ann Otol Rhinol Laryngol. 114, 629-633 (2005).</li><li>Lois, C., Hong, E. J., Pease, S., Brown, E. J., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transmission+and+tissue-specific+expression+of+transgenes+delivered+by+lentiviral+vectors.">Germline transmission and tissue-specific expression of transgenes delivered by lentiviral vectors.</a> Science. 295, 868-872 (2002).</li><li>Zhao, H., Otaki, J. M., Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+neurons+in+vivo.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory neurons in vivo.</a> J Neurobiol. 30, 521-530 (1996).</li></ol>

Microinjection النتائج الفيروسة البطيئة في نقل الجينات ثوابت دائمة في الحمض النووي الجيني OSN. هذا الأسلوب يتيح لنا تأدية معالجات قصيرة الأجل أو طويلة الأجل من الجينات عبر مرشح أو overexpression shRNA بوساطة تدق إلى أسفل. بالإضافة إلى ذلك ، يمكننا تسمية fluorescently OSNs واحد في خط الماوس الم...

Microinjection : تم microinjected الفئران حديثي الولادة باستخدام محقنة 5μL هاميلتون (هاميلتون # 7647-01) مزودة إبرة قياس 33 (هاميلتون # 7762-06). الكواشف كيمياء سيتولوجية مناعية : الأضداد الأساسي : GFP الأرنب الضد النسائل المتعددة (المسابر الجزيئية # A - 6455) ، الأجسام المضادة ضد متعدد النسائل الدجاج المرصد المغربي للسجون (المخصصة) (تشن وآخرون ، 2005) ، غينيا الخنازير الأجسام المضادة ضد متعدد النسائل VGlut2 (ميليبور # AB2251). الأجسام المضادة الثانوية : Cy2 - مترافق حمار المضادة للأرنب (جاكسون Immunolab # 711-225-152) ، حمار ، مترافق Cy3 - المضادة للدجاج (جاكسون Immunolab # 703-165-155) وCy5 مترافق الماعز المضادة للخنزير غينيا (جاكسون Immunolab # 106-175-008). وقد شنت المقاطع على الشرائح الزجاجية مع G Fluoromount (جنوب بيوتك # 0010-01) مع الحل 50ng/mL ونين دابي وصمة عار. وقد اتخذت Z - كومة الصور باستخدام المجهر أوليمبوس Flouview FV1000 مبائر والصور التي تم جمعها ومعالجتها في التوقعات 3D باستخدام أوليمبوس اقتناء 2.01 - FV10 ASW مبائر وبرامج التحليل : مبائر التصوير.

lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo

تطوير دارة الشمية دقيق يعتمد على التوقع الدقيق لمحاور عصبية حسية شمية (OSN) عصبون إلى أهدافهم متشابك في البصلة الشمية (OB). ليست هي الآليات الجزيئية للنمو واستهداف محوار OSN مفهومة جيدا. التلاعب في الجينات وتصور لاحقة من المحاور OSN واحد والتشكل على جذع محطة حتى الآن كان تحديا. لدراسة وظائف الجينات على مستوى خلية واحدة ضمن إطار زمني محدد ، قمنا بتطوير تقنية lentiviral قائم على التلاعب في الجينات OSNs في الجسم الحي. يتم تسليم الجزيئات Lentiviral لOSNs بواسطة microinjection في الظهارة الشمية (OE). ثم يتم التعبير أشرطة متكاملة بشكل دائم في جينوم OSNs transduced. الأخضر التعبير بروتين فلوري يحدد الخطوط العريضة OSNs المصابين ومورفولوجيا بكاملها ، بما في ذلك محطة جذع محور عصبي. بسبب الفترة الزمنية القصيرة بين microinjection وكشف المراسل ، يمكن أن تركز دراسات وظائف الجينات خلال فترة ضيقة جدا من التنمية. مع هذا الأسلوب ، فقد اكتشفنا التعبير GFP ضمن عدد قليل من ثلاثة أيام ، وما دامت ثلاثة أشهر بعد الحقن. لقد حققنا كل من الإفراط في التعبير وshRNA بوساطة المغلوب بنسبة microinjection lentiviral. هذا الأسلوب يوفر morphologies مفصلة الهيئات الخلية OSN والمحاور على مستوى خلية واحدة في الجسم الحي ، ويسمح بالتالي توصيف وظيفة الجين مرشح خلال تنمية حاسة الشم.

Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo at JoVE.com

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

نقدم تقنية للتلاعب الجيني lentiviral والتصور وحيدة الخلية العصبية الحسية الشمية محوار في محطة وتشجر<em&gt; في الجسم الحي</em&gt;.

الفيروسة البطيئة بوساطة التلاعب الجيني والتخيل من العصبونات الحسية الشمية في الجسم الحي</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

تحليل الردود من الخلايا العصبية الحسية الشمية ماوس باستخدام تسجيل Electroolfactogram الهواء المرحلة

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

تصوير الحية إزفاء PKC في Sf9 خلايا في الخلايا العصبية والحسية Aplysia

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

استهداف الخلايا العصبية عن طريق الجمع بين البصلة الشمية في فيفو Electroporation وGal4 محسن المستندة إلى خطوط مصيدة اسماك الزرد

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

فلاش التحلل الضوئي للمركبات محبوس في سيليا من العصبونات الحسية الشمية

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

الفيروسية تنبيغ الانتقائي للبالغين المولودين في الخلايا العصبية الشمية لالمزمنة في الجسم الحي تحفيز Optogenetic

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

التصور والتلاعب الجيني من التشعبات والاعمده الفقريه في قشرة الدماغ والحصين ماوس باستخدام<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

التلاعب الجيني للمخيخي الحبيبة الخلايا العصبية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; لدراسة مورفولوجيا الخلايا العصبية والهجرة

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

كله من جبل Immunolabeling الشم مستقبلات الخلايا العصبية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الهوائي

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

فيفو السابقين الاستعدادات للالميكعي الجهاز سليمة والإكسسوار الشم لمبة

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

مثقب تسجيل التصحيح، المشبك من الماوس العصبونات الحسية الشمية في الظهارة العصبية السليمة: التحليل الوظيفي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها إبداء الرائحة مستقبلات

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...