Name: lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo
Uploaded: 2011-05-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo at JoVE.com

इस अध्ययन DC052256 NIH और DC006015, और Qg और बी एस T32-DC008072 0324769 NSF द्वारा समर्थित है.

1. तैयार इस प्रक्रिया के लिए जैव सुरक्षा स्तर 2 है, इसलिए सभी निम्नलिखित तैयारी जहां microinjection प्रक्रिया का प्रदर्शन किया है एक biohazard हुड में बना रहे हैं. <ol><li> तैयार है और पहले से गरम करना एक 37 डिग्र...

<ol>
	<li>Chen, H., Kohno, K., Gong, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+ablation+of+mature+olfactory+sensory+neurons+mediated+by+diphtheria+toxin+receptor.">Conditional ablation of mature olfactory sensory neurons mediated by diphtheria toxin receptor.</a> J Neurocytol. 34, 1-2 (2005).</li><li>Doi, K., Nibu, K., Ishida, H., Okado, H., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+epithelium+and+olfactory+bulb:+a+long-term+study.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory epithelium and olfactory bulb: a long-term study.</a> Ann Otol Rhinol Laryngol. 114, 629-633 (2005).</li><li>Lois, C., Hong, E. J., Pease, S., Brown, E. J., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transmission+and+tissue-specific+expression+of+transgenes+delivered+by+lentiviral+vectors.">Germline transmission and tissue-specific expression of transgenes delivered by lentiviral vectors.</a> Science. 295, 868-872 (2002).</li><li>Zhao, H., Otaki, J. M., Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+neurons+in+vivo.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory neurons in vivo.</a> J Neurobiol. 30, 521-530 (1996).</li></ol>

OSN जीनोमिक डीएनए में जीन constructs की स्थायी हस्तांतरण में lentivirus परिणाम के Microinjection. यह दृष्टिकोण हमें उम्मीदवार जीनों की overexpression या shRNA मध्यस्थता दस्तक नीचे के माध्यम से अल्पकालिक या दीर्घकालिक जोड़तोड़ प्रदर्शन ?...

Microinjection: नवजात चूहों 5μL हैमिल्टन (# हैमिल्टन 7647-01) सिरिंज एक 33 गेज सुई (# हैमिल्टन 7762-06) के साथ फिट का उपयोग कर microinjected थे. Immunocytochemistry अभिकर्मकों: प्राथमिक एंटीबॉडी: खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी GFP (आण्विक जांच # A-6455), चिकन OMP (कस्टम) के खिलाफ पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (चेन एट अल, 2005), गिनी पिग VGlut2 खिलाफ पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (# Millipore AB2251) . माध्यमिक एंटीबॉडी: Cy2 संयुग्मित गधा विरोधी - खरगोश (जैक्सन Immunolab # 711-225-152), Cy3 संयुग्मित (जैक्सन Immunolab # 703-165-155) गधा - विरोधी चिकन और Cy5 संयुग्मित बकरी विरोधी गिनी सुअर (जैक्सन # Immunolab 106-175-008). धारा गिलास स्लाइड पर Fluoromount 50ng/mL DAPI chromatin दाग समाधान के साथ जी (दक्षिणी # बायोटेक 0010-01) के साथ घुड़सवार थे. Confocal इमेजिंग: Z-ढेर छवियों ओलिंप Flouview FV1000 confocal खुर्दबीन और एकत्र की है और 3 डी ओलिंप FV10 - ASW 2.01 confocal अधिग्रहण और विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर अनुमानों में संसाधित छवियों का उपयोग कर ले जाया गया.

lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo

एक सटीक घ्राण सर्किट के विकास घ्राण संवेदी न्यूरॉन घ्राण बल्ब (ओ) में उनके synaptic लक्ष्य (OSN) axons के सटीक प्रक्षेपण पर निर्भर करता है. OSN अक्षतंतु विकास और लक्ष्यीकरण के आणविक तंत्र को अच्छी तरह से समझ नहीं रहे हैं. चालाकी से जीन अभिव्यक्ति और एकल OSN axons और उनके टर्मिनल कुंज आकारिकी की visualizing के बाद इस प्रकार अब तक चुनौतीपूर्ण किया गया है. एक निर्धारित समय सीमा के भीतर एकल कोशिका के स्तर पर जीन समारोह का अध्ययन करने के लिए, हम एक lentiviral आधारित vivo में OSNs में जीन अभिव्यक्ति में हेरफेर तकनीक विकसित की है. Lentiviral कणों microinjection द्वारा घ्राण उपकला (ँ) में OSNs करने के लिए वितरित कर रहे हैं. अभिव्यक्ति कैसेट तो स्थायी रूप से कर रहे हैं transduced OSNs के जीनोम में एकीकृत है. ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन अभिव्यक्ति संक्रमित OSNs को पहचानती है और उनके अक्षतंतु टर्मिनल कुंज सहित पूरे आकारिकी, रूपरेखा. Microinjection और रिपोर्टर का पता लगाने के बीच कम प्रतिवर्तन समय के कारण, जीन समारोह के अध्ययन के विकास के एक बहुत ही संकीर्ण अवधि के भीतर ध्यान केंद्रित किया जा सकता है. इस विधि के साथ, हम के रूप में कुछ के रूप में तीन दिनों के भीतर GFP अभिव्यक्ति का पता चला है और के रूप में लंबे समय के रूप में तीन महीने के इंजेक्शन के बाद. हम दोनों अभिव्यक्ति और shRNA lentiviral microinjection नीचे दस्तक मध्यस्थता हासिल किया है. इस विधि vivo में एकल कक्ष के स्तर पर OSN सेल निकायों और axons की विस्तृत morphologies प्रदान करता है, और इस प्रकार उम्मीदवार घ्राण विकास के दौरान जीन समारोह के लक्षण वर्णन की अनुमति देता है है.

Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo at JoVE.com

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

हम आनुवंशिक और एकल घ्राण संवेदी न्यूरॉन अक्षतंतु के हेरफेर के दृश्य के लिए एक lentiviral तकनीक और अपने टर्मिनल arborization मौजूद<em&gt; Vivo में</em&gt;.

Lentivirus की मध्यस्थता जेनेटिक और घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स के हेरफेर विज़ुअलाइज़ेशन Vivo में</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

माउस घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स Electroolfactogram एयर चरण रिकॉर्डिंग का उपयोग विश्लेषण प्रतिक्रियाएँ

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Sf9 कक्ष में और Aplysia संवेदी न्यूरॉन्स में PKC स्थानान्तरण के लाइव इमेजिंग

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

लक्ष्य निर्धारण घ्राण बल्ब संयुक्त का प्रयोग न्यूरॉन्स Vivo में Electroporation और Gal4 आधार बढ़ाने जाल Zebrafish लाइन्स

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

बंदी कम्पाउँड की घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स की cilia में फ़्लैश Photolysis

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

जीर्ण के लिए वयस्क जन्म घ्राण न्यूरॉन्स के चयनात्मक वायरल transduction Vivo में Optogenetic उत्तेजना

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

और माउस मस्तिष्क प्रांतस्था और हिप्पोकैम्पस का उपयोग में Dendrites और कांटा के आनुवंशिक हेरफेर विज़ुअलाइज़ेशन<em&gt; Utero में</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स की आनुवंशिक हेरफेर<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; में Vivo</em&gt; Neuronal आकृति विज्ञान और प्रवास का अध्ययन करने के लिए

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

में घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स के पूरा पर्वत immunolabeling<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; एंटीना

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

बरकरार vomeronasal अंग और गौण घ्राण बल्ब की पूर्व vivo तैयारी

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

बरकरार neuroepithelium में माउस घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स के छिद्रित पैच दबाना रिकॉर्डिंग: एक की पहचान odorant रिसेप्टर व्यक्त न्यूरॉन्स की कार्यात्मक विश्लेषण

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...