Name: lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo
Uploaded: 2011-05-22T14:00:00
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이 연구는 NIH DC052256 DC006015하고, 그리고 QG 및 BS에 T32 - DC008072에 NSF 0,324,769에 의해 지원됩니다.

1. 준비 이 절차는 biosafety 레벨 2 따라서 다음과 같은 모든 준비는 microinjection 절차가 수행되는 생물 학적 후드에 만들어집니다. <ol><li> 준비하고 앞서 열을 가하다 37 ° C 물침 : 물로 플라스틱 저장 가방에 담아 - 비운 가열 블록 인큐베이터에 도장 및 설정합니다. 이 생쥐는 다음과 같은 주사를 복구할 수 있습니다. </li><li> 이 절차에서 모든 폐기물의 침수에 적합한 볼...

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	<li>Chen, H., Kohno, K., Gong, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+ablation+of+mature+olfactory+sensory+neurons+mediated+by+diphtheria+toxin+receptor.">Conditional ablation of mature olfactory sensory neurons mediated by diphtheria toxin receptor.</a> J Neurocytol. 34, 1-2 (2005).</li><li>Doi, K., Nibu, K., Ishida, H., Okado, H., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+epithelium+and+olfactory+bulb:+a+long-term+study.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory epithelium and olfactory bulb: a long-term study.</a> Ann Otol Rhinol Laryngol. 114, 629-633 (2005).</li><li>Lois, C., Hong, E. J., Pease, S., Brown, E. J., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transmission+and+tissue-specific+expression+of+transgenes+delivered+by+lentiviral+vectors.">Germline transmission and tissue-specific expression of transgenes delivered by lentiviral vectors.</a> Science. 295, 868-872 (2002).</li><li>Zhao, H., Otaki, J. M., Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+neurons+in+vivo.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory neurons in vivo.</a> J Neurobiol. 30, 521-530 (1996).</li></ol>

OSN의 게놈의 DNA에 유전자 구조의 영구 양도에 lentivirus 결과의 Microinjection. 이러한 접근 방식은 우리가 overexpression 또는 shRNA의 중재 노크 다운을 통해 후보 유전자의 단기 또는 장기 조작을 수행할 수 있습니다. 또한, 우리는 찬란 odorant 수용체 집단의 공동 현지화을 관찰하기 위해 기존의 유전자 변형 마우스 라인에서 단일 OSNs 레이블을하실 수 있습니다. Microinjection은 OSNs의 lentiviral 도입이 필요합?...

Microinjection : 신생아 생쥐는 33 게이지 바늘 (해밀턴 # 7762-06)가 장착되어 5μL 해밀턴 주사기 (해밀턴 # 7647-01)를 사용하여 microinjected되었습니다. Immunocytochemistry의 시약 : 차 항체 : 토끼 polyclonal 항체 GFP (분자 프로브 # A - 6455), OMP에 대한 polyclonal 항체 닭 (사용자 정의) (첸 외, 2005.) VGlut2에 대한 기니피그 polyclonal 항체 (Millipore # AB2251). 차 항체 : Cy2 - 복합 당나귀 안티 - 토끼 (잭슨 Immunolab # 711-225-152), Cy3 - 복합 당나귀 안티 - 닭고기 (잭슨 Immunolab # 703-165-155)와 Cy5 - 복합 염소 안티 기니피그 (잭슨 Immunolab # 106-175-008). 섹션이 50ng/mL DAPI 얼룩 염색질 솔루션 Fluoromount G (남부 바이오 # 0010-01)와 유리 슬라이드에 장착했다. 공촛점 이미징 : Z - 스택 이미지는 올림푸스 Flouview FV1000 공촛점 현미경과 올림푸스 FV10 - ASW 2.01 공촛점 수집 및 분석 소프트웨어를 사용하여 3 차원 투영으로 수집 및 처리 이미지를 사용하여 촬영되었다.

lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo

정확한 후각 회로의 개발은 후각 망울 (OB)에서 시냅스 대상으로 후각 감각 뉴런 (OSN) axons의 정확한 예측에 의존하고 있습니다. OSN 축삭의 성장과 대상의 분자 메커니즘이 잘 이해되지 않습니다. 조작 유전자 발현 및 단일 OSN의 axons과 터미널 아버 형태의 시각 이후는 지금까지 도전했습니다. 지정된 시간 프레임 내에 단일 세포 수준에서 유전자 기능을 연구하기 위해, 우리는 생체내에 OSNs의 유전자 발현을 조작하는 lentiviral 기반 기술을 개발했습니다. Lentiviral 입자가 후각 상피 (OE)에 microinjection하여 OSNs로 전달됩니다. 표현 카세트는 다음 영구적으로 transduced OSNs의 게놈에 통합됩니다. 그린 형광 단백질 표현이 감염된 OSNs를 식별하고 축삭 터미널 아버 포함한 전체 형태를 설명합니다. microinjection 및 기자 탐지 사이의 짧은 처리 시간으로 인해, 유전자 기능 연구 개발의 아주 좁은 기간 내에 초점을 맞추고 있습니다. 이 방법을 통해, 우리는 몇 셋처럼 일 이내에 GFP 발현을 감지하고 한 셋처럼 개월 주사를 다음과. 우리는 노크를 다운 lentiviral microinjection하여 중재를 통해 표현과 shRNA를 모두 달성했습니다. 이 방법은 생체내에있는 단일 세포 수준에서 OSN 세포 기관과 axons 자세한 morphologies을 제공하므로 후각 개발하는 동안 후보 유전자 기능의 특성을 허용합니다.

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Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

우리는 lentiviral 하나의 후각 감각 신경 세포의 축삭의 유전자 조작과 시각화를위한 기술 및 터미널 arborization을 제시<em&gt; 생체내에</em&gt;.

강한 감각 뉴런의 Lentivirus - 중재 유전자 조작 및 시각화 생체내에</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

에어 - 상 Electroolfactogram 기록을 사용하여 마우스 강한 감각 뉴런의 분석 응답

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

연구

신경과학

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Sf9 세포에서 Aplysia 감각 뉴런에서 PKC Translocation의 라이브 영상

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

결합을 사용하여 타겟팅 후각 망울의 뉴런 VIVO에서 Electroporation 및 Gal4 기반 향상제 트랩 Zebrafish 라인

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

강한 감각 뉴런의 속눈썹에 갇힌 화합물의 플래시 광분해

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

사용하는 마우스 대뇌 피질과 해마의 시각화 및 Dendrites와 쪽이의 유전자 조작<em&gt; utero에서</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

소뇌 과립 신경 세포의 유전자 조작<em&gt; 체외</em&gt;와<em&gt; 생체</em&gt; 신경 세포의 형태와 마이그레이션을 연구하는

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling<em&gt; 초파리</em&gt; 안테나

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

본래 Vomeronasal 기관 및 액세서리 후각 망울의 생체 준비

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

본래 Neuroepithelium에서 마우스 강한 감각 뉴런의 천공 패치 클램프 녹음 : 확인 된 부 취제 수용체를 발현 뉴런의 기능 분석

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...