Name: lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo
Uploaded: 2011-05-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo at JoVE.com

Это исследование проводится при поддержке НИЗ DC052256 и DC006015 и NSF 0324769 на QG и T32-DC008072 к BS.

1. Подготовка Эта процедура биобезопасности 2-го уровня, поэтому все следующие препараты производятся в биологически опасных капотом, где микроинъекции процедура будет выполнена. <ol><li> Подготовка и подогрева 37 ° С водяной кровати: Заполнить пластиковый мешок хране...

<ol>
	<li>Chen, H., Kohno, K., Gong, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+ablation+of+mature+olfactory+sensory+neurons+mediated+by+diphtheria+toxin+receptor.">Conditional ablation of mature olfactory sensory neurons mediated by diphtheria toxin receptor.</a> J Neurocytol. 34, 1-2 (2005).</li><li>Doi, K., Nibu, K., Ishida, H., Okado, H., Terashima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+epithelium+and+olfactory+bulb:+a+long-term+study.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory epithelium and olfactory bulb: a long-term study.</a> Ann Otol Rhinol Laryngol. 114, 629-633 (2005).</li><li>Lois, C., Hong, E. J., Pease, S., Brown, E. J., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transmission+and+tissue-specific+expression+of+transgenes+delivered+by+lentiviral+vectors.">Germline transmission and tissue-specific expression of transgenes delivered by lentiviral vectors.</a> Science. 295, 868-872 (2002).</li><li>Zhao, H., Otaki, J. M., Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+olfactory+neurons+in+vivo.">Adenovirus-mediated gene transfer in olfactory neurons in vivo.</a> J Neurobiol. 30, 521-530 (1996).</li></ol>

Микроинъекции лентивирус приводит к постоянной передаче генные конструкции в геномной ДНК OSN. Такой подход позволяет нам выполнять краткосрочные или долгосрочные манипуляции генов-кандидатов через гиперэкспрессия или опосредованной shRNA нокдауна. Кроме того, мы можем флуоресцентно э...

Микроинъекция: новорожденных мышей microinjected использованием 5 мкл Hamilton шприца (Hamilton # 7647-01), оснащенный 33 иглы (Гамильтон # 7762-06). Иммуноцитохимическая Реагенты: Первичные антитела: кролик поликлональных антител GFP (Molecular Probes # A-6455), куриные поликлональных антител против OMP (пользовательский) (Chen и др., 2005.), Морская свинка поликлональных антител против VGlut2 (Millipore # AB2251). Вторичные антитела: Су2-сопряженных осла анти-кролик (Jackson Immunolab # 711-225-152), Cy-3-сопряженных осла-анти-курица (Джексон Immunolab # 703-165-155) и Cy5 конъюгированного козьего анти-морской свинки (Jackson Immunolab # 106-175-008). Разделы были установлены на стеклах с Fluoromount G (Южный Biotech # 0010-01) с 50ng/mL DAPI хроматина пятно раствором. Конфокальной микроскопии: Z-стек изображений выполнены при помощи Olympus Flouview FV1000 конфокальной микроскопии и изображения собираются и обрабатываются в 3D проекции использованием Olympus FV10-ASW 2,01 конфокальной сбора и анализа программного обеспечения.

lentivirus-mediated genetic manipulation and visualization of olfactory sensory neurons in vivo

Развитие точных обонятельных схема опирается на точные проекции обонятельной сенсорных нейронов (ОСН), аксоны их синаптических целей в обонятельной луковице (OB). Молекулярные механизмы OSN аксон роста и ориентации не до конца понятны. Манипулирование экспрессии генов и последующей визуализации одного аксонов OSN и их терминал беседка морфологии до сих пор подвергают сомнению. Для изучения функций генов на одном уровне ячейки в указанный период времени, мы разработали лентивирусов техника выполнения манипулировать экспрессии генов в OSNs в естественных условиях. Лентивирусов частицы поступают в OSNs путем микроинъекции в обонятельный эпителий (OE). Выражение кассеты затем постоянно интегрироваться в геном трансдуцированных OSNs. Зеленый флуоресцентный белок определяет выражение инфицированных OSNs и очертания всей своей морфологии, в том числе аксон терминал беседке. Из-за короткого времени оборота между микроинъекции и репортер обнаружения, исследования функции генов может быть сосредоточено в пределах очень узкого периода развития. С помощью этого метода, мы обнаружили GFP выражение в всего лишь три дня и в течение трех месяцев после инъекции. Мы достигли как по-выражения и shRNA опосредованной нокдауна от лентивирусов микроинъекции. Этот метод обеспечивает подробные морфология OSN клеточных тел и аксонов на одном уровне клетка в живом организме, и таким образом позволяет характеристику кандидата функции генов обонятельных во время развития.

Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo at JoVE.com

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Мы представляем лентивирусов методика генетических манипуляций и визуализации одной обонятельной сенсорных аксонов нейронов и его терминал разветвление<em&gt; В естественных условиях</em&gt;.

Лентивирус-опосредованной генетических манипуляций и визуализация Обонятельные сенсорные нейроны В естественных условиях</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

Анализ Ответы Мышь обонятельной сенсорных нейронов Использование воздушного фазы Electroolfactogram Запись

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-изображений PKC транслокации в Sf9 клеток и в Aplysia сенсорных нейронов

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Ориентация обонятельных нейронов лампы с использованием комбинированных В Vivo Электропорация и Gal4 основе Enhancer Ловушка данио рерио Линии

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Флэш Фотолиз клетке соединений в ресничек Обонятельные сенсорные нейроны

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Селективный Вирусный трансдукция взрослых происхождения обонятельных нейронов при хроническом В естественных условиях Optogenetic Стимуляция

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Визуализация и генетических манипуляций дендритов и шипы в мышь коры головного мозга и гиппокамп использования<em&gt; Внутриутробное</em&gt; Электропорация

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Генетических манипуляций мозжечка Granule нейронов<em&gt; Экстракорпоральное</em&gt; И<em&gt; В Vivo</em&gt; По изучению нейронных Морфология и миграция

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Всего Гора иммунного обонятельных рецепторов нейронов в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Антенны

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Экс Vivo Препараты неповрежденной вомероназального органа и аксессуаров обонятельная луковица

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Перфорированные патч-зажим записи из мышей Обонятельные сенсорные нейроны в неповрежденном нейроэпителии: Функциональный анализ нейронов выражая идентифицированного одоранта рецептор

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...