Name: isolation of fidelity variants of rna viruses and characterization of virus mutation frequency
Uploaded: 2011-06-16T13:00:00
Duration: 18 min 10 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency at JoVE.com

Detta arbete stöddes av medel från medicin och hälsa forskningsanslag från staden Paris, det franska nationella ANR-09-JCJC-0118-1 bidrag och ERC Starting Grant RNAvirusPopDivNVax projekt nr. 242.719.

<ol>
	<li>Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinants+of+RNA-dependent+RNA+polymerase+(in)fidelity+revealed+by+kinetic+analysis+of+the+polymerase+encoded+by+a+foot-and-mouth+disease+virus+mutant+with+reduced+sensitivity+to+ribavirin.">Determinants of RNA-dependent RNA polymerase (in)fidelity revealed by kinetic analysis of the polymerase encoded by a foot-and-mouth disease virus mutant with reduced sensitivity to ribavirin.</a> J Virol. 82, 12346-12355 (2008).</li><li>Arnold, J. J., Vignuzzi, M., Stone, J. K., Andino, R., Cameron, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+site+control+of+an+active+site+fidelity+checkpoint+in+a+viral+RNA-dependent+RNA+polymerase.">Remote site control of an active site fidelity checkpoint in a viral RNA-dependent RNA polymerase.</a> J Biol Chem. 280, 25706-25716 (2005).</li><li>Korneeva, V. S., Cameron, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-function+relationships+of+the+viral+RNA-dependent+RNA+polymerase:+fidelity,+replication+speed,+and+initiation+mechanism+determined+by+a+residue+in+the+ribose-binding+pocket.">Structure-function relationships of the viral RNA-dependent RNA polymerase: fidelity, replication speed, and initiation mechanism determined by a residue in the ribose-binding pocket.</a> J Biol Chem. 282, 16135-16145 (2007).</li><li>Pfeiffer, J. K., Kirkegaard, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+mutation+in+poliovirus+RNA-dependent+RNA+polymerase+confers+resistance+to+mutagenic+nucleotide+analogs+via+increased+fidelity.">A single mutation in poliovirus RNA-dependent RNA polymerase confers resistance to mutagenic nucleotide analogs via increased fidelity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7289-7294 (2003).</li><li>Pfeiffer, J. K., Kirkegaard, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+fidelity+reduces+poliovirus+fitness+and+virulence+under+selective+pressure+in+mice.">Increased fidelity reduces poliovirus fitness and virulence under selective pressure in mice.</a> PLoS Pathog. 1, e11-e11 (2005).</li><li>Vignuzzi, M., Stone, J. K., Arnold, J. J., Cameron, C. E., Andino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quasispecies+diversity+determines+pathogenesis+through+cooperative+interactions+in+a+viral+population.">Quasispecies diversity determines pathogenesis through cooperative interactions in a viral population.</a> Nature. 439, 344-348 (2006).</li><li>Vignuzzi, M., Wendt, E., Andino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+attenuated+virus+vaccines+by+controlling+replication+fidelity.">Engineering attenuated virus vaccines by controlling replication fidelity.</a> Nat Med. 14, 154-161 (2008).</li><li>Crotty, S., Cameron, C., Andino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribavirin's+antiviral+mechanism+of+action:+lethal+mutagenesis.">Ribavirin's antiviral mechanism of action: lethal mutagenesis.</a> J Mol Med. 80, 86-95 (2002).</li><li>Coffey, L. L., Vignuzzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+alternation+of+chikungunya+virus+increases+fitness+while+restricting+population+diversity+and+adaptability+to+novel+selective+pressures.">Host alternation of chikungunya virus increases fitness while restricting population diversity and adaptability to novel selective pressures.</a> J Virol. 85, 1025-1035 (2011).</li><li>Ciota, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+mutant+spectrum+in+adaptation+and+replication+of+West+Nile+virus.">Role of the mutant spectrum in adaptation and replication of West Nile virus.</a> J Gen Virol. 88, 865-874 (2007).</li><li>Ibarra, K. D., Pfeiffer, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+ribavirin+antiviral+efficacy+via+nucleoside+transporter-mediated+drug+resistance.">Reduced ribavirin antiviral efficacy via nucleoside transporter-mediated drug resistance.</a> J Virol. 83, 4538-4547 (2009).</li><li>Levi, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fidelity+variants+of+RNA+dependent+RNA+polymerases+uncover+an+indirect,+mutagenic+activity+of+amiloride+compounds.">Fidelity variants of RNA dependent RNA polymerases uncover an indirect, mutagenic activity of amiloride compounds.</a> PLoS Pathog. 6, e1001163-e1001163 (2010).</li><li>Sierra, S., D&#225;vila, M., Lowenstein, P. R., Domingo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+foot-and-mouth+disease+virus+to+increased+mutagenesis:+influence+of+viral+load+and+fitness+in+loss+of+infectivity.">Response of foot-and-mouth disease virus to increased mutagenesis: influence of viral load and fitness in loss of infectivity.</a> J Virol. 74, 8316-8323 (2000).</li><li>Ruiz-Jarabo, C. M., Ly, C., Domingo, E., de la Torre, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lethal+mutagenesis+of+the+prototypic+arenavirus+lymphocytic+choriomeningitis+virus+(LCMV).">Lethal mutagenesis of the prototypic arenavirus lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV).</a> Virology. 308, 37-47 (2003).</li><li>Sierra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foot-and-mouth+disease+virus+mutant+with+decreased+sensitivity+to+ribavirin:+implications+for+error+catastrophe.">Foot-and-mouth disease virus mutant with decreased sensitivity to ribavirin: implications for error catastrophe.</a> J Virol. 81, 2012-2024 (2007).</li></ol>

Val av cellinje. Effekten av oädel analoger som RNA mutagena korrelerar med deras relativa upptaget av olika celltyper 11. Om den cellinje som normalt används för att virus passage visar sig vara behandlingsresistenta mot mutagent upptaget eller för känsligt (hög celltoxicitet), kan det vara nödvändigt att använda en annan cellinje som uppfyller dessa krav och är fortfarande tillåtande till virusreplikation. När mutagena motståndet varianten är isolerad, kan resten av karakterisering ska utföras i den ursprungliga, föredrog cellinje. Enligt vår erfarenhet HeLa celler tar lätt upp mutagena ämnen, BHK celler behöver upp till 10-faldigt högre koncentrationer och Vero-celler är terapiresistenta mutagen upptag. Val av mutagen. I ett försök att isolera trohet varianter av mutagent behandling, sannolikheten för framgång ökar om mer än en typ av mutagena ämnen används. Base analoga mutagena av olika struktur, som felaktigt ingår i kartläggningen vid replikering kommer främst framkalla resultera i en särskild del av mutationer i efterföljande replikering cykler: ribavirin behandling gynnar GtoA och CtoU mutationer övergång 12, 5-azacytidine har en liknande bias, med Tillägget av CtoG och GtoC transversions 13, 5-fluorouracil företrädesvis inducerar AtoG och UTOC övergångar 14. Alternativt + högre koncentrationer av Mg 2 + eller Mn 2 kan kompletteras för mediet att öka den totala mutationsfrekvensen av RNA virus utan fördomar som beskrivs ovan 12. Beroende på viruset &quot;kodon sekvenser och kodon förändringar som krävs för att generera en trohet variant, vissa av dessa villkor kommer att gynna framväxten av denna variant framför andra. För högre trohet polioviruset G64S och Coxsackie virus A372V, ribavirin behandling lättast valts för varianterna eftersom den nödvändiga AtoG övergången vid kodon platsen motsvarade de mutationer främst genereras av denna ribavirin. MOI vs befolkningsstorlek. I virologi, protokoll för vävnadsodling infektion särskilt uppmärksamma den mångfald av infektion (MOI), för att undvika ansamling av defekta störande partiklar (lågt MOI) eller att främja rekombination mellan virus (högt MOI), för exempel. För att välja för uppkomsten händelser under seriell passaging är det också viktigt att beakta storleken virus befolkning. Eftersom resistent mutant ursprungligen är på låg frekvens, är det bäst att överföra en så stor befolkningsmängd som möjligt från en passage till nästa (10 5 -10 6 virus, t ex) för att undvika att förlora dessa nya varianter på varje passage. Skala upp storleken på bra eller kolv (antalet infekterade celler) kan hjälpa till att minimera ökningen av MOI om detta är oroande. Å andra sidan, för experiment där känsligheten hos ett virus för att mutagen testas, är lågt MOI infektion utförs för att öka antalet replikering cykler som förekommer i försöket och för att undvika rädda mutagenized genomet av högre fitness arvsmassa genom komplement i co-infekterade celler. Detta är viktigt eftersom de mutationer som genereras på avkomman genomen under den första rundan av replikering inte omedelbart upptäcks. De flesta av dessa mutagenized RNA fortfarande kommer att vara förpackade i virionens. Det är i nästa omgång av infektion som dödliga mutationer som finns i dessa genomet kommer att resultera i en avbruten replikering cykel, och minskning av virus titer. Det kan vara nödvändigt att tillåta flera omgångar av ansamling av mutationer innan en signifikant effekt av dödliga mutagenes observeras. Slutligen, om över passagen serien i närvaro av mutagent, det virus titrar fortsätter att sjunka fram till utrotning, då forskaren ska försöka passaging virus i gradvis ökande mängder av mutagener (från en mycket låg koncentration). Isolering och generering av RNA mutagena resistent klon från RNA mutagena resistenta befolkningen. RNA mutagena införa flera slumpmässiga mutationer i varje arvsmassa, men valet av motstånd kommer bara att berika (och fixa till konsensus sekvens) motståndet mutation. För att identifiera denna mutation, vi sekvens mutagen resistenta befolkningen (konsensus av befolkningen) och inte enskilda virus. Därför är den enda, slumpmässiga mutationer som skapats av mutagen inte upptäcks i sekvensen, bara de mutationer som leder till konsensus förändringar efter valet finns. Enligt vår erfarenhet vi identifierar endast en eller två sådana ändringar konsensus sekvens. När mutagena resistent befolkningen uppnås och motståndet mutation är identifierad, är det nödvändigt att skapa ett renare lager av denna variant. Ovan beskrev vi en procedur plack rening. Alternativt, om viruset av intresse inte producerar lätt identifierbara plack, kan den önskade variant PurifIED genom att begränsa utspädning. Detta tillvägagångssätt är i huvudsak en TCID 50 i 96-bra format, där viruset beståndet späds ut så att mindre än 50% av brunnarna är smittade. Med hjälp av denna utspädning är samma tillvägagångssätt som ovan vidtas, isolera upp till 10 individuella varianter och bekräftar deras sekvenser. Som nämnts, i bästa fall, är en smittsam cDNA klon av virusstammen finns. Isolering av den variant skulle därför inte vara nödvändigt. Vår erfarenhet är troheten varianter är resultatet av enstaka aminosyrasubstitutioner och därmed kan genereras med hjälp av enkla, kommersialiserade mutagenes kit som QuikChange (Agilent). En sekundär alternativ är att använda ett cDNA klon av en närbesläktad stam. Men om en närstående stam används, rekommenderar vi att du använder både detta och virusisolering (t.ex. plack rening) eftersom vi har funnit att samma trohet ändra mutation på två närbesläktade virus inte nödvändigtvis kommer att ha samma effekt. Fidelity och replikering. Val av RNA mutagent resistenta varianter har resulterat i isolering av både högre och lägre trohet varianter med tillväxt egenskaper som liknar sina vilda typen motsvarigheter 4,12,15. För närvarande är sambandet mellan räntor polymeras aktivitet och trohet inte helt klarlagda. In vitro biokemiska studier med renade RNA-polymeras har visat att högre trohet varianter har långsammare bearbetning priser, medan lägre trohet varianter tenderar att ha snabbare behandling 1-3,12. I vävnadsodling, dessa skillnader är vanligtvis inte uppenbart, vilket tyder på att tillgången på resurser, snarare än inneboende polymeras kinetik aktivitet, är det hastighetsbegränsande steget. Om trohet varianten replikerar med kinetik som inte avsevärt skiljer sig från vild typ och sedan en jämförelse av deras mutation frekvenser kan direkt göras. Om en mycket betydande förändring i replikering kinetik finns, uppgifterna bör normaliseras ta hänsyn till kinetiska skillnader, till exempel genom att jämföra virus som har genomgått samma antal replikering cykler. Vår erfarenhet är dock inga signifikanta skillnader i ett steg kinetik tillväxt observerades mellan vild typ och hi-fi-varianter, konstaterade vi att högre trohet varianter genomgående titer högre (inom 1 log) jämfört med vildtyp men de gör något mindre RNA (inom i samma storleksordning), vilket antyder vidare att genomen de producerar innehåller färre mutationer och är därmed mer smittsam. Provberedning och sekvensering. För alla steg i dessa protokoll, är det viktigt att hifi-, korrekturläsning enzymer används för PCR och RT-PCR för att begränsa införa ytterligare mutationer eftersom de inte kan skiljas från biologiskt relevanta mutationer. Det är viktigt att viruset populationerna som skall jämföras har upprättats i samma förhållanden (passagen historia, vävnad odlingsmedium, temperatur, RNA-extraktion metod, RT-PCR-protokoll etc.) Det är också viktigt att se till att tillräckligt utgångsmaterial var erhållas från RNA-extraktion så att en stark band genereras av RT-PCR. En 1 / 100 utspädning av RNA-provet ska också ge en detekterbar RT-PCR-bandet, vilket indikerar att provet innehåller tillräckligt många av RNA-molekyler för att undvika representation bias (förstärker samma arvsmassa upprepade gånger). Eftersom mutationsfrekvensen är en distribution, skulle man förvänta sig att liknande värden kommer att uppnås oberoende av befolkningens storlek, förutsatt att nämnda fördomar inte förekommer. Som figur 6 visar, ger en 10 5-faldig utspädning av ett virus lager en mutation frekvens som inte skiljer sig från föräldrarnas lager. Fram till optimala förutsättningar för TopoTA kloning finns, bekräftar förekomsten av insatser efter blå / vit screening, av kolonin PCR innan sekvensering. Som en kontroll för mutationsstatus buller (mutationer infördes genom RT-PCR och sekvensering), klona en PCR-produkten från en plasmid med samma virus sekvens och / eller klona och sekvens RT-PCR-produkter för in vitro-transkriberat RNA motsvarande virus arvsmassa (vara medveten om att olika in vitro transkription enzymer har olika felfrekvenser och får inte ge användbar information om den verkliga bakgrunden fel i din förfarande). Vissa virus sekvenser kan vara giftiga för bakterier, så det är viktigt att kontrollera detta innan man beslutar om regionen virala genomet att sekvenseras för mutation frekvens. I att analysera sekvenser erhålls genom TopoTA, observera att varje klon bör bara innehålla en insert / sekvens. Om en dubbel topp observeras, vilket tyder på en blandad befolkning, är det möjligt att två intilliggande kolonier valdes ut. Det är också möjligt, men högst osannolikt med tanke på den låga mutationen frekvenserna i bakterie-replikering, att mutationen introducerades under förstärkning av plasmiden i bakterieodling. I plack purified populationer kan en dubbel topp representerar överlappande plaketter, eller ett virus som förvärvar en ny mutation eller återgå ett mutation under plack utveckling. Var konsekvent och besluta om huruvida man räkna eller inte räkna dessa mutationer. Slutligen, kom ihåg att mutationen frekvenser som används här är relativa värden. De är giltiga endast jämföra virus populationer vuxit på samma villkor, och planeras under samma region! De bör inte ses som absoluta värden av mutation ränta, eller mutationsfrekvensen av genomet som helhet. Men när förhållandena är kontrollerade, tillåter de reproducerbar, kvantitativa jämförelser av skillnader i mutation distribution och frekvens.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer </th></tr><tr><td> ribavirin </td><td> Sigma </td><td> R9644-10mg </td><td></td></tr><tr><td> 5-fluorouracil </td><td> Sigma </td><td> F6627-1G </td><td></td></tr><tr><td> 5-azacytidine </td><td> Sigma </td><td> A2385-100mg </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> Sigma </td><td> M1028-100ml </td><td></td></tr><tr><td> MnCl 2 </td><td> Sigma </td><td> M1787 </td><td></td></tr><tr><td> Trypan blå </td><td> Sigma </td><td> T8154-20ml </td><td></td></tr><tr><td> TopoTA kloning kit </td><td> Invitrogen </td><td> 10351021 </td><td></td></tr><tr><td> QuikChange mutagenes kit </td><td> Agilent </td><td> 200.516 </td><td> Om ett cDNA smittsamma klon är tillgängligt </td></tr><tr><td> 96-bra miniprep kit </td><td> Macherey-Nagel </td><td> 740.625 </td><td></td></tr><tr><td> Lasergene, Sequencher </td><td> DNAstar, Gene Codes Corporation </td><td> <a href="www.dnastar.com">www.dnastar.com</a> <a href="www.genecodes.com">www.genecodes.com</a> </td><td> Eller annan anpassning programvara </td></tr></tbody></table>

isolation of fidelity variants of rna viruses and characterization of virus mutation frequency

RNA-virus använder RNA-beroende RNA-polymeras att replikera sina genom. Den inneboende höga felprocenten av dessa enzymer är en stor bidragande orsak till uppkomsten av extrema befolkningstäthet som underlättar virus anpassning och utveckling. Ökande bevis visar att den inneboende felfrekvensen, och den resulterande frekvenserna mutation, RNA virus kan moduleras genom subtila aminosyra förändringar av virala polymeraset. Även biokemiska analyser finns för vissa virus-RNA polymeraser som medger kvantitativt mått på införlivandet trohet, här beskriver vi en enkel metod för att mäta mutation frekvenser av RNA-virus som har visat sig vara så noggranna som biokemiska metoder för att identifiera trohet ändra mutationer. Den metod som använder konventionell virologiska och sekvensering tekniker som kan utföras i de flesta biologiska laboratorier. Baserat på vår erfarenhet med ett antal olika virus har vi identifierat de viktiga steg som måste optimeras för att öka sannolikheten att isolera trohet varianter och generera data av statistisk signifikans. Den isolering och karaktärisering av trohet ändra mutationer kan ge nya insikter i polymeras struktur och funktion 1-3. Dessutom kan dessa trohet varianter vara användbara redskap i kännetecknar mekanismer virus anpassning och utveckling 4-7.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency at JoVE.com

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

Den nuvarande artikeln beskrivs de steg som krävs för att isolera och karakterisera RNA-polymeras trohet varianter av RNA-virus och hur man använder data mutationsfrekvensen bekräfta trohet förändringar i vävnadskultur.

Isolering av Fidelity Varianter av RNA-virus och karakterisering av virus mutationsfrekvensen

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

RNA Isolering av Pseudomonas aeruginosa Kolonisera Murine mag-tarmkanalen

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

High-throughput screening för brett spektrum kemiska inhibitorer av RNA-virus

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Isolation and Characterization of Neutrophils with Anti-Tumor Properties

Isolering och karakterisering av neutrofiler med Anti-tumöregenskaper

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading ...

Bacterial Artificial Chromosomes: A Functional Genomics Tool for the Study of Positive-strand RNA Viruses

Bakteriell artificiella kromosomer: En funktionsgenomik verktyg för studier av styrd trängade RNA-virus

Reverse genetics, an approach to rescue infectious virus entirely from a cloned cDNA, has revolutionized the field of positive-strand RNA viruses, whose ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

Räddning och karaktärisering av rekombinant virus från en ny världsinfektiös klon från Zika Virus

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Generation av Escape varianter av neutraliserande influensa Virus monoklonala antikroppar

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Identification of Coding and Non-coding RNA Classes Expressed in Swine Whole Blood

Identifiering av kodning och icke-kodande RNA klasser uttryckta i svin helblod

The advent of innovative and increasingly powerful next generation sequencing techniques has opened new avenues into the ability to examine the underlying ...

Confocal Imaging of Double-Stranded RNA and Pattern Recognition Receptors in Negative-Sense RNA Virus Infection

Confocal Imaging av dubbelsträngat RNA och mönster erkännande receptorer i negativ-Sense RNA-virusinfektion

Double-stranded (ds) RNA is produced as a replicative intermediate during RNA virus infection. Recognition of dsRNA by host pattern recognition receptors ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vektorkompetensanalyser på Aedes aegypti myggor med Zika Virus

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...