Name: development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery
Uploaded: 2011-06-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery at JoVE.com

نشكر بريتا Hoehn ، أحد Guihua ، Soifer هاريس وليزا شيرر لإجراء مناقشات مفيدة. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة وAI29329 HL07470 منحت لJJR والكواشف التالية تم الحصول عليها من خلال أبحاث الإيدز والمعاهد الوطنية للصحة مرجع برنامج الكاشف ، شعبة الإيدز ، NIAID ، المعاهد الوطنية للصحة : إن تشو تشو والخلية EE - gp160 خط ، وpNL4 - 3 ناقلات لوك ؛ بال HIV - 1 من gp120 DAIDS ، NIAID.

1. إعداد المكتبة RNA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكتبة تحتوي على الحمض النووي بدءا من 50 النيوكليوتيدات تسلسل عشوائي وتم تصنيعه من خلال تقنيات الحمض النووي المتكاملة (كورالفيل ، أيوا). واحد الذين تقطعت بهم السبل مكتبة بنسبة ضئيلة تسلسل الحمض النووي...

<ol>
	<li>Tuerk, C., Gold, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evolution+of+ligands+by+exponential+enrichment:+RNA+ligands+to+bacteriophage+T4+DNA+polymerase.">Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Science. 249, 505-510 (1990).</li><li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands.">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346, 818-822 (1990).</li><li>Robertson, D. L., Joyce, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+in+vitro+of+an+RNA+enzyme+that+specifically+cleaves+single-stranded+DNA.">Selection in vitro of an RNA enzyme that specifically cleaves single-stranded DNA.</a> Nature. 344, 467-468 (1990).</li><li>Fitzwater, T., Polisky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+SELEX+primer.">A SELEX primer.</a> Methods Enzymol. 267, 275-301 (1996).</li><li>Weiss, C. D., White, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+stable+Chinese+hamster+ovary+cells+expressing+wild-type,+secreted,+and+glycosylphosphatidylinositol-anchored+human+immunodeficiency+virus+type+1+envelope+glycoprotein.">Characterization of stable Chinese hamster ovary cells expressing wild-type, secreted, and glycosylphosphatidylinositol-anchored human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein.</a> J Virol. 67, 7060-706 (1993).</li><li>Vodicka, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indicator+cell+lines+for+detection+of+primary+strains+of+human+and+simian+immunodeficiency+viruses.">Indicator cell lines for detection of primary strains of human and simian immunodeficiency viruses.</a> Virology. 233, 193-198> (1997).</li><li>Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection,+characterization+and+application+of+new+RNA+HIV+gp+120+aptamers+for+facile+delivery+of+Dicer+substrate+siRNAs+into+HIV+infected+cells.">Selection, characterization and application of new RNA HIV gp 120 aptamers for facile delivery of Dicer substrate siRNAs into HIV infected cells.</a> Nucleic Acids Res. , (2009).</li><li>Mayer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+biology+of+aptamers.">The chemical biology of aptamers.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 48, 2672-2689 (2009).</li><li>Famulok, M., Hartig, J. S., Mayer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+aptamers+and+aptazymes+in+biotechnology,+diagnostics,+and+therapy.">Functional aptamers and aptazymes in biotechnology, diagnostics, and therapy.</a> Chem Rev. 107, 3715-3743 (2007).</li><li>Chu, T. C., Twu, K. Y., Ellington, A. D., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aptamer+mediated+siRNA+delivery.">Aptamer mediated siRNA delivery.</a> Nucleic Acids Res. 34, e73-e73 (2006).</li><li>McNamara, J. O., 2nd, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+delivery+of+siRNAs+with+aptamer-siRNA+chimeras.">Cell type-specific delivery of siRNAs with aptamer-siRNA chimeras.</a> Nat Biotechnol. 24, 1005-1015 (2006).</li><li>Dassie, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+administration+of+optimized+aptamer-siRNA+chimeras+promotes+regression+of+PSMA-expressing+tumors.">Systemic administration of optimized aptamer-siRNA chimeras promotes regression of PSMA-expressing tumors.</a> Nat Biotechnol. 27, 839-849 (2009).</li><li>Zhou, J., Rossi, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+therapeutic+potential+of+cell-internalizing+aptamers.">The therapeutic potential of cell-internalizing aptamers.</a> Curr Top Med Chem. 9, 1144-1157 (2009).</li><li>Zhou, J., Li, H., Li, S., Zaia, J., Rossi, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+dual+inhibitory+function+aptamer-siRNA+delivery+system+for+HIV-1+therapy.">Novel dual inhibitory function aptamer-siRNA delivery system for HIV-1 therapy.</a> Mol Ther. 16, 1481-1489 (2008).</li></ol>

الأبتامرات هي في المختبر تطورت الأحماض النووية التي تفترض محددة ومستقرة الأشكال ثلاثية الأبعاد ، مما يوفر للغاية محددة وملزمة لضيق الجزيئات المستهدفة 8. انخفاض تقارب ملزم nanomolar ونوعية رائعة من الأبتامرات إلى أهدافهم جعلها أدوات متعددة للتشخيص والتصوير <em...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> MF - ميليبور غشاء فلتر </td><td> ميليبور </td><td> HAWP01300 </td><td> حجم مسام 0.45 ميكرون </td></tr><tr><td> Swinnex تصفية حامل </td><td> ميليبور </td><td> SX0001300 </td><td> قطرها 13 ملم </td></tr><tr><td> QIAquick جل استخراج كيت </td><td> QIAGEN </td><td> 28706 </td><td> تنقية الحمض النووي </td></tr><tr><td> Microcon YM - 30 عمود </td><td> ميليبور </td><td> 42410 </td><td> تركيز الحمض النووي الريبي </td></tr><tr><td> الحيوي تدور العمود 30 </td><td> الحيوي راد </td><td> 732-6250 </td><td> RNA تنقية </td></tr><tr><td> طق البلمرة PCR DNA </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D1806 </td><td></td></tr><tr><td> ThermoScript RT - PCR النظام </td><td> Invitrogen </td><td> 11146-024 </td><td></td></tr><tr><td> DuraScribe T7 كيت النسخ </td><td> EpiCentre </td><td> DS010925 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP لPCR </td><td> روش </td><td> 1 581 295 </td><td></td></tr><tr><td> حمض النووي الريبي ، ونقل من القولونية </td><td> سيغما الدريخ </td><td> R1753 </td><td> الحمض الريبي النووي النقال منافس </td></tr><tr><td> HIV - 1 - L با بروتين gp120 </td><td> للأبحاث الإيدز ومرجع برنامج الكاشف </td><td> 4961 </td><td> الهدف من البروتين </td></tr><tr><td> طقم كاتم الصوت الوسم سيرنا -- Cy3 </td><td> Ambion </td><td> 1632 </td><td></td></tr><tr><td> حمض الفينول / كلوروفورم 01/05 الحل (درجة الحموضة 4.5) </td><td> Ambion </td><td> AM9720 </td><td></td></tr><tr><td> كلوروفورم / الأيزوبروبانول 24 / 1 الحل </td><td> سيغما </td><td> C0549 </td><td></td></tr><tr><td> العجل الفوسفاتيز المعوية (CIP) </td><td> نيو إنجلاند BioLab </td><td> M0290L </td><td></td></tr><tr><td> عديد النوكليوتيد كيناز T4 </td><td> نيو إنجلاند BioLab </td><td> M0201L </td><td></td></tr><tr><td> الجليكوجين </td><td> روش </td><td> 10 901 393 001 </td><td> RNA هطول الأمطار </td></tr><tr><td> غاما - P - 32 ATP </td><td> النائب الطبية الحيوية </td><td> 013502002 </td><td> Radiactivity </td></tr><tr><td> 40 ٪ AccuGel 19:01 </td><td> تشخيص وطنية </td><td> EC - 850 </td><td></td></tr><tr><td> 10xTBE </td><td> تشخيص وطنية </td><td> EC - 860 </td><td></td></tr><tr><td> ن ، ن ، ن ، N&#39; - Tetramethylethylenediamine (TMEMD) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td> بيرسلفات الأمونيوم (APS) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A3678 </td><td></td></tr><tr><td> L - methioine sulfoximine </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M5379 - 250 ملغ </td><td></td></tr><tr><td> RPMI الإعلام 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11835-030 </td><td></td></tr><tr><td> بيكربونات الصوديوم ، 7.5 ٪ وزن / V </td><td> Invitrogen </td><td> 25080-094 </td><td></td></tr><tr><td> متوسطة الأساسية الدنيا (MEM) (10 ) </td><td> Invitrogen </td><td> 11430-030 </td><td></td></tr><tr><td> MEM غير الاساسيين من الأحماض الأمينية (100 ) </td><td> Invitrogen </td><td> 11140-050 </td><td></td></tr><tr><td> TA استنساخ عدة مع PCR 2.1 </td><td> Invitrogen </td><td> K2040 - 01 </td><td></td></tr></tbody></table>

development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery

وقد خلق هذا الوباء العالمي للعدوى بفيروس نقص المناعة البشرية حاجة ملحة لفئات جديدة من وكلاء المضادة للفيروسات. ويجري استغلال قدرة قوية من الرناوات الصغيرة (SI) بالتدخل لمنع التعبير عن النصوص الحمض النووي الريبي باعتبارها مكملة فئة جديدة من العلاجات لمجموعة متنوعة من الأمراض بما فيها فيروس نقص المناعة البشرية. وقد أظهرت العديد من التقارير السابقة أن رواية [رني مكافحة الإيدز المستندة إلى استراتيجيات علاجية واعدة كبيرة ، ومع ذلك ، يشكل عقبة رئيسية لتطبيق العلاجية الناجحة والترجمة السريرية لsiRNAs هو تسليم كفاءة. خصوصا ، نظرا لسلامة وفعالية العلاجات المستندة إلى رني ، فمن المرغوب فيه جدا لتطوير استهدفت تسليم سيرنا داخل الخلايا نهج للسكان خلية معينة أو الأنسجة. في HIV - 1 gp120 البروتين ، بروتين سكري مغلف على سطح HIV - 1 ، ويلعب دورا هاما في دخول الفيروس الى خلايا CD4. وقد تم التحقق من صحة تفاعل gp120 CD4 والذي يقوم بتشغيل HIV - 1 دخول الخلية ويبدأ الانصهار بوصفها استراتيجية مضادة للفيروسات ذات الصلة سريريا لاكتشاف المخدرات. هنا ، نحن نناقش أولا اختيار وتحديد 2&#39; - F معدلة لمكافحة فيروس نقص المناعة البشرية الأبتامرات RNA gp120. باستخدام أسلوب التصفية النيتروسليلوز سيليكس التقليدية ، وقد تم عزل عدة الأبتامرات جديدة مع تقارب nanomolar من 50 عشوائي مكتبة RNA NT. من أجل الحصول على الأنواع بنجاح ملزمة مع ارتفاع تقارب ، ويتم التحكم بعناية في اختيار التشدد من خلال تعديل الشروط. يمكن ربط الأبتامرات مختارة خصيصا ويكون استوعب بسرعة إلى الخلايا التعبير عن بروتين HIV - 1 المغلف. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للالأبتامرات وحده تحييد عدوى HIV - 1. استنادا إلى أفضل aptamer A - 1 ، ونحن أيضا إنشاء وظيفة مزدوجة المثبطة المضادة للرواية gp120 aptamer - سيرنا في الوهم الذي aptamer كلا من والأجزاء سيرنا وفعالة لمكافحة فيروس نقص المناعة البشرية الأنشطة. كذلك ، ونحن الاستفادة من gp120 aptamer - سيرنا الوهم لخلية من نوع التسليم المحددة للسيرنا داخل الخلايا المصابة HIV - 1. هذه الوظيفة المزدوجة خيمر يظهر إمكانات كبيرة للجمع بين مختلف وكلاء الحمض النووي العلاجية (aptamer وسيرنا) في عدوى HIV - 1 قمع ، مما يجعل من الوهم aptamer - سيرنا المرشحين العلاجية لمرضى الفشل جذابة العلاج المضاد للفيروسات نشطة للغاية (HAART).

Watch this Scientific Journal Video about Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery at JoVE.com

Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

يتم عزل عدة 2&#39; - RNA الفلوري الأبتامرات ضد فيروس نقص المناعة البشرية 1Ba - L gp120 مع تقارب nanomole من مكتبة بواسطة الحمض النووي الريبي<em&gt; في المختبر</em&gt; سيليكس الداخلي. يتم إنشاء وظيفة جديدة مزدوجة المثبطة المضادة للgp120 aptamer - سيرنا الوهم ويبين الوعد كبيرة للعلاج المضاد لفيروس نقص المناعة البشرية الشاملة.

تطوير خلية من نوع معين الأبتامرات gp120 المضادة لفيروس الإيدز لتسليم سيرنا

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

وضع علامة سلبية لإختيار a المتحولة الحالة للنسج</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

الببتيد: MHC Tetramer القائم على إثراء خلايا T حاتمة محددة

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

باستخدام الكيمياء فوق لقياس تأثير عدوى فيروسية في خلية المضيف RNA التجميعي

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

وضع النطاقي الحماقي الفيروسات محددة بوساطة خلية الحصانة ELISPOT الفحص لتقييم الإنترفيرون γ-عقب الحبل السري زرع الدم

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

المساريقي الليمفاوية القناة مقنى نموذج الفأر: بالتطبيق على تقييم المعوية اللمفاوي النقل المخدرات

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

تطبيق نقل الإسفار الرنين الطاقة (الحنق) لدراسة المستجيب إزفاء الكفاءة من قبل<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; أثناء سيرنا إسكات

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

تطوير أكثر حساسية وخصوصية اللونية آجار المتوسطة للكشف عن<em&gt; الضمة نظيرة الحالة للدم</em&gt; وغيره<em&gt; الضمة</em&gt; الأنواع

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

تطوير المستمدة الخلية الجذعية خلايا T التنظيمية مستضد محددة ضد المناعة الذاتية

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

تطوير نظام تسليم الاقتصادية DNA من قبل &quot;Acufection&quot; وتطبيقه لبحوث الجلد

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

اكتشاف حانمه تشخيصية محددة الفيروس Zika

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...