Name: development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery
Uploaded: 2011-06-23T12:00:00
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我々は、有用な議論をブリッタヘーン、桂花日、ハリスSoiferとリサシェーラーに感謝。 CHO - EEとCHO - gp160細胞：この作品は、NIHのエイズ研究とレファレンス試薬プログラム、エイズの部、NIAID、NIHによって得られた健康AI29329と、以下の試薬をJJRに授与HL07470の国立研究所からの補助金によって支えられてライン、pNL4 - 3リュックベクトル、HIV - 1 DAIDSからBALのgp120、NIAID。

1。 RNAライブラリの調製<ol><li>出発DNAライブラリーは、ランダム配列の50ヌクレオチドを​​含んでおり、統合されたDNA技術（コーラル、アイオワ州）により合成した。 N 50 - - CAG ACG ACT CGC CCG - 3&#39;（81 NT）AGG ACG ATG CGG一本鎖DNAオリゴのライブラリの順序は、5&#39; - GGGです。ランダムな領域は、in vitro転写とRT - PCRのための3&#39;タグのためのT7プロモーターを含む一定の地?...

<ol>
	<li>Tuerk, C., Gold, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evolution+of+ligands+by+exponential+enrichment:+RNA+ligands+to+bacteriophage+T4+DNA+polymerase.">Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Science. 249, 505-510 (1990).</li><li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands.">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346, 818-822 (1990).</li><li>Robertson, D. L., Joyce, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+in+vitro+of+an+RNA+enzyme+that+specifically+cleaves+single-stranded+DNA.">Selection in vitro of an RNA enzyme that specifically cleaves single-stranded DNA.</a> Nature. 344, 467-468 (1990).</li><li>Fitzwater, T., Polisky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+SELEX+primer.">A SELEX primer.</a> Methods Enzymol. 267, 275-301 (1996).</li><li>Weiss, C. D., White, J. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+therapeutic+potential+of+cell-internalizing+aptamers.">The therapeutic potential of cell-internalizing aptamers.</a> Curr Top Med Chem. 9, 1144-1157 (2009).</li><li>Zhou, J., Li, H., Li, S., Zaia, J., Rossi, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+dual+inhibitory+function+aptamer-siRNA+delivery+system+for+HIV-1+therapy.">Novel dual inhibitory function aptamer-siRNA delivery system for HIV-1 therapy.</a> Mol Ther. 16, 1481-1489 (2008).</li></ol>

アプタマーは、in vitroで標的分子に8〜タイト結合、それによって高度に特異的な提供、具体的かつ安定的な三次元形状を想定して核酸を進化させています。低ナノモル結合親和性とそのターゲットへのアプタマーの絶妙な特異性がin vivoイメージング、および治療​​9 で 、それらの診断のための多目的なツールとして利用できます。標的siRNA導入のための...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td> MF -ミリポアメンブレンフィルタ</td><td>ミリポア</td><td> HAWP01300 </td><td>孔径0.45μmの</td></tr><tr><td> Swinnexフィルターホルダー</td><td>ミリポア</td><td> SX0001300 </td><td> 13mmの直径</td></tr><tr><td> QIAquickゲル抽出キット</td><td> QIAGEN </td><td> 28706 </td><td> DNAの精製</td></tr><tr><td>マイクロコンYM - 30カラム</td><td>ミリポア</td><td> 42410 </td><td> RNAの濃度</td></tr><tr><td>バイオスピン30カラム</td><td> Bio - Rad社</td><td> 732-6250 </td><td> RNA精製</td></tr><tr><td> TaqのPCRのDNAポリメラーゼ</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D1806 </td><td></td></tr><tr><td> ThermoScript RT - PCRシステム</td><td>インビトロジェン</td><td> 11146-024 </td><td></td></tr><tr><td> T7転写キットをDuraScribe </td><td>シャーロット</td><td> DS010925 </td><td></td></tr><tr><td> PCR用のdNTP </td><td>ロッシュ</td><td> 1 581 295 </td><td></td></tr><tr><td>リボ核酸、大腸菌からの転送</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> R1753 </td><td> tRNAの競合</td></tr><tr><td> HIV - 1 Baの- Lのgp120タンパク質</td><td>エイズの研究およびリファレンス試薬プログラム</td><td> 4961 </td><td>標的タンパク質</td></tr><tr><td>サイレンサーsiRNAの標識キット - Cy3標識</td><td>アンビオン</td><td> 1632 </td><td></td></tr><tr><td>酸5月1日クロロホルム/フェノール溶液（pH 4.5） </td><td>アンビオン</td><td> AM9720 </td><td></td></tr><tr><td>クロロホルム/イソプロパノール1分の24のソリューション</td><td>シグマ</td><td> C0549 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ腸ホスファターゼ（CIP） </td><td>ニューイングランドBioLab </td><td> M0290L </td><td></td></tr><tr><td> T4ポリヌクレオチドキナーゼ</td><td>ニューイングランドBioLab </td><td> M0201L </td><td></td></tr><tr><td>グリコーゲン</td><td>ロッシュ</td><td> 10 901 393 001 </td><td> RNA沈殿</td></tr><tr><td> γ- 32 P - ATP </td><td> MPバイオメディカル</td><td> 013502002 </td><td> Radiactivity </td></tr><tr><td> 40パーセントAccuGel夜07時01分</td><td>ナショナル診断</td><td> EC - 850 </td><td></td></tr><tr><td> 10xTBE </td><td>ナショナル診断</td><td> EC - 860 </td><td></td></tr><tr><td> N、N、N、N&#39; -テトラメチルエチレンジアミン（TMEMD） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td>過硫酸アンモニウム（APS） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> A3678 </td><td></td></tr><tr><td> L - methioineスルホキシ</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> M5379 - 250ミリグラム</td><td></td></tr><tr><td> RPMIメディア1640 </td><td>インビトロジェン</td><td> 11835-030 </td><td></td></tr><tr><td>重炭酸ナトリウム溶液、7.5％w / vの</td><td>インビトロジェン</td><td> 25080-094 </td><td></td></tr><tr><td>最小必須培地（MEM）（10） </td><td>インビトロジェン</td><td> 11430-030 </td><td></td></tr><tr><td> MEM非必須アミノ酸（100） </td><td>インビトロジェン</td><td> 11140-050 </td><td></td></tr><tr><td>をpCR 2.1とTAクローニングキット</td><td>インビトロジェン</td><td> K2040 - 01 </td><td></td></tr></tbody></table>

development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery

HIVによる感染の世界的流行は、抗レトロウイルス薬の新しいクラスのための緊急の必要性を作成しています。相補的RNA転写産物の発現を阻害する低分子干渉（SI）RNAの強力な能力は、HIVを含む疾患の様々な治療薬の新しいクラスとして悪用されています。多くのこれまでの報告では、新たなRNAiベースanti-HIV/AIDS治療戦略は、かなりの期待を持っていることが示されているが、成功した治療への応用およびsiRNAの臨床翻訳の鍵の障害は、効率的な配信です。特に、RNAiベースの治療薬の安全性と有効性を検討し、それは特定の細胞集団または組織に標的細胞内のsiRNA導入のアプローチを開発することが極めて望ましい。 HIV - 1のgp120タンパク質、HIV - 1の表面上の糖タンパク質のエンベロープは、CD4細胞へのウイルスの侵入に重要な役割を果たしている。 HIV - 1のエントリをトリガし、細胞融合を開始することをgp120とCD4の相互作用は、薬物発見のための臨床的に関連する抗ウイルス戦略として検証されています。 ここで、我々はまず、2&#39; - F改変抗HIV gp120のRNAアプタマーの選択と識別を議論する。従来のニトロセルロースフィルターSELEX法を用いて、ナノモル親和性を持ついくつかの新しいアプタマーは、50のランダムなNT RNAライブラリーから単離された。が正常に高い親和性で結合した種を得るためには、選択のストリンジェンシーは、慎重に条件を調整することによって制御される。選択されたアプタマーは、特異的に結合することができ、急速にHIV - 1エンベロープタンパク質を発現する細胞に取り込まれる。さらに、単独でアプタマーはHIV - 1感染を中和することができる。最高のアプタマー- 1に基づき、我々はまた、アプタマーやsiRNAの両方の部分が強力な抗HIV活性を持つ新規な二重の阻害機能抗gp120のアプタマー - siRNAのキメラを作成してください。さらに、我々はHIV - 1感染細胞へのsiRNAの細胞型特異的送達のためのgp120アプタマー - siRNAのキメラを利用する。キメラこの二重の機能は、抑制するHIV - 1感染の様々な核酸治療薬を（アプタマーとsiRNA）を組み合わせた高活性抗レトロウイルス療法（HAART）を失敗した患者のためのアプタマー - siRNAのキメラの魅力的な治療候補者を作るための大きな可能性を示しています。

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Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

ナノモル親和性HIV - 1BA - Lのgp120に対するいくつかの2&#39; -フルオロRNAアプタマーは、RNAのライブラリーからで隔離されています<em&gt; in vitroで</em&gt; SELEX手順。新しいデュアル阻害機能抗gp120のアプタマー - siRNAのキメラが作成され、全身の抗HIV治療のためにかなりの期待を示しています。

siRNA導入のための細胞型に特異的な抗HIV gp120のアプタマーの開発

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

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のための負の選択マーカーの開発赤痢アメーバ</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

ペプチドエピトープ特異的T細胞のMHCテトラマーベースの濃縮

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

宿主細胞のRNA合成でウイルス感染の効果を測定するためにクリックケミストリーを用いた

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

臍帯血移植後の水痘帯状疱疹ウイルス特異的細胞性免疫を評価するために、IFN-γELISPOTアッセイの開発

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

腸間膜リンパダクトカニューレを挿入ラットモデル：腸のリンパ医薬品輸送の評価への応用

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

によってエフェクター転効率を検査するための蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）を適用<em&gt; Q熱リケッチア</em&gt;のsiRNAサイレンシング中

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

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の検出のためのより高感度で特異的な発色性寒天培地の開発<em&gt;腸炎ビブリオ</em&gt;その他<em&gt;ビブリオ</em&gt;種

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

自己免疫に対する幹細胞由来の抗原特異的制御性T細胞の開発

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

「Acufection」と肌の研究への応用により、経済的なDNAデリバリーシステムの開発

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

ジカ特定診断エピトープの探索

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...