Name: efficient gene delivery into multiple cns territories using in utero electroporation
Uploaded: 2011-06-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation at JoVE.com

저자는 CS 실험실에서 utero의 electroporation 기술의 확립에서 초기 작업에 에바 Hadzimova, 피에르 Mattar과 크리스토퍼 코바치 감사하고 싶습니다. 이 작품은 캐나다 보건 연구소 연구소 (CIHR) 부여 (청소 44,094)과 DMK에 CS와 알버타 아동 병원 연구 재단 부여 팀 그랜트 (00933-000)을 신흥 CIHR / 재단 파이팅 실명 (FFB)에 의해 재정 지원되었다. RD가 CIHR 캐나다 희망 장학금 지원 되었음 RC는 FFB의 학생이기 지원하고 LML은 유전학에 CIHR 교육 그랜트와 아동 발달 지원했다.

1. 유연 체조 <ol><li> 설정 외과 영역은 그림에서 표시됩니다. 1A,. 설정의 주요 구성 요소는 Eppendorf Femtojet microinjector, 니들 홀더, Leica의 steromicroscope, 광섬유 조명 시스템, 전극과 ECM 830 스퀘어 웨이브 Electroporation 시스템, 난방 패드 및 isoflurane 마취를위한 기화기와 함께 Narishige의 micromanipulator를 포함합니다. </li><li> 수술 도구를 sonicating에 대한 Metriclean2 낮은 거품 솔루션을 사용하여 Bransonic 초음파 ?...

<ol>
	<li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Dev Biol. 240, 237-246 (2001).</li><li>Takahashi, M., Sato, K., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+gene+expressions+by+electroporation+in+the+developing+brain+of+mammalian+embryos.">Manipulating gene expressions by electroporation in the developing brain of mammalian embryos.</a> Differentiation. 70, 155-162 (2002).</li><li>Langevin, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+in+utero+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+gene+regulatory+elements+in+the+murine+telencephalon.+Dev+Dyn+236.">Validating in utero electroporation for the rapid analysis of gene regulatory elements in the murine telencephalon. Dev Dyn 236.</a> , 1273-1286 (2007).</li><li>Mattar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+helix-loop-helix+transcription+factors+cooperate+to+specify+a+cortical+projection+neuron+identity.">Basic helix-loop-helix transcription factors cooperate to specify a cortical projection neuron identity.</a> Mol Cell Biol. 28, 1456-1469 (2008).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Gaiano, N., Kohtz, J. D., Turnbull, D. H., Fishell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+rapid+gain-of-function+studies+in+the+mouse+embryonic+nervous+system.">A method for rapid gain-of-function studies in the mouse embryonic nervous system.</a> Nat Neurosci. 2, 812-819 (1999).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li><li>Petros, T. J., Rebsam, A., Mason, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+and+ex+vivo+electroporation+for+gene+expression+in+mouse+retinal+ganglion+cells.">In utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation.">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-103 (2007).</li><li>Kataoka, A., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fgf8+controls+regional+identity+in+the+developing+thalamus.">Fgf8 controls regional identity in the developing thalamus.</a> Development. 135, 2873-2881 (2008).</li><li>Vue, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+signaling+controls+thalamic+progenitor+identity+and+nuclei+specification+in+mice.">Sonic hedgehog signaling controls thalamic progenitor identity and nuclei specification in mice.</a> J Neurosci. 29, 4484-4497 (2009).</li><li>Tsuchiya, R., Takahashi, K., Liu, F. C., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+axonal+projections+from+mammillary+bodies+in+Pax6+mutant+mice:+possible+roles+of+Netrin-1+and+Slit+2+in+mammillary+projections.">Aberrant axonal projections from mammillary bodies in Pax6 mutant mice: possible roles of Netrin-1 and Slit 2 in mammillary projections.</a> J Neurosci Res. 87, 1620-1633 (2009).</li><li>Buffo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+pattern+of+the+transcription+factor+Olig2+in+response+to+brain+injuries:+implications+for+neuronal+repair.">Expression pattern of the transcription factor Olig2 in response to brain injuries: implications for neuronal repair.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 18183-18188 (2005).</li></ol>

utero에 electroporation은 개발 프로세스의 다양한 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, GFP, mCherry 또는 알칼리성 인산 가수 분해 효소와 같은 기자 유전자의 transfection은 혈통의 연결을 추적 및 마이 그 레이션 실험을 수행하는 데 사용할 수 있습니다. 또는, Cre 호텔 recombinase는 transiently 선택 공간 및 / 또는 temporally 제어 방식으로 floxed allele를 제거하는 표현하실 수 있습니다. 또한, shRNA ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 범주 </th></tr><tr><td> 파인 가위 </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 14078-10 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 곡선 홍채 가위, </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 14061-10 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 올슨 - 헤거 전 고상한 니들 홀더 </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 12002-12 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 링 포셉, 9mm </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 11103-09 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 아이 드레싱 Forcep </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 11051-10 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 더몬트 # 7 DMX Forcep </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 11271-30 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 더몬트 # 5 DMX Forcep </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 11251-30 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 조직 forcep - Adson </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 11027-12 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 리플렉스 클립 Applier </td><td> 세계 정밀 악기 </td><td> 500343 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 다공 스푼, 15mm 직경 </td><td> 좋은 과학 도구 주식 회사 </td><td> 10370-18 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> Autoclip의 리무버 </td><td> Mikron </td><td> 427637 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 실크 블랙 브레이 디드 봉합해 </td><td> Ethicon 주식 회사 </td><td> K871 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> 리플렉스 피부 폐쇄 스테인리스 상처 클립 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 500346 </td><td> 수술 도구 </td></tr><tr><td> ECM 830 스퀘어 웨이브 Electroporation 시스템 </td><td> VWR - CanLab </td><td> 58018-004 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> 핀셋 W / 가변 갑 2 라운드 5mm 플래티넘 플레이트 전극 </td><td> Protech 인터내셔널 </td><td> CUY650P5 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> 핀셋 W / 가변 갑 2 라운드 7mm 플래티넘 플레이트 전극 </td><td> Protech 인터내셔널 </td><td> CUY650P7 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Eppendorf Femtojet Microinjector </td><td> VWR CanLab </td><td> CA62111 - 488 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Eppendorf Femtojet Microinjector에 대한 풋 컨트롤 </td><td> VWR CanLab </td><td> CAACCESS (misc.) </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Bransonic 초음파 클리너 모델 1510R - DTH </td><td> VWR CanLab </td><td> CA33995 - 534 CPN - 952-118 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> 서터 P97 Micropipet 풀러 </td><td> 서터 악기, Carsen 그룹 주식 회사 </td><td> P - 97 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Micropipettes - 필라멘트 OD와 Borosilicate : 1mm, ID : 0.78 mm, 10cm 길이 </td><td> 서터 악기 </td><td> BF100 - 78-10 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> 3 축 거친 조작하는 사람 </td><td> 칼 자이스 혈구 캐나다 주식 회사 </td><td> M - 152 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> micromanipulator에 대한 자기 홀딩 장치 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> M1 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> micromanipulator에 대한 스틸베이스 플레이트 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 5052 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Micropipette 홀더 </td><td> 세계 환경 설정ecision 악기 </td><td> MPH3 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Micropipette 핸들 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> 5444 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> Stereomicroscope </td><td> Leica </td><td> MZ6 </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> isoflurane 마취를위한 기화기 </td><td> 포터 인 스트 루먼트 회사 </td><td> 모델 100 - F </td><td> 악기 </td></tr><tr><td> 수술 도구를 sonicating에 대한 Metriclean2로 거품 솔루션 </td><td> Metrex 리서치 주식 회사 </td><td> 10-8100 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> suturing 후 0.2 g의 메틸렌 블루 스프레이에 항생제 Gentamicin 40mg/ml </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> G1264 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> 수술 도구를 살균을위한 Germex </td><td> Vétoquinol </td><td> DIN # 00141569 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> BNP의 안과 연고 </td><td> Vétoquinol </td><td> DIN # 00516414 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> 나이르 ® </td><td> 처치 &amp; 드와이트 (주) (주)에 의해 배포 </td><td> 상용 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> Stanhexidine 4퍼센트 W / V 피부 청소기 </td><td> 오메가 연구소 주식 회사 </td><td> 01938983 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> Buprenorphine (Temgesic) 진통 </td><td> 셔링 - 플로 </td><td> 531-535 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> Sulpha &quot;25&quot;sulphamethazine 경구 항생제 </td><td> 프로 페셔널 베티 연구소 </td><td> DIN # 00308218 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> Lactated 링어 솔루션 </td><td> 백스터 코퍼레이션 </td><td> DIN # 0061085 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> 생리 - 0.9 %의 나트륨 염화물 </td><td> B - 브라운 의료 주식 회사 </td><td> DIN # 01924303 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> 흡입 마취 - Isoflurane USP </td><td> 캐나다 Inc의 제약 파트너 </td><td> DIN # 02237518 </td><td> 외과 시약 </td></tr><tr><td> 빠른 그린 FCF </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> F7252 </td><td> 외과 시약 </td></tr></tbody></table>

efficient gene delivery into multiple cns territories using in utero electroporation

유전자 표현을 조작할 수있는 능력은 여러 개발 경로의 해설로 이어지는, 현대 실험 발생학의 초석입니다. 몇몇 강력하고 잘 설립된 유전자 변형 기술은 모두 손실과 이득의 기능 모델의 생성을 허용, 마우스의 유전자 발현 수준을 조작하기 위해 사용할 수 있습니다. 그러나, 마우스 트렌스 제닉의 세대 비용과 시간이 소요 모두이다. 유전자 조작의 대체 방법을 따라서 넓게 모색하고 있습니다. utero에 electroporation 우리가 성공적으로 3,4을 적응 가지고 살고 마우스 배아의 1,2에 유전자 전달의 방법입니다. 그것은 크게 일반적으로 여자는 5에서 사용되는 비켜 electroporation 기술의 성공을 기반으로합니다. 간단히, DNA는 세포로 DNA의 이해 수있게 개발 두뇌와 전류가 발생 세포 점막에 일시 모공의 형성 응용 프로그램의 열려있는 심실로 주입됩니다. 젊은 태아의 타겟팅 초음파 유도 microinjection 프로토콜로 이전 6 설명을 필요로하는 동안 우리 손에, 배아는 효율적으로 배아 일 (E) 11.5 빠르면 electroporated 수 있습니다. 반대로, E15.5은 두정 골과 두뇌에 microinjection을 초래할 이마 뼈 분화의 발병으로 인해 우리가 쉽게 electroporate 수있는 최신 단계이다. 반대로, 망막은 embryogenesis의 끝 부분을 통해 액세스할 수 있습니다. 배아는 배아 또는 출생 후의 초기 기간 동안 어떤 시점에서 수집한 수 있습니다. 기자 구조의 주사 transfected 세포의 식별을 용이하게합니다. 날짜하려면, utero의 electroporation에서 가장 널리 neocortical 개발 1,2,3,4의 분석에 사용되고 있습니다. 최근 연구는 배아 망막 7, 8, 9 및 시상 10,11,12를 타겟으로합니다. 여기, 우리는 쉽게 배아 CNS의 다른 도메인을 대상으로 적용할 수 있습니다 utero의 electroporation 프로토콜의 수정을 제시한다. 우리는이 기술을 사용하여 우리가 배아 telencephalon, diencephalon과 망막을 대상 수있는 증거를 제공합니다. 대표 결과가 처음 우리가 배아 telencephalon의 전구 성숙, 분화 및 마이 그 레이션을 모니터링 수 있도록 측면 심실로의 DNA 구조 표현을 소개하는이 방법의 사용을 보여주는 제공됩니다. 우리는 또한 모니터링하는 diencephalic 핵에 신경을 차별의 철새 경로를 허용,이 기술은 제 3의 뇌실 주위 diencephalic 지역에 DNA를 대상으로하는 데 사용할 수있는 것으로 나타났습니다. 마지막으로, 우리는 우리가 망막 개발에 유전자 발현을 조작의 효과를 분석 있도록 micromanipulators의 사용 우리가 정확하게 subretinal 공간을 포함하는 작은 대상 분야로 DNA 구조를 소개하는 허용 보여줍니다.

Watch this Scientific Journal Video about Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation at JoVE.com

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

utero의 electroporation에서 개발 중추 신경계 (CNS)에서 공간과 temporally 제어 방식으로 신속한 유전자 전달 수 있습니다. 여기서 우리는 telencephalon, diencephalon 및 망막을 포함한 여러 배아 CNS의 도메인으로 표현 구조를 제공하는 데 사용할 수있는 utero의 electroporation 프로토콜에 매우 적응을 설명합니다.

사용하여 여러 개의 CNS 준주로 효율적인 유전자 전달 Utero에서 Electroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

마우스 Forebrain에 초음파 유도 Microinjection Utero에서 E9.5에서

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development.  However, because the uterine wall is opaque ...

연구

신경과학

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

utero에서 Electroporation은 두피 뉴런의 하위 집합의 유전자 기능을 학습에 대한 기본의 연결을 문화 뒤에

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

비 심실 플라스미드 주입 및 Electroporation에 의해 출생 후의 쥐 뇌에 유전자 전달

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

마우스 Utero에 Electroporation : 통제 Spatiotemporal 진 Transfection

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

사용하는 마우스 대뇌 피질과 해마의 시각화 및 Dendrites와 쪽이의 유전자 조작<em&gt; utero에서</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

몸에 붙이기 형질 전환 쥐의 발생에 의해<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로 및<em&gt; 생체 내</em&gt; 생물 발광 상영

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

마우스의 유전자 조작을 통해 시상 하부 개발<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

글루타민산 염과 GABA의 빠른 마이크로 이온 도입 : 시냅틱 통합을 조사하는 유용한 도구

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

중추 신경계에 대상 물질 전달을위한 마우스 미세 주입 기술<i&gt;를 통해</i&gt; 내부 경동맥

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

배아 마우스 두뇌의 organotypic 슬라이스 문화에서 마이 그 레이션 뉴런의 저속 공 촛점 이미징<em&gt; Utero에서</em&gt; 일렉트로 포 레이션

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...