Name: a high-throughput automated platform for the development of manufacturing cell lines for protein therapeutics
Uploaded: 2011-09-22T12:00:00
Duration: 7 min 48 s
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	<li>Hung, F., Deng, L., Ravnikar, P., Condon, R., Li, B., Do, L., Saha, D., Tsao, Y. S., Merchant, A., Liu, Z., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA+stability+and+antibody+production+in+CHO+cells:+improvement+through+gene+optimization.">mRNA stability and antibody production in CHO cells: improvement through gene optimization.</a> Biotechnol. J. 5, 393-401 (2010).</li><li>Brezinsky, S. C., Chiang, G. G., Szilvasi, A., Mohan, S., Shapiro, R. I., MacLean, A., Sisk, W., Thill, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+enriching+populations+of+transfected+CHO+cells+for+cells+of+higher+specific+productivity.">A simple method for enriching populations of transfected CHO cells for cells of higher specific productivity.</a> J. Immunol. Methods. 277, 141-155 (2003).</li><li>Kromenaker, S. J., Srienc, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+producer+hybridoma+cell+lines+after+cell+sorting:+a+case+study.">Stability of producer hybridoma cell lines after cell sorting: a case study.</a> Biotechnol. Prog. 10, 299-307 (1994).</li><li>Marder, P., Maciak, R. S., Fouts, R. L., Baker, R. S., Starling, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+cloning+of+hybridoma+cells+for+enhanced+immunoglobulin+production+using+flow+cytometric+cell+sorting+and+automated+laser+nephelometry.">Selective cloning of hybridoma cells for enhanced immunoglobulin production using flow cytometric cell sorting and automated laser nephelometry.</a> Cytometry. 11, 498-505 (1990).</li><li>Henegariu, O., Heerema, N., Wright, L. L., Bray-Ward, P., Ward, D. C., Vance, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+in+cytogenetic+slide+preparation:+controlled+chromosome+spreading+chemical+aging+and+gradual+denaturing.">Improvements in cytogenetic slide preparation: controlled chromosome spreading chemical aging and gradual denaturing.</a> Cytomery. 43, 101-109 (2001).</li><li>Meng, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grenn+fluorescent+protein+(GFP)+as+a+second+selectable+marker+for+selection+of+high+producing+clones+from+transfected+CHO+cells.">Grenn fluorescent protein (GFP) as a second selectable marker for selection of high producing clones from transfected CHO cells.</a> Gene. 242, 201-207 (2000).</li><li>DeMaria, C. T., Cairns, V., Schwarz, C., Zhang, J., Guerin, M., Zuena, E., Estes, S., Karey, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+clone+selection+for+recombinant+CHO+cells+using+a+FACS-based+high-throughput+screen.">Accelerated clone selection for recombinant CHO cells using a FACS-based high-throughput screen.</a> Biotechnol. Prog. 23, 465-472 (2007).</li><li>Weaver, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+microdrop+technology+for+rapid+isolation+of+rare+an+high+producer+cells.">Gel microdrop technology for rapid isolation of rare an high producer cells.</a> Nat. Med. 3, 583-585 (1997).</li></ol>

इस लेख के लेखक मर्क एंड कं, Inc के कर्मचारियों, जो स्तनधारी सेल लाइनों से प्रोटीन चिकित्सा विज्ञान के बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए इस विधि का उपयोग कर रहे हैं.

हम एक स्वचालित विनिर्माण सेल लाइन विकास मंच है कि अत्यधिक उत्पादक क्लोन के अलगाव के लिए सक्षम बनाता है, और मतलब में जबकि clonality और क्लोन स्थिरता सुनिश्चित करता है प्रस्तुत किया. सतह एंटीबॉडी धुंधला की सगाई FACSAria ™ सेल छँटाई के द्वारा पीछा उच्च एंटीबॉडी उत्पादकता के साथ एक क्लोन प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. हमारे परिणाम और अन्य रिपोर्टों 2-4 बताते हैं कि एंटीबॉडी transiently कोशिका की सतह पर प्रदर्शित स्तर सेल की उत्पादकता के साथ अच्छी तरह से सहसंबद्ध है. इस प्रकार, एक fluorescein संयुग्मित एंटीबॉडी झिल्ली जुड़े उत्पाद पहचान और उच्च उत्पादकों के अलगाव सहायता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वैकल्पिक रूप से, रिपोर्टर जीन और जेल microdrop प्रौद्योगिकी के coexpression 6-8 FACS द्वारा उच्च उत्पादन क्लोन के चयन की सुविधा इस्तेमाल किया गया है . FACS के माध्यम से उच्च उत्पादन क्लोन अलग करने के अलावा, अन्य प्रौद्योगिकियों के लिए एक ही लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए विकसित किया है. ये सलाखें बायोसाइंस CellSpot तकनीक है कि microspere एंटीबॉडी का पता लगाने प्रणालियों और लेजर स्क्रीनिंग तकनीक का उपयोग करता है के लिए अत्यधिक उत्पादक क्लोन की पहचान के लिए और अवांछित कोशिकाओं, Genetix ClonePix FL और StemCell टेक्नोलॉजीज ClonaCell EasyPick मंच है कि एक फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी पहचान प्रणाली का उपयोग कर उत्पादन सेल लाइनों के उच्च throughput स्क्रीनिंग प्रदर्शन को खत्म करने में शामिल . हम FACS क्लोनिंग विधि सतह जुड़े एंटीबॉडी के स्तर के आधार पर लागू चुना क्योंकि यह आपरेशन के आराम, उत्पादकता और clonality पर चयनात्मकता को जोड़ती है. TECAN स्वतंत्रता EVO ® तरल हैंडलिंग प्रणाली के रोजगार में काफी स्क्रीनिंग throughput, जो एक बहुत बड़ा सेल पूल से उच्च उपज क्लोन के लिए चयन करने का अवसर प्रदान करते हैं वृद्धि हुई है. HTRF, BioForte ऑक्टेट, HPLC, आदि, जैसे परख के लिए अन्य इंस्ट्रूमेंटेशन उच्च उत्पादकों का चयन और बाहर कम उत्पादकों स्क्रीनिंग के सभी संभव साधन हैं. CloneSelect Imager ™ के साथ क्लोन गठन पर नज़र रखने से, हम आवश्यक दस्तावेज उत्पन्न डिजीटल सेल लाइन के इतिहास के साथ clonality साबित. Clonality आगे आनुवंशिक गुणसूत्र पर एकल transgene एकीकरण साइट विशेषताएँ पुष्टि की है. एक subcloning कदम है, जो आमतौर पर करने के लिए clonality सुनिश्चित करने के लिए लिया जाता है इस तरह से समाप्त किया जा सकता है. यह सेल लाइन के विकास के लिए समय की 4-8 सप्ताह बचा लेगा. सारांश में, गुणवत्ता सेल लाइनों उच्च throughput स्वचालित मंच द्वारा उत्पन्न उच्च उत्पादकता, उत्पादन, स्थिरता और प्रलेखित सेल लाइन का इतिहास है कि बड़े पैमाने पर उत्पादन और वर्तमान नियामक आवश्यकताओं के लिए मांग को पूरा करना चाहिए दिखाया.

<table border="1"><tbody><tr><td> नाम </td><td> कंपनी </td></tr><tr><td> बी.डी. FACS Aria ™ सेल सॉर्टर </td><td> बायोसाइंस BD </td></tr><tr><td> CloneSelect ™ Imager </td><td> Genetix </td></tr><tr><td> TECAN स्वतंत्रता EVO ® तरल हैंडलिंग प्रणाली </td><td> Tecan समूह </td></tr></tbody></table>

a high-throughput automated platform for the development of manufacturing cell lines for protein therapeutics

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing requirement for drug supplies. The generation of production cell lines has traditionally involved manual operations that are labor-intensive, low-throughput and vulnerable to human errors. We report here an integrated high-throughput and automated platform for development of manufacturing cell lines for the production of protein therapeutics.
The combination of BD FACS Aria Cell Sorter, CloneSelect Imager and TECAN Freedom EVO liquid handling system has enabled a high-throughput and more efficient cell line development process. In this operation, production host cells are first transfected with an expression vector carrying the gene of interest 1, followed by the treatment with a selection agent. The stably-transfected cells are then stained with fluorescence-labeled anti-human IgG antibody, and are subsequently subject to flow cytometry analysis 2-4. Highly productive cells are selected based on fluorescence intensity and are isolated by single-cell sorting on a BD FACSAria. Colony formation from single-cell stage was detected microscopically and a series of time-laps digital images are taken by CloneSelect Imager for the documentation of cell line history. After single clones have formed, these clones were screened for productivity by ELISA performed on a TECAN Freedom EVO liquid handling system. Approximately 2,000 - 10,000 clones can be screened per operation cycle with the current system setup.
This integrated approach has been used to generate high producing Chinese hamster ovary (CHO) cell lines for the production of therapeutic monoclonal antibody (mAb) as well as their fusion proteins. With the aid of different types of detecting probes, the method can be used for developing other protein therapeutics or be applied to other production host systems. Comparing to the traditional manual procedure, this automated platform demonstrated advantages of significantly increased capacity, ensured clonality, traceability in cell line history with electronic documentation and much reduced opportunity in operator error.

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A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

एक उच्च throughput, प्रोटीन चिकित्सा के उत्पादन के लिए विनिर्माण सेल लाइन के विकास के लिए स्वचालित मंच वर्णित है. बी.डी. FACS Aria सेल सॉर्टर का कार्यान्वयन, CloneSelect Imager और TECAN स्वतंत्रता EVO तरल हैंडलिंग प्रणाली सेल लाइन के विकास में काफी वृद्धि हुई सुधार सेल लाइन गुणवत्ता और उच्च reproducibility के साथ प्रसंस्करण क्षमता का प्रदर्शन किया है.

एक उच्च throughput प्रोटीन चिकित्सा के लिए विनिर्माण सेल लाइन्स के विकास के लिए स्वचालित प्लेटफार्म

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

रिमोट phenotyping उच्च throughput के लिए माउस आँख का स्पष्टीकरण

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

छोटे rodents में Cystometry का प्रयोग: मूत्राशय Chemosensation की एक अध्ययन

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

मानव मानव neuroendocrine ट्यूमर चिकित्सा के अध्ययन के लिए एक तीन आयामी मॉडल के रूप में neuroendocrine ट्यूमर सेल लाइनों

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice

CNS चिकित्सा intranasal जाग चूहे प्रशासन

Intranasal administration is a method of delivering  therapeutic agents to the central nervous system (CNS). It is  non-invasive and allows large ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

मानव सीरम में एन मिथाइल-D-aspartate रिसेप्टर या dopamine का 2 रिसेप्टर के लिए एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए उच्च throughput फ्लो सेल आधारित परख

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

प्राथमिक ट्यूमर और / या पूर्व नैदानिक ​​के लिए एसोसिएटेड Metastases और चिकित्सा के नैदानिक ​​विकास के पूर्व vivo उपचार की प्रतिक्रिया

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

न्यूरोप्रोटेक्टिव रणनीतियाँ के लिए चिकित्सीय कारक की डिलिवरी के लिए इंजीनियर वयस्क स्टेम कोशिकाओं की उच्च throughput लक्षण वर्णन

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

Isolation and Immortalization of Patient-derived Cell Lines from Muscle Biopsy for Disease Modeling

रोग मॉडलिंग के लिए पेशी बायोप्सी से मरीज व्युत्पन्न सेल लाइनों के अलगाव और अमरता

The generation of patient-specific cell lines represents an invaluable tool for diagnostic or translational research, and these cells can be collected ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

एक उच्च Throughput, मल्टिप्लेक्स और लक्षित प्रोटिओमिक सीएसएफ परख Neurodegenerative Biomarkers और apolipoprotein ई isoforms स्थिति यों

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

High-Throughput Analysis of Optical Mapping Data Using ElectroMap

इलेक्ट्रोमैप का उपयोग करऑप्टिकल मानचित्रण डेटा के उच्च-Throughput विश्लेषण

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we ...