Name: a high-throughput automated platform for the development of manufacturing cell lines for protein therapeutics
Uploaded: 2011-09-22T12:00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics at JoVE.com

<ol>
	<li>Hung, F., Deng, L., Ravnikar, P., Condon, R., Li, B., Do, L., Saha, D., Tsao, Y. S., Merchant, A., Liu, Z., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA+stability+and+antibody+production+in+CHO+cells:+improvement+through+gene+optimization.">mRNA stability and antibody production in CHO cells: improvement through gene optimization.</a> Biotechnol. J. 5, 393-401 (2010).</li><li>Brezinsky, S. C., Chiang, G. G., Szilvasi, A., Mohan, S., Shapiro, R. I., MacLean, A., Sisk, W., Thill, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+enriching+populations+of+transfected+CHO+cells+for+cells+of+higher+specific+productivity.">A simple method for enriching populations of transfected CHO cells for cells of higher specific productivity.</a> J. Immunol. Methods. 277, 141-155 (2003).</li><li>Kromenaker, S. J., Srienc, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+producer+hybridoma+cell+lines+after+cell+sorting:+a+case+study.">Stability of producer hybridoma cell lines after cell sorting: a case study.</a> Biotechnol. Prog. 10, 299-307 (1994).</li><li>Marder, P., Maciak, R. S., Fouts, R. L., Baker, R. S., Starling, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+cloning+of+hybridoma+cells+for+enhanced+immunoglobulin+production+using+flow+cytometric+cell+sorting+and+automated+laser+nephelometry.">Selective cloning of hybridoma cells for enhanced immunoglobulin production using flow cytometric cell sorting and automated laser nephelometry.</a> Cytometry. 11, 498-505 (1990).</li><li>Henegariu, O., Heerema, N., Wright, L. L., Bray-Ward, P., Ward, D. C., Vance, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+in+cytogenetic+slide+preparation:+controlled+chromosome+spreading+chemical+aging+and+gradual+denaturing.">Improvements in cytogenetic slide preparation: controlled chromosome spreading chemical aging and gradual denaturing.</a> Cytomery. 43, 101-109 (2001).</li><li>Meng, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grenn+fluorescent+protein+(GFP)+as+a+second+selectable+marker+for+selection+of+high+producing+clones+from+transfected+CHO+cells.">Grenn fluorescent protein (GFP) as a second selectable marker for selection of high producing clones from transfected CHO cells.</a> Gene. 242, 201-207 (2000).</li><li>DeMaria, C. T., Cairns, V., Schwarz, C., Zhang, J., Guerin, M., Zuena, E., Estes, S., Karey, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+clone+selection+for+recombinant+CHO+cells+using+a+FACS-based+high-throughput+screen.">Accelerated clone selection for recombinant CHO cells using a FACS-based high-throughput screen.</a> Biotechnol. Prog. 23, 465-472 (2007).</li><li>Weaver, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+microdrop+technology+for+rapid+isolation+of+rare+an+high+producer+cells.">Gel microdrop technology for rapid isolation of rare an high producer cells.</a> Nat. Med. 3, 583-585 (1997).</li></ol>

Авторы этой статьи являются сотрудники компании Merck &amp; Co, Inc, которые используют этот метод для крупномасштабного производства белка терапии из клеточных линий млекопитающих.

Мы представили автоматизированное производство клеточной линии платформу разработки, которая позволяет изоляции высокопродуктивных клонов, а в среднем в то время как обеспечивает клональности и клонировать стабильности. Взаимодействие поверхностных меченых антител следует FACSAria сортировки ячейки ™ является ключом к получению одного клонов с высокой производительностью антител. Наши результаты и другие отчеты 2-4 показывают, что уровень антител временно отображаются на клеточной поверхности, хорошо коррелирует с производительностью клетки. Таким образом, флуоресцеин конъюгированных антител может быть использован для признать мембраны связанных продуктов и помощи изоляции высоким производителей. Кроме того, коэкспрессия репортер генов и технологии гель микрокапельной были использованы для облегчения выбора высокопродуктивных клонов FACS 6-8. В дополнение к изоляции высокопродуктивных клонов через FACS, другие технологии развились до достижения той же цели. К ним относятся решетчатым Bioscience технологии CellSpot который использует microspere антител системы обнаружения и лазерных технологий скрининга для выявления высокопроизводительные клоны и устранения нежелательных клеток, Genetix ClonePix FL и StemCell Технологии ClonaCell EasyPick платформы, которые выполняют высокопроизводительного скрининга производства клеточных линий использованием флуоресцентных системы обнаружения антител . Мы выбрали для реализации FACS метод клонирования основаны на поверхности соответствующего уровня антител, поскольку она сочетает в себе простоту в эксплуатации, избирательность на производительность и клональности. Занятости Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой обработки значительно увеличили скрининга, которые дают возможность выбрать для высокого выхода из клонов намного больше клетка бассейн. Другие приборы для анализа, таких как HTRF, Bioforte Октет, ВЭЖХ, и т.д., все возможные средства выбора высокой производителей и отсеивание низкой производителей. Отслеживая клон образование с CloneSelect Imager ™, мы получили необходимую документацию, чтобы доказать клональности с оцифрованными истории клеточной линии. Клональности подтверждается еще и генетически характеризуют одного сайта интеграции трансгена на хромосоме. Субклонирования шаг, который, как правило, принимаются для обеспечения клональности, таким образом, может быть устранена. Это позволит сэкономить 4-8 недель времени для развития клеток линии. В целом, качество клеточных линий порожденные высокой пропускной автоматизированная платформа показали высокую производительность, стабильность производства и документально истории клеточной линии, которая должна удовлетворить спрос на крупном производстве и действующих нормативных требований.

<table border="1"><tbody><tr><td> Имя </td><td> Компания </td></tr><tr><td> BD FACS Aria ™ сотовый Сортировщик </td><td> BD Bioscience </td></tr><tr><td> CloneSelect ™ Imager </td><td> Genetix </td></tr><tr><td> Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой обработки </td><td> Группа Tecan </td></tr></tbody></table>

a high-throughput automated platform for the development of manufacturing cell lines for protein therapeutics

Быстрорастущих биофармацевтической промышленности требует ускоренного развития высокоэффективных и надежных систем производства для удовлетворения растущих требований к поставках лекарств. Поколение производственных линий ячейка традиционно участвуют ручных операций, которые являются трудоемкими, низкая пропускная способность и уязвимы для человеческой ошибки. Мы сообщаем здесь интегрированной высокой пропускной способностью и автоматизированной платформы для развития производства клеточных линий для производства белка терапии. Сочетание BD FACS Aria ™ сотовый Сортировщик, CloneSelect ™ Imager и Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой обработки позволило высокой пропускной способностью и более эффективной клеточной линии процесса развития. В этой операции, клетки рабочих узлов, прежде трансфицированных выражением вектора, несущего ген интересов 1, после чего лечение выбора агента. Стабильно-трансфекции клетки затем окрашивали флюоресценции меченных анти-человеческого антитела IgG, и впоследствии подлежат проточной цитометрии анализа 2-4. Высокопродуктивные клетки выбирается в зависимости от интенсивности флуоресценции и изолированы от одноклеточных сортировка по BD FACSAria ™. Колония образования из одного-клеточной стадии был обнаружен микроскопически и ряд временных кругов цифровых изображений принимаются CloneSelect ™ Imager для документации клеточной линии истории. После одного клона образовались эти клоны были обследованы на производительность с помощью ИФА осуществляется на Tecan Свобода EVO ® жидкостной системой управления. Примерно 2000 - 10000 клонов может быть обследованы на операцию цикла с текущей настройки системы. Такой комплексный подход был использован для создания высокопродуктивных яичника китайского хомячка (СНО) клеточных линий для производства лечебных моноклональных антител (МКА), а также их белков слияния. С помощью различных типов обнаружения зондов, метод может быть использован для разработки других терапии белка или быть применены в других хост-систем производства. По сравнению с традиционной процедуры по эксплуатации, это автоматизированная платформа продемонстрировала преимущества значительно увеличила потенциал, обеспечить клональности, прослеживаемости в клеточной линии истории с электронной документацией и многое уменьшается возможность в ошибки оператора.

Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics at JoVE.com

A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

Высокой пропускной способностью, автоматизированная платформа изготовления развития клеточной линии для производства белка терапии описано. Реализация BD FACS Сортировщик сотовый Ария, CloneSelect Imager и Tecan Свобода EVO жидкостной системой обработки продемонстрировал значительно увеличили производительность обработки в ячейке развития соответствии с улучшенным качеством клеточной линии и высокую воспроизводимость.

Высокая пропускная способность автоматизированной платформы для развития производства клеточных линий для белка терапии

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

Мышь глаз Энуклеация для удаленного высокой пропускной Фенотипирование

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Использование Цистометрия в мелких грызунов: исследование мочевого пузыря Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Человека нейроэндокринной опухоли клеточных линий в качестве трехмерных моделей по изучению прав нейроэндокринные опухоли терапия

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice

Интраназального введения ЦНС терапии, чтобы Awake Мыши

Intranasal administration is a method of delivering  therapeutic agents to the central nervous system (CNS). It is  non-invasive and allows large ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Высокая пропускная проточной цитометрии Клеточная Анализ для выявления антител к N-метил-D-аспартат рецепторов или допамин-2 рецепторов в сыворотке человека

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Экс Vivo Лечение отклика первичных опухолей и / или связанных метастазов для доклинических и клинических развития Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

Высокая пропускная способность Характеристика взрослых стволовых клеток разработан для доставки терапевтических факторов для Нейропротекторное стратегий

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

Isolation and Immortalization of Patient-derived Cell Lines from Muscle Biopsy for Disease Modeling

Выделение и Иммортализация пациента, полученных клеточных линий мышечной биопсии для моделирования заболеваний

The generation of patient-specific cell lines represents an invaluable tool for diagnostic or translational research, and these cells can be collected ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

Высокая пропускная способность, Multiplexed и Targeted Протеомный CSF Анализ на Количественно нейродегенеративных биомаркеров и аполипопротеина Е изоформы Статус

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

High-Throughput Analysis of Optical Mapping Data Using ElectroMap

Высокопроходимый анализ оптических картографических данных с помощью ElectroMap

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we ...