Name: isolation of functional cardiac immune cells
Uploaded: 2011-12-05T12:00:00
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이 작품은 UNCF - 머크 대학원 과학 연구 논문 장학생 (JLM), 국립 심장, 폐, 및 혈액 연구소 부여 RO1 - HL - 62228 (JSJ)와 RO1 - HL - 073990 (JSJ)에 의해 지원되었다.

1. 행크스 &#39;잔액 소금 솔루션의 준비 (HBSS) <ol><li> 압력솥 1 L의 유리 비커는 1000 ML은 실린더 졸업하고, 바 저어. </li><li> 두 번 증류수로 900 ML 표시에 autoclaved 1 L의 유리 비커에 HBSS 분말 솔루션 Reconstitute. </li><li> Hepes 나 + 소금 3.4 g와 HBSS 용액을 혼합하고 집중 HCL 또는 NaOH을 사용 7.35-7.41 사이의 값을 산도를 조정합니다. </li><li> 원하는 산도가 획득하고 안정적​​인 유지되면 알부민이 완전히 해?...

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	<li>Brower, G. L., Chancey, A. L., Thanigaraj, S., Matsubara, B. B., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause+and+effect+relationship+between+myocardial+mast+cell+number+and+matrix+metalloproteinase+activity.">Cause and effect relationship between myocardial mast cell number and matrix metalloproteinase activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 283, H518-H525 (2002).</li><li>Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+inhibition+of+mast+cell+degranulation+prevents+left+ventricular+remodeling+induced+by+chronic+volume+overload+in+rats.">Pharmacologic inhibition of mast cell degranulation prevents left ventricular remodeling induced by chronic volume overload in rats.</a> Journal of Cardiac Failure. 11, 548-556 (2005).</li><li>Chancey, A. L., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+mast+cell-mediated+activation+of+gelatinase+and+alteration+of+ventricular+diastolic+function.">Cardiac mast cell-mediated activation of gelatinase and alteration of ventricular diastolic function.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 282, H2152-H2158 (2002).</li><li>Levick, S. P., Gardner, J. D., Holland, M., Hauer-Jensen, M., Janicki, J. S., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+from+adverse+myocardial+remodeling+secondary+to+chronic+volume+overload+in+mast+cell+deficient+rats.">Protection from adverse myocardial remodeling secondary to chronic volume overload in mast cell deficient rats.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 43, 56-61 (2008).</li><li>Levick, S. P., McLarty, J. L., Murray, D. B., Freeman, R. M., Carver, W. E., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Mast+Cells+Mediate+Left+Ventricular+Fibrosis+in+the+Hypertensive+Rat.">Cardiac Mast Cells Mediate Left Ventricular Fibrosis in the Hypertensive Rat.</a> Hypertension. 53, 1041-1047 (2009).</li><li>Batista, M. L., Santos, R. V., Cunha, L. M., Mattos, K., Oliveira, E. M., Seelander, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+pro-inflammatory+cytokine+production+and+peritoneal+macrophage+function+in+rats+with+chronic+heart+failure.">Changes in the pro-inflammatory cytokine production and peritoneal macrophage function in rats with chronic heart failure.</a> Cytokine. 34, 284-290 (2006).</li><li>Galli, S. J., Tsai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+Cells:+Versatile+regulator+of+inflammation,+tissue+remodeling,+host+defense+and+homeostasis.">Mast Cells: Versatile regulator of inflammation, tissue remodeling, host defense and homeostasis.</a> Journal of Dermatological Science. 49, 7-19 (2008).</li><li>Yndestad, A., Holm, A. M., Muller, F., Simonsen, S., Froland, S. S., Gullested, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+expression+of+inflammatory+cytokines+and+activation+markers+in+T-cells+from+patients+with+chronic+heart+failure.">Enhanced expression of inflammatory cytokines and activation markers in T-cells from patients with chronic heart failure.</a> Cardiovasc. Res. 60, 141-146 (2003).</li><li>Bozkurt, B., Kribbs, S. B., Clubb, F. J., Michael, L. H., Didenko, V. V., Hornsby, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiologically+Relevant+Concentrations+of+Tumor+Necrosis+Factor-&#x0251;+Promote+Progressive+Left+Ventricular+Dysfunction+and+Remodeling+in+Rats.">Pathophysiologically Relevant Concentrations of Tumor Necrosis Factor-&#x0251; Promote Progressive Left Ventricular Dysfunction and Remodeling in Rats.</a> Circulation. 97, 1382-1391 (1998).</li><li>Frangogiannis, N. G., Lindsey, M. L., Michael, L. H., Youker, K. A., Bressler, R. B., Mendoza, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+Cardiac+Mast+Cells+Degranulate+and+Release+Preformed+TNF-&#x0251;,+Initiating+the+Cytokine+Cascade+in+Experimental+Canine+Myocardial+Ischemia/Reperfusion.">Resident Cardiac Mast Cells Degranulate and Release Preformed TNF-&#x0251;, Initiating the Cytokine Cascade in Experimental Canine Myocardial Ischemia/Reperfusion.</a> Circulation. 98, 699-710 (1998).</li><li>Jobe, L. J., Melendez, G. C., Levick, S. P., Du, Y., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-&#945;+inhibition+attenuates+adverse+myocardial+remodeling+in+a+rat+model+of+volume+overload.">TNF-&#945; inhibition attenuates adverse myocardial remodeling in a rat model of volume overload.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1462-H1468 (2009).</li><li>Forman, M. F., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+histamine+secretion+during+isolation+of+rat+cardiac+mast+cells.">Spontaneous histamine secretion during isolation of rat cardiac mast cells.</a> Inflammation Research. 53, 453-457 (2004).</li><li>Levick, S. P., Murray, D. B., Janicki, J. S., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+nervous+system+modulation+of+inflammation+and+remodeling+in+the+hypertensive+heart.">Sympathetic nervous system modulation of inflammation and remodeling in the hypertensive heart.</a> Hypertension. 55, 270-276 (2010).</li><li>Morgan, L., Levick, S., Voloshenyuk, T., Murray, D., Forman, M., Brower, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+isolating+functional+mast+cells+from+the+heart.">A novel technique for isolating functional mast cells from the heart.</a> Inflammation Research. 57, 241-246 (2008).</li></ol>

심장 면역 세포를 분리 이러한 방법은 일반적으로 전통적인 효소 소화 절연 기술 중에 발생하는 원치 않는 작동하지 않고 자신의 기능, 표현형, 그리고 성숙의 분석을 수 있습니다. 이 기술을 얻은 세포의 평균 총수는 쥐 심장 당 400,000 주위되며, 이러한 세포의 차동 얼룩 및 유동세포계측법 분석 T - lymphocytes의 혼합 인구 (~ 70 %), macrophages (~ 12 %)와 마스트 세포와를 나타냅니다 이 기법의 사용. (~ 12 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 및 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 행크스 &#39;균형 소금 </td><td> 시그마 </td><td> H4891 </td><td> 한 병은 행크스 &#39;대차 소금 1 패하게 솔루션. Reconstitute 행크스 &#39;밸런스 소금 절차의 일환으로 솔루션입니다. </td></tr><tr><td> 항생제 - Antimyotic </td><td> Gibco </td><td> 15240-062 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 시그마 </td><td> H3784 </td><td></td></tr><tr><td> 소 혈청 알부민 </td><td> 시그마 </td><td> A3912 </td><td></td></tr><tr><td> 250 ML의 Nalogene 필터 병 </td><td> Thermoscientific </td><td> 157-0020 </td><td></td></tr><tr><td> 12 N HCL </td><td> 피셔 과학 </td><td> CAS 7647-01-0 </td><td> 6 N 들어, deionized에 HCL의 동일한 볼륨을 추가물. </td></tr><tr><td> 10 N NaOH </td><td> 피셔 과학 </td><td> SC267 </td><td> 5 N 들어, 탈이온수에 NaOH 동등한 볼륨을 추가합니다. </td></tr><tr><td> 두 번 증류수 </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 특정 장비의 테이블 : <table border="1"><tbody><tr><td> 시약 및 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 3 - O 봉합사 실크 꼰 </td><td> Ethicon 제품 </td><td> SA64H </td><td></td></tr><tr><td> 작은 동물 환풍기 </td><td> CWE 법인 </td><td> SAR - 830 </td><td> 분 당 40.5 심호흡으로 호흡 속도를 설정합니다. </td></tr><tr><td> 베벨 18 게이지 바늘 </td><td> BD Biosciences </td><td> 305,199 </td><td> tracheal 튜브로 사용하기 위해 원래 길이의 1 / 2 4분의 3로 바늘을 낸다. </td></tr><tr><td> 24 게이지 박스터 빠른 선배 카테터의 테플론 팁 (바늘이 제거된) </td><td> 벡스터 </td><td> 2N111 </td><td> 1 / 2 4분의 3로 테플론 팁 길이를 줄입니다. </td></tr><tr><td> 10 CC 주사기 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 14-823 - 16B </td><td></td></tr><tr><td> 15 ML 팔콘 튜브 </td><td> BD Biosciences </td><td> 352,097 </td><td></td></tr><tr><td> Sorvall RT6000B 냉장 원심 분리기 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 75-004-377 </td><td> 사전 냉각 기억하고 4 유지 ° C. </td></tr><tr><td> Hyclone </td><td> Thermoscientific </td><td> S300030.02 </td><td></td></tr><tr><td> Hemocytometer </td><td> Hausser 과학 </td><td> HS - LB - 1483 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of functional cardiac immune cells

심장 면역 세포들은 많은 심장 질환의 병리 리모델링에서 재생 역할에 대한 관심을 쫒아오고 있습니다 마스트 세포, T - 세포 및 macrophages 포함 1-5 이들 면역 세포;. 저장하고 크린 시토킨 및 포함하여 생물학적으로 활성 중재자 다양한 릴리스 같은 tryptase 같은 프로 테아제. 6-8이 중재자는 매트릭스 metalloproteinases를 활성화하거나 modulating 심장 섬유아 세포 &#39;기능에 의해 콜라겐 축적을 유발하여 세포외 기질 대사의 주요 선수로 표시되었습니다. 9-11하지만, 심장 면역 세포를 분리에 사용할 기술이있다 그들은 심근 조직을 소화 박테리아 collagenase을 사용하기 때문에 문제가되었습니다. 이 기술은 면역 세포의 활성화 및 따라서 기능의 손실을 초래합니다. 예를 들어, 심장 마스트 세포가 degranulation의 원인이 화합물에 훨씬 적은 반응이된다. 12 따라서, 우리는 t을 허용하는 기술을 개발그는 심장 질환에서 이러한 세포의 역할에 대한 이해로 이어질 것입니다 기능적 심장 면역 세포의 분리. 13, 14 이 방법은 심장의 해부 쥐의 검상 돌기 프로세스, 겨드랑이와 낫 모양의 제품 인대의 위치, 그리고 심낭과 친숙이 필요합니다. 이러한 랜드마크 프로 시저의 성공을 증가하고 심장 면역 세포의 높은 수율을 보장하기 위해 중요합니다. 이러한 격리 심장 면역 세포는 그 기능 표현형, 만기, 그리고 다른 심장 세포와 공동 배양 실험들은 상호 작용의 더 나은 이해를 얻을 수의 특성에 사용될 수 있습니다.

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Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

마음에서 기능적 면역 세포를 분리를위한이 방법은 이러한 세포의 감소 반응의 결과로, 원치 않는 면역 세포 활성화의 원인이 collagenase의 소화의 종래의 방법에 대한 대안을 제공합니다. 격리 우리의 방법은 효소 소화와 관련된 문제를 피함으로써 기능 심장병 면역 세포를 산출.

심장 기능 면역 세포의 분리

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

유동세포계측법로 고정하고 살아있는 세포에서 Calpain 활동을 측정

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

연구

면역학 및 감염병학

Seven Steps to Stellate Cells

셀을 별 모양으로 일곱 단계

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

2 - 광자 현미경을 사용하여 마우스 Thymus의 Intravital 영상

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

골수 이식으로 마우스 대장염에서 면역 및 비 면역 세포에서 유전자 발현의 기능 역할을 차별화

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

기능 및 분자 연구 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포의 흐름 Cytometric 절연

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

지방 조직 면역 세포의 분리

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

요오드 산 쉬프 염색 말초 혈액 단핵 세포에서 글리코겐을 감지

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

허혈성 마우스 뇌에서 면역 세포의 분리 및 유세포 분석

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

절연, 특성화 및 잇몸 면역 세포 네트워크의 기능 시험

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

절연 및 특성화 Neutrophil 파생 된 미의 기능 연구

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...