Name: isolation of functional cardiac immune cells
Uploaded: 2011-12-05T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Functional Cardiac Immune Cells at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av en UNCF-Merck Graduate Science Research Dissertation Fellowship (JLM), National Heart, Lung, and Blood Institute stipend RO1-HL-62228 (JSJ) og RO1-HL-073990 (JSJ).

1. Utarbeidelse av Hanks &#39;Balance Salt Solution (HBSS) <ol><li> Autoclave 1 L glass beger, uteksaminert 1000 ml sylinder, og rør bar. </li><li> Rekonstituer HBSS pulveret løsningen i autoklaveres 1 L glass beger til 900 ml merket med dobbelt destillert vann. </li><li> Bland HBSS løsning med 3,4 g Hepes Na + salt og juster pH til en verdi mellom 7,35 til 7,41 ved hjelp av enten konsentrert HCl eller NaOH. </li><li> Når ønsket pH er nådd og forblir stabil, tilsett 5 g bovint serum albumin til løsningen ved ro...

<ol>
	<li>Brower, G. L., Chancey, A. L., Thanigaraj, S., Matsubara, B. B., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause+and+effect+relationship+between+myocardial+mast+cell+number+and+matrix+metalloproteinase+activity.">Cause and effect relationship between myocardial mast cell number and matrix metalloproteinase activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 283, H518-H525 (2002).</li><li>Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+inhibition+of+mast+cell+degranulation+prevents+left+ventricular+remodeling+induced+by+chronic+volume+overload+in+rats.">Pharmacologic inhibition of mast cell degranulation prevents left ventricular remodeling induced by chronic volume overload in rats.</a> Journal of Cardiac Failure. 11, 548-556 (2005).</li><li>Chancey, A. L., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+mast+cell-mediated+activation+of+gelatinase+and+alteration+of+ventricular+diastolic+function.">Cardiac mast cell-mediated activation of gelatinase and alteration of ventricular diastolic function.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 282, H2152-H2158 (2002).</li><li>Levick, S. P., Gardner, J. D., Holland, M., Hauer-Jensen, M., Janicki, J. S., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+from+adverse+myocardial+remodeling+secondary+to+chronic+volume+overload+in+mast+cell+deficient+rats.">Protection from adverse myocardial remodeling secondary to chronic volume overload in mast cell deficient rats.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 43, 56-61 (2008).</li><li>Levick, S. P., McLarty, J. L., Murray, D. B., Freeman, R. M., Carver, W. E., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Mast+Cells+Mediate+Left+Ventricular+Fibrosis+in+the+Hypertensive+Rat.">Cardiac Mast Cells Mediate Left Ventricular Fibrosis in the Hypertensive Rat.</a> Hypertension. 53, 1041-1047 (2009).</li><li>Batista, M. L., Santos, R. V., Cunha, L. M., Mattos, K., Oliveira, E. M., Seelander, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+pro-inflammatory+cytokine+production+and+peritoneal+macrophage+function+in+rats+with+chronic+heart+failure.">Changes in the pro-inflammatory cytokine production and peritoneal macrophage function in rats with chronic heart failure.</a> Cytokine. 34, 284-290 (2006).</li><li>Galli, S. J., Tsai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+Cells:+Versatile+regulator+of+inflammation,+tissue+remodeling,+host+defense+and+homeostasis.">Mast Cells: Versatile regulator of inflammation, tissue remodeling, host defense and homeostasis.</a> Journal of Dermatological Science. 49, 7-19 (2008).</li><li>Yndestad, A., Holm, A. M., Muller, F., Simonsen, S., Froland, S. S., Gullested, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+expression+of+inflammatory+cytokines+and+activation+markers+in+T-cells+from+patients+with+chronic+heart+failure.">Enhanced expression of inflammatory cytokines and activation markers in T-cells from patients with chronic heart failure.</a> Cardiovasc. Res. 60, 141-146 (2003).</li><li>Bozkurt, B., Kribbs, S. B., Clubb, F. J., Michael, L. H., Didenko, V. V., Hornsby, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiologically+Relevant+Concentrations+of+Tumor+Necrosis+Factor-&#x0251;+Promote+Progressive+Left+Ventricular+Dysfunction+and+Remodeling+in+Rats.">Pathophysiologically Relevant Concentrations of Tumor Necrosis Factor-&#x0251; Promote Progressive Left Ventricular Dysfunction and Remodeling in Rats.</a> Circulation. 97, 1382-1391 (1998).</li><li>Frangogiannis, N. G., Lindsey, M. L., Michael, L. H., Youker, K. A., Bressler, R. B., Mendoza, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+Cardiac+Mast+Cells+Degranulate+and+Release+Preformed+TNF-&#x0251;,+Initiating+the+Cytokine+Cascade+in+Experimental+Canine+Myocardial+Ischemia/Reperfusion.">Resident Cardiac Mast Cells Degranulate and Release Preformed TNF-&#x0251;, Initiating the Cytokine Cascade in Experimental Canine Myocardial Ischemia/Reperfusion.</a> Circulation. 98, 699-710 (1998).</li><li>Jobe, L. J., Melendez, G. C., Levick, S. P., Du, Y., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-&#945;+inhibition+attenuates+adverse+myocardial+remodeling+in+a+rat+model+of+volume+overload.">TNF-&#945; inhibition attenuates adverse myocardial remodeling in a rat model of volume overload.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1462-H1468 (2009).</li><li>Forman, M. F., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+histamine+secretion+during+isolation+of+rat+cardiac+mast+cells.">Spontaneous histamine secretion during isolation of rat cardiac mast cells.</a> Inflammation Research. 53, 453-457 (2004).</li><li>Levick, S. P., Murray, D. B., Janicki, J. S., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+nervous+system+modulation+of+inflammation+and+remodeling+in+the+hypertensive+heart.">Sympathetic nervous system modulation of inflammation and remodeling in the hypertensive heart.</a> Hypertension. 55, 270-276 (2010).</li><li>Morgan, L., Levick, S., Voloshenyuk, T., Murray, D., Forman, M., Brower, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+isolating+functional+mast+cells+from+the+heart.">A novel technique for isolating functional mast cells from the heart.</a> Inflammation Research. 57, 241-246 (2008).</li></ol>

Denne metoden for å isolere hjertestans immunceller muliggjør analyse av deres funksjon, phenotype, og modenhet uten uønskede aktivering som vanligvis oppstår under en tradisjonell enzymatisk fordøyelse isolasjon teknikk. Den gjennomsnittlige totale antall celler oppnådd med denne teknikken er rundt 400 000 per rotte hjerte, og differensial flekker og flowcytometri analyse av disse cellene indikerer blandet populasjon av T-lymfocytter (~ 70%), makrofager (~ 12%) og mast celler med bruken av denne teknikken. (~ 12%...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på Reagens og utstyr </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Hanks &#39;Balansert Salt </td><td> Sigma </td><td> H4891 </td><td> En flaske gjør 1 L av Hanks &#39;Balance Salt Solution. Rekonstituer Hanks &#39;Balance Salt Løsning som en del av prosedyren. </td></tr><tr><td> Antibiotika-Antimyotic </td><td> Gibco </td><td> 15240-062 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3784 </td><td></td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumin </td><td> Sigma </td><td> A3912 </td><td></td></tr><tr><td> 250 mL Nalogene Filter Bottle </td><td> Thermoscientific </td><td> 157-0020 </td><td></td></tr><tr><td> 12 N HCL </td><td> Fisher Scientific </td><td> CAS 7647-01-0 </td><td> For 6 N, legge like mengder HCL til avionisertvann. </td></tr><tr><td> 10 N NaOH </td><td> Fisher Scientific </td><td> SC267 </td><td> For 5 N, legger like volum av NaOH til avionisert vann. </td></tr><tr><td> Double Destillert vann </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabell over Utstyr: <table border="1"><tbody><tr><td> Navn på Reagens og utstyr </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> 3-O Suture Silk Flettet </td><td> Ethicon Products </td><td> SA64H </td><td></td></tr><tr><td> Small Animal Ventilator </td><td> CWE Incorporated </td><td> SAR-830 </td><td> Still pustefrekvens til 40,5 pust per minutt. </td></tr><tr><td> Bevel 18 gauge nål </td><td> BD Biosciences </td><td> 305199 </td><td> Trim nål med 1 / 2 til 3 / 4 av sin opprinnelige lengde til bruk som trakealtuben. </td></tr><tr><td> Teflon Tip (med nål fjernet) av 24-gauge Baxter hurtig-Cath kateter </td><td> Baxter </td><td> 2N111 </td><td> Reduser Teflon Tips lengden av 1 / 2 til 3 / 4. </td></tr><tr><td> 10 cc sprøyte </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-823-16B </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml Falcon rør </td><td> BD Biosciences </td><td> 352097 </td><td></td></tr><tr><td> Sorvall RT6000B kjøleskip Centrifuge </td><td> Fisher Scientific </td><td> 75-004-377 </td><td> Husk å pre-cool og holde ved 4 ° C. </td></tr><tr><td> Hyclone </td><td> Thermoscientific </td><td> S300030.02 </td><td></td></tr><tr><td> Hemocytometer </td><td> Hausser Scientific </td><td> HS-LB-1483 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of functional cardiac immune cells

Cardiac immunceller er økende interesse for rollene de spiller i den patologiske remodeling i mange hjertesykdommer 1-5 Disse immunceller, som inkluderer mast celler, T-celler og makrofager;. Lagre og utgi en rekke biologisk aktive mediatorer inkludert cytokiner og proteaser som tryptase. 6-8 Disse mediatorer har vist seg å være sentrale aktører i ekstracellulær matrix metabolismen ved å aktivere matrix metalloproteinaser eller forårsaker kollagen opphopning av modulating den kardiale fibroblaster &quot;funksjon. 9-11, men tilgjengelige teknikker for å isolere kardiale immunceller har vært problematisk fordi de bruker bakteriell collagenase å fordøye hjerteinfarkt vev. Denne teknikken fører til aktivering av immunceller og dermed tap av funksjon. For eksempel hjertestans mast celler blir betydelig mindre mottakelig for forbindelser som forårsaker degranulation. 12 Derfor har vi utviklet en teknikk som gjør det mulig for than isolering av funksjonelle kardiale immunceller som ville føre til en bedre forståelse av hvilken rolle disse cellene i hjertesykdom. 13, 14 Denne metoden krever en fortrolighet med den anatomiske plasseringen av rotte er xiphoid prosess, armhulen og falciform ligament, og perikard av hjertet. Disse landemerkene er viktig å øke suksessen av prosedyren og for å sikre en høyere avkastning av hjertestans immunceller. Disse isolerte hjertestans immunceller kan deretter brukes for karakterisering av funksjonalitet, phenotype, modenhet og co-kulturen eksperimenter med andre kardiale celler for å få en bedre forståelse av deres vekselvirkninger.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Functional Cardiac Immune Cells at JoVE.com

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Denne metoden for å isolere funksjonelle immunceller fra hjertet gir et alternativ til konvensjonelle metoder for collagenase fordøyelsen, noe som fører til uønskede immunceller aktivering, som resulterer i en redusert respons av disse cellene. Vår metode for isolering gir funksjonelle kardiale immune celler ved å unngå problemer knyttet til enzymatisk fordøyelse.

Isolering av Funksjonelle Cardiac immunceller

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Seven Steps to Stellate Cells

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Intravital Imaging av Mouse Thymus med 2-Photon Mikroskopi

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

Skille funksjonelle roller av genuttrykk fra immune og ikke-immune celler i mus Kolitt av benmargstransplantasjon

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

Flowcytometrisk Isolering av Primary Murine Type II alveolære epitelceller for Funksjonell og molekylær studier

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

Isolering av fettvev immunceller

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

Oppdager Glykogen i perifere mononukleære blodceller med Periodisk Acid Schiff Farging

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolasjon og flowcytometrisk analyse av immunceller fra iskemisk Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolasjon, karakterisering og Funksjonell Undersøkelse av Gingival immun Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

Isolering og karakterisering av nøytrofile-avledet Microparticles for funksjonell studier

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...