Dit werk werd gefinancierd door National Institutes of Health te verlenen GM086822, Hope Heart Institute Basic Sciences Award, en de MJ Murdock Charitable Trust College Science Research Program. Selecteer elektroforese reagentia en beeldanalyse-software werden genereus geleverd door Bio-Rad.

1. De voorbereiding van de cel cytosol met functionele GR <ol><li> Technische noot: Alle buffers moeten worden gekoeld en elke stap van dit protocol, met inbegrip van centrifugations en incubatie, moeten uitgevoerd op ijs of bij 4 ° C, tenzij anders vermeld. De lage temperatuur is essentieel voor de afbraak van de GR en eiwit-complexen te voorkomen. </li><li> Met behulp van een gekoelde centrifuge, het verkrijgen van een ~ 1-5 ml pellet van cellen die een hoge concentratie van functionele GR uitdrukt. Voorbeelden van...

<ol>
	<li>Pratt, W. B., Toft, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+signaling+protein+function+and+trafficking+by+the+hsp90/hsp70-based+chaperone+machinery.">Regulation of signaling protein function and trafficking by the hsp90/hsp70-based chaperone machinery.</a> Exp. Biol. Med. 228, 111-133 (2003).</li><li>Murphy, P. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+glucocorticoid+receptor+steroid+binding+and+trafficking+by+the+hsp90/hsp70-based+chaperone+machinery:+implications+for+clinical+intervention.">Regulation of glucocorticoid receptor steroid binding and trafficking by the hsp90/hsp70-based chaperone machinery: implications for clinical intervention.</a> Leukemia. 19, 710-712 (2005).</li><li>Pratt, W. B., Morishima, Y., Osawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hsp90+chaperone+machinery+regulates+signaling+by+modulating+ligand+binding+clefts.">The Hsp90 chaperone machinery regulates signaling by modulating ligand binding clefts.</a> J. Biol. Chem. 283, 22885-22889 (2008).</li><li>Dittmar, K. D., Hutchison, K. A., Owens-Grillo, J. K., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+the+steroid+receptor&#149;hsp90+heterocomplex+assembly+system+of+rabbit+reticulocyte+lysate.">Reconstitution of the steroid receptor&#149;hsp90 heterocomplex assembly system of rabbit reticulocyte lysate.</a> J. Biol. Chem. 271, 12833-12839 (1996).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hsp+organizer+protein+hop+enhances+the+rate+of+but+is+not+essential+for+glucocorticoid+receptor+folding+by+the+multiprotein+Hsp90-based+chaperone+system.">The Hsp organizer protein hop enhances the rate of but is not essential for glucocorticoid receptor folding by the multiprotein Hsp90-based chaperone system.</a> J. Biol. Chem. 275, 6894-6900 (2000).</li><li>Murphy, P. J. M., Kanelakis, K. C., Galigniana, M. D., Morishima, Y., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stoichiometry,+abundance,+and+functional+significance+of+the+hsp90/hsp70-based+multiprotein+chaperone+machinery+in+reticulocyte+lysate.">Stoichiometry, abundance, and functional significance of the hsp90/hsp70-based multiprotein chaperone machinery in reticulocyte lysate.</a> J. Biol. Chem. 276, 30092-30098 (2001).</li><li>Dittmar, K. D., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folding+of+the+glucocorticoid+receptor+by+the+reconstituted+Hsp90-based+chaperone+machinery.+The+initial+hsp90.p60.hsp70-dependent+step+is+sufficient+for+creating+the+steroid+binding+conformation.">Folding of the glucocorticoid receptor by the reconstituted Hsp90-based chaperone machinery. The initial hsp90.p60.hsp70-dependent step is sufficient for creating the steroid binding conformation.</a> J. Biol. Chem. 272, 13047-13054 (1997).</li><li>Kanelakis, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+the+hsp70-binding+protein+BAG-1+on+glucocorticoid+receptor+folding+by+the+hsp90-based+chaperone+machinery.">Differential effects of the hsp70-binding protein BAG-1 on glucocorticoid receptor folding by the hsp90-based chaperone machinery.</a> J. Biol. Chem. 274, 34134-34140 (1999).</li><li>Morishima, Y., Kanelakis, K. C., Murphy, P. J. M., Shewach, D. S., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+iterative+ratcheting+of+receptor-bound+hsp70+between+its+ATP+and+ADP+conformations+during+assembly+of+glucocorticoid+receptor.hsp90+heterocomplexes.">Evidence for iterative ratcheting of receptor-bound hsp70 between its ATP and ADP conformations during assembly of glucocorticoid receptor.hsp90 heterocomplexes.</a> Biochemistry. 40, 1109-1116 (2001).</li><li>Murphy, P. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pifithrin-alpha+inhibits+p53+signaling+after+interaction+of+the+tumor+suppressor+protein+with+hsp90+and+its+nuclear+translocation.">Pifithrin-alpha inhibits p53 signaling after interaction of the tumor suppressor protein with hsp90 and its nuclear translocation.</a> J. Biol. Chem. 279, 30195-30201 (2004).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Morishima, Y., Murphy, P. J. M., Li, D. P., Sanchez, E. R., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stepwise+assembly+of+a+glucocorticoid+receptor&#149;hsp90+heterocomplex+resolves+two+sequential+ATP-dependent+events+involving+first+hsp70+and+then+hsp90+in+opening+of+the+steroid+binding+pocket.">Stepwise assembly of a glucocorticoid receptor&#149;hsp90 heterocomplex resolves two sequential ATP-dependent events involving first hsp70 and then hsp90 in opening of the steroid binding pocket.</a> J. Biol. Chem. 275, 18054-18060 (2000).</li><li>Pratt, W. B., Toft, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+receptor+interactions+with+heat+shock+protein+and+immunophilin+chaperones.">Steroid receptor interactions with heat shock protein and immunophilin chaperones.</a> Endocr. Rev. 18, 306-360 (1997).</li><li>Bodwell, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+phosphorylated+sites+in+the+mouse+glucocorticoid+receptor.">Identification of phosphorylated sites in the mouse glucocorticoid receptor.</a> J. Biol. Chem. 266, 7549-7555 (1991).</li><li>Penna, A., Cahalan, M. W. e. s. t. e. r. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blotting+using+the+Invitrogen+NuPage+Novex+Bis+Tris+minigels.">Blotting using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris minigels.</a> J. Vis. Exp. (7), e264-e264 (2007).</li><li>Choo, Y. S., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Protein+Ubiquitination.">Detection of Protein Ubiquitination.</a> J. Vis. Exp. (30), e1293-e1293 (2009).</li><li>Murphy, P. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+mechanism+of+assembly+of+a+glucocorticoid+receptor&amp;bull;Hsp70+complex+that+is+primed+for+subsequent+Hsp90-dependent+opening+of+the+steroid+binding+cleft.">Visualization and mechanism of assembly of a glucocorticoid receptor&amp;bull;Hsp70 complex that is primed for subsequent Hsp90-dependent opening of the steroid binding cleft.</a> J. Biol. Chem. 278, 34764-34773 (2003).</li><li>Schrum, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-sensitivity+detection+and+quantitative+analysis+of+native+protein-protein+interactions+and+multiprotein+complexes+by+flow+cytometry.">High-sensitivity detection and quantitative analysis of native protein-protein interactions and multiprotein complexes by flow cytometry.</a> Sci STKE. 389, pl2-pl2 (2007).</li><li>Davis, T. R., Schrum, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IP-FCM:+Immunoprecipitation+Detected+by+Flow+Cytometry.">IP-FCM: Immunoprecipitation Detected by Flow Cytometry.</a> J. Vis. Exp. (46), e2066-e2066 (2010).</li><li>Felts, S. J., Karnitz, L. M., Toft, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functioning+of+the+Hsp90+machine+in+chaperoning+checkpoint+kinase+I+(Chk1)+and+the+progesterone+receptor+(PR).">Functioning of the Hsp90 machine in chaperoning checkpoint kinase I (Chk1) and the progesterone receptor (PR).</a> Cell Stress Chaperones. 12, 353-363 (2007).</li><li>Cintron, N. S., Toft, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+requirements+for+Hsp40+and+Hsp70+in+the+Hsp90+chaperone+pathway.">Defining the requirements for Hsp40 and Hsp70 in the Hsp90 chaperone pathway.</a> J. Biol. Chem. 281, 26235-26244 (2006).</li></ol>

De test hierboven beschreven kan worden aangepast aan een groot aantal aandoeningen van de chaperonne acties van de hsp90/hsp70-based chaperonne machines, alsook GR steroïde-bindende test. Het is een wijziging van de eerder gerapporteerde methoden 4,8,9,17 en is ontworpen om te profiteren van recente ontwikkelingen in de elektroforese-technologie en toegankelijk voor een breder onderzoek gemeenschap. Extra cofactoren of eiwitten van belang kunnen worden toegevoegd aan de GR • hsp90 heterocomplex reconstitu...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Sf9 insectencellen </td><td> Invitrogen </td><td></td><td> voor baculovirus expressie van recombinant muis GR </td></tr><tr><td> L929 cellen </td><td> ATCC </td><td> CRL-2173 </td><td> voor de endogene muis GR cytosol voorbereiding (alternatief voor baculovirus expressie) </td></tr><tr><td> FiGR hybridoomcellen </td><td> ATCC </td><td> CRL-2173 </td><td> voor het bereiden van ascites met een anti-GR monoklonaal antilichaam (alternatief voor gezuiverd BuGR2 antilichaam) </td></tr><tr><td> Compleet-Mini proteaseremmer, EDTA-vrij </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11836170001 </td><td></td></tr><tr><td> proteïne A-Sepharose </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P3391 </td><td></td></tr><tr><td> konijn reticulocyten lysaat </td><td> Green Hectares (Oregon, WI) </td><td></td><td> rijke bron van endogene hsp90/hsp70 chaperonne machines </td></tr><tr><td> creatinefosfokinase </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3755 </td><td> voor het ATP-regenererend systeem </td></tr><tr><td> phosphocreatine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7936 </td><td> voor het ATP-regenererend systeem </td></tr><tr><td> anti-GR muis monoklonaal antilichaam (BuGR2) </td><td> Pierce / Thermo Scientific </td><td> MA1-510 </td><td> gebruikt voor het GR immunoadsorption en als primaire antilichaam in western blotting </td></tr><tr><td> anti-hsp90 muis monoklonaal antilichaam (AC88) </td><td> Enzo Life Sciences </td><td> ADI-SPA-830 </td><td> gebruikt als primair antilichaam in western blotting </td></tr><tr><td> anti-Hsp70 muis monoklonaal antilichaam (N27F3-4) </td><td> Enzo Life Sciences </td><td> ADI-SPA-820 </td><td> gebruikt als primair antilichaam in western blotting </td></tr><tr><td> IgG van muis serum </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 038K7690 </td><td> gebruikt als nonimmune antilichaam voor negatieve controle van immunoadsorption </td></tr><tr><td> anti-muis IgG-peroxidase conjugaat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A4416 </td><td> gebruikt als secundair antilichaam in western blotting </td></tr><tr><td> Experion microfluïdische elektroforese-systeem </td><td> Bio-Rad </td><td> 7007001 </td><td> alternatief voor conventionele SDS-PAGE </td></tr><tr><td> [1,2,4,6,7 - 3 H] dexamethason </td><td> PerkinElmer </td><td> NET1192001MC </td><td> Volg veiligheidsvoorschriften </td></tr></tbody></table>

biochemical reconstitution of steroid receptor&#x2022;hsp90 protein  complexes and reactivation of ligand binding

Hsp90 is een essentieel en zeer overvloedige moleculaire chaperonne-eiwit dat is gevonden om meer dan 150 eukaryote signaaleiwitten, waaronder transcriptie factoren (bv. nucleaire receptoren, p53) en proteïne kinases (bijv. Src, Raf, Akt kinase) die betrokken zijn in cel fietsen te reguleren, ontstaan ​​van tumoren, apoptose, en meerdere eukaryote signaleringsroutes 1,2. Van deze vele &#39;klant&#39; eiwitten voor hsp90, de assemblage van steroïde receptoren • hsp90 complexen is gedefinieerd de beste (Figuur 1). We presenteren hier een aanpasbaar glucocorticoid receptor (GR) immunoprecipitatie assay en in vitro GR • hsp90 reconstructie methode die gemakkelijk kunnen worden gebruikt om de eukaryote hsp90 functionele activiteit, hsp90-gemedieerde steroïde receptor ligand binding, en moleculaire chaperone cofactor eisen sonde. Bijvoorbeeld, kan deze test gebruikt worden om hsp90 cofactor eisen en de effecten van het toevoegen van exogene verbindingen aan de reconstitutie te testen. De GR is een bijzonder handig systeem voor het bestuderen van hsp90, omdat de receptor moet worden gebonden aan hsp90 naar een open kloof ligand binding die toegankelijk is voor steroïde 3 hebben. Endogene, unliganded GR is aanwezig in het cytoplasma van zoogdiercellen niet-covalent gebonden aan hsp90. Zoals gevonden in de endogene GR • hsp90 heterocomplex, de GR gespleten ligand binding is open en in staat te binden steroïde. Als hsp90 distantieert van de GR, of als de functie wordt geremd, de receptor niet in staat is te binden steroïde en vereist reconstitutie van het GR • hsp90 heterocomplex voor steroïde-bindende activiteit wordt hersteld 4. GR kan worden immunogeprecipiteerd van cel cytosol met behulp van een monoklonaal antilichaam, en eiwitten zoals hsp90 gecomplexeerd aan de GR kan worden getest door western blot. Steroïde-bindende activiteit van de immunogeprecipiteerd GR kan worden bepaald door het incuberen van de immunopellet met [3 H] steroïde. Eerdere experimenten hebben aangetoond hsp90-gemedieerde opening van de GR gespleten ligand binding vereist hsp70, een tweede moleculaire chaperon ook essentieel voor de eukaryote cel levensvatbaarheid. Biochemische activiteit van hsp90 en hsp70 worden gekatalyseerd door co-chaperonne-eiwitten Hop, hsp40, en P23 5. Een multiprotein chaperonne apparatuur die hsp90, hsp70, Hop, en hsp40 zijn endogeen aanwezig zijn in eukaryote cel cytoplasma, en de reticulocyten lysaat biedt een chaperonne-rijk eiwit bron 6. In de gepresenteerde methode, is GR immunoadsorbed van cel cytosol en ontdaan van de endogene hsp90/hsp70 chaperonne machines met een milde zout omstandigheden. Het zout-gestripte GR wordt vervolgens geïncubeerd met reticulocyten lysaat, ATP, en K +, wat resulteert in de reconstructie van de GR • hsp90 heterocomplex en reactivering van steroïde-bindende activiteit 7. Deze methode kan worden gebruikt om de effecten van verschillende chaperonne co-factoren, nieuwe eiwitten, en experimentele hsp90 of GR-remmers test in om hun functionele betekenis op hsp90-gemedieerde steroïde-bindende 8-11 te bepalen.

Watch this Scientific Journal Video about Biochemical Reconstitution of Steroid ReceptorÃ¢â‚¬Â¢Hsp90 Protein  Complexes and Reactivation of Ligand Binding at JoVE.com

Biochemical Reconstitution of Steroid ReceptorÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â¢Hsp90 Protein  Complexes and Reactivation of Ligand Binding

Een<em&gt; In vitro</em&gt; Werkwijze voor de bereiding functionele glucocorticoid receptor (GR) • hsp90 eiwitcomplexen uit gezuiverde eiwitten en cellulaire lysaten wordt beschreven. De methode maakt gebruik van immunoadsorption van recombinant GR, gevolgd door zout-strippen en eiwitcomplex reconstitutie. Het belang van co-factoren en de buffer omstandigheden worden besproken, evenals potentiële methode toepassingen.

Biochemische Reconstitutie van Steroid Receptor • Hsp90 eiwitcomplexen en reactivering van Ligand binding

Hsp90 is an essential and highly abundant molecular chaperone protein that has been found to regulate more than 150 eukaryotic signaling proteins, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Biochemical Reconstitution of Steroid Receptor&#x2022;Hsp90 Protein  Complexes and Reactivation of Ligand Binding

Identification of protein complexes with quantitative proteomics in S. cerevisiae

Identificatie van eiwit-complexen met kwantitatieve proteomics in S. cerevisiae

Lipids are the building blocks of cellular membranes that function as barriers and in compartmentalization of cellular processes, and recently, as ...

Analyzing Large Protein Complexes by Structural Mass Spectrometry

Het analyseren van grote eiwitcomplexen de Structuurfondsen massaspectrometrie

Living cells control and regulate their biological processes through the coordinated action of a large number of proteins that assemble themselves into an ...

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

Biochemische Titratie van glycogeen<em&gt; In vitro</em

Glycogen is the main energetic polymer of glucose in vertebrate animals and plays a crucial role in whole body metabolism as well as in cellular ...

Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis

Eiwitzuivering-vrij bindwijze affiniteit Bepaling door Microschaal thermophoresis

Quantitative characterization of protein  interactions is essential in practically any field of life sciences,  particularly drug discovery. Most of ...

Identification of Post-translational Modifications of Plant Protein Complexes

Identificatie van post-translationele modificaties van Plant eiwitcomplexen

Plants adapt quickly to changing environments due to elaborate perception and signaling systems. During pathogen attack, plants rapidly respond to ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

Bepaling van proteïne-ligand interacties gebruiken Differential Scanning Fluorimetrie

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

In Vitro Reconstructie van Licht-oogsten Complexen van planten en groene algen

In plants and green algae, light is captured by the light-harvesting complexes (LHCs), a family of integral membrane proteins that coordinate chlorophylls ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Functionele Het oplossen en Channel activiteit Metingen van gezuiverde wildtype en mutante CFTR eiwit

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

-Groei op basis Vaststelling en Biochemische Bevestiging van Genetische Eisen voor de afbraak van eiwitten in<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...

Genetic and Biochemical Approaches for In Vivo and In Vitro Assessment of Protein Oligomerization: The Ryanodine Receptor Case Study

Genetic and Biochemical Approaches for In Vivo and In Vitro Assessment of Protein Oligomerization: The Ryanodine Receptor Case Study

Genetische en biochemische benaderingen voor<em&gt; In Vivo</em&gt; en<em&gt; In Vitro</em&gt; Evaluatie van Protein Oligomerisatie: De ryanodinereceptor Case Study

Oligomerization is often a structural requirement for proteins to accomplish their specific cellular function. For instance, tetramerization of the ...