Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح GM086822 ومؤسسة العلوم الوطنية الكبرى منحة بحثية الأجهزة DBI-0960313. فإن الكتاب أود أن أشكر الدكاترة. جون مياكي ودونا هاردي (بيو راد) وجنيفر Loertscher (جامعة سياتل) لخبرتهم التقنية. حدد الكواشف اللوني، وقدمت بسخاء من قبل الأجهزة التكميلية بيو راد.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

حدد الكواشف اللوني، وقدمت من قبل الأجهزة التكميلية بيو راد.

وقد أثبتت أساليب اللوني السائل لا يقدر بثمن لإعداد البروتينات عالي النقاء اللازمة لإجراء 6 المناعية، والكيمياء الحيوية 7، والهيكلية الدراسات 8. طرق تنقية الائتلاف غالبا ما تتطلب تحديد التجريبية من الوسيلة المفضلة، وهيكل يجند، كثافة يجند، وخصائص كل حبة مصفوفة وقد ثبت أن تؤثر على نتائج الكروماتوغرافي 2، 3. عمود الآلي الكشفية هو نهج فعال لاختيار وسيلة التحالف الدولي للموئل لتعظيم الاستفادة اللاحقة وتنقية البروتينات 4. ويمكن للطريقة عمود الآلي الكشفية قدمت تكييفه بسهولة لمختلف استراتيجيات الائتلاف تنقية البروتين. قد تغييرات في تركيز الملح، واختيار من الملح، والانحدار والملح، ودرجة الحموضة زيادة تحسين ظروف تنقية، وجرى آثار متفاوتة هذه المعايير الأساسية التي سبق استعراضها 13،14. التحالف الدولي للموئل شطافة تحتوي على هدف المتواجد النقي جزئياويمكن في تنقية أخرى باستخدام تقنية الكروماتوغرافي التكميلية، مثل التبادل الأيوني اللوني (يتم خصم المبلغ المخصص) أو هلام الترشيح / حجم الإقصاء اللوني 9،10. بسبب الامتصاصية في ضوء فريد من نوعه وخصائص الانبعاثات، ويمكن التعرف على الشخصية من شطف GFP تستخدم في خط ونهج آخر المدى. تحقيقا لهذه الغاية، ويمكن زيادة هذا البروتوكول يمكن تكييفها لتنقية البروتينات GFP-الانصهار المؤتلف، الذي يتم فيه &quot;الموسومة&quot; وهو بروتين الهدف لا علاقة لها مع GFP. ويمكن الكشف عن البروتينات الهدف GFP-المفتاحية للأشعة فوق البنفسجية 11 و تنقيته باستخدام نهج الكروماتوغرافي المختلفة، بما في ذلك استراتيجية تنقية HIC المذكورة أعلاه. لقد أصبح GFP تنقية أيضا عنصرا أساسيا في مختبرات الكيمياء الحيوية التربوية لتدريس التقنيات الحديثة في علم بروتين 12. في حين يمكن أن تتم تنقية البروتين الأساسي الائتلاف باستخدام أقل قوة بكثير اللوني SYالجذعية، والأجهزة المعروضة هنا لديها عدد من مزايا واضحة للمساعدة في الحصول على نتائج ايجابية. وتشمل الفوائد تحسين ملحوظ في الاستفادة من وجود نظام تشغيل الآلي للغاية للتشغيل حالة التكاثر، والوقت وفورات، وتناقص فرص الهواء لإدخالها في نظام 10. نظام يسيطر مزج العازلة، التي يسرتها الاقصى نظام، ويسمح لزيادة الاتساق في إعداد العازلة واستنساخ التجارب. رسم كاف تحميل عينة في حلقة عينة الحيوية للجميع الكشفية يدير مزيد من يضمن التوحيد من العينة التي تضاف إلى كل عمود، ويسمح للأشواط متتالية دون انقطاع أو إعادة دليل. تسيطر حقن عينة من حلقة عينة على العمود يقلل التقلبات التي قد تحدث مع تحميل عينة دليل. زوج من الصمامات اختيار العمود السماح لتشغيل عينة على التوالي، باستخدام كل عمود مختلف التحالف الدولي للموئل، دون الحاجة إلى replumb النظام. أداء مول<html> TI-الطول الموجي تحليل مفيد على نحو خاص عندما يعاير بروتين مع التشكيل الجانبي للطيفية فريدة من نوعها. بالإضافة إلى GFP، قد السيتوكرومات، flavoproteins، وغيرها من البروتينات الهيم المحتوية على الاستفادة من هذه التقنية. أجهزة رصد الموصلية، ودرجة الحموضة تسمح للتحقق من الوقت الحقيقي والظروف التجريبية. جمع الانقسام شطافة جزء يسمح للتعامل مع جزء محسنة ويمكن نقلها بسهولة عن طرق تحليل ما بعد المدى والتي تتطلب الحد الأدنى من حجم العينة (على سبيل المثال ELISA، SDS PAGE، طخة غربية، وExperion الكهربائي ميكروفلويديك). في حين تعمل على جمع جزء 2 حاليا يتطلب التزامن اليدوي، فإنه يسمح لأقصى قدر من المرونة في اختيار جامع الكسر. عيوب أهم لاستخدام هذا النظام اللوني قوية لعمود الائتلاف الكشفية وتنقية البروتين وتشمل للمرة الأولى والنفقات في الميزانية المرتبطة حيازة الصك وتدريب المشغلين. تي &quot;&gt; بروتوكول المعروضة هنا يستخدم لبيو راد النظام اللوني DuoFlow، ومع ذلك، قد تستخدم أيضا أدوات قوية على قدم المساواة من الشركات المصنعة الأخرى، مثل أفانت AKTA من GE للرعاية الصحية، تكون وتكون قادرة على تحقيق نتائج تعادل النظام اللوني للمقارنة حتى لها خصائص فريدة من نوعها (على سبيل المثال أسلوب البرمجة، تسمية عنصر، وتفضيل المشغل، وقابلية القيود) التي ينبغي النظر فيها قبل الشروع في إجراء تنقية أو حيازة الصك.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">بيولوجي DuoFlow باثفايندر 20 نظام</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> ويشمل نظام الاقصى، خلاط، ومحطة العمل F10، صمام AVR7-3، QuadTec الأشعة فوق البنفسجية / كاشف فيس مع خلية تدفق، BioFrac جمع جزء، برنامج بيولوجي، وكاتب عدة </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">AVR9-8-تيار تحديد صمام</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> ارتفاع ضغط صمام، 9-الميناء، 8-موقف، 3500 رطل (233 بار) الحد المسموح به، للاستخدام مع نظام بيولوجي DuoFlow </td></tr><tr><td> Diverter صمام SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> 7600410 </td><td> صمام الملف اللولبي، 3-ميناء، 2-موقف، 30 رطل (2 بار) الحد المسموح به، للاستخدام مع نظام بيولوجي DuoFlow </td></tr><tr><td> تيار الخائن صمام </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>الواقعة على الدولة = LSR وparentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;الهدف =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 كيت </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> انزلاق مكبس عينة عدة حلقة، تضم 25 DynaLoop مل انزلاق حلقة المكبس، DynaLoop أجزاء عدة (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac الكسر جامع</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> اثنان كسر عمود<html> تستخدم متعاقد </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac رئيس انخفاض microplate محول</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac محول microtiter لوحة</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td>وبلد = الولايات المتحدة وانغ = EN ومعرف المنتج = 741-0017 &quot;الهدف =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">الأشعة فوق البنفسجية البصريات وحدة</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">مصباح الهالوجين</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> &lt;<html> 1 الهدف = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">ECONO التدرج مضخة</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> مضخة التدرج لتنقية البروتين الضغط المنخفض، ويشمل عدة أنابيب وتركيبات </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">نظام Experion</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad؟ كمد = BRCatgProductDetail ومعرف المنتج = 224301 &quot;الهدف =&quot; _blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion كيت Pro260 التحليل</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">الحيوي راد</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap اختيار عمود الائتلاف عدة </td><td> جنرال إلكتريك للرعاية الصحية </td><td> 28-4110-07 </td><td> ويشمل 7 × 1 مل مخلوط مسبقا الأعمدة من وسائل الإعلام عن التحالف الدولي للموئل الكشفية </td></tr><tr><td> تجهيزات للرعاية الصحية GE عمود إلى بيو راد </td><td> جنرال إلكتريك للرعاية الصحية </td><td> 18111251 و18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

وعلى النقيض من الأساليب الكروماتوجرافى أخرى لتنقية البروتينات (مثل هلام الترشيح، الألفة، والتبادل الأيوني)، مسعور اللوني تفاعل (HIC) يتطلب عادة تحديد التجريبية (ويشار إلى فحص أو &quot;الكشافة&quot;) من أجل اختيار أنسب وسيلة الكروماتوغرافي لتنقية بروتين معين 1. الطريقة المعروضة هنا يصف هذا النهج آلية لاستطلاع للاعلامية الائتلاف المثلى لاستخدامها في تنقية البروتين. التحالف الدولي للموئل يفصل البروتينات والجزيئات الحيوية الأخرى من المحللة الخام على أساس الاختلافات في hydrophobicity. مشابهة لاللوني تقارب (AC) والتبادل الأيوني اللوني (يتم خصم المبلغ المخصص)، الائتلاف قادر على التركيز على البروتين من اهتمام لأنها تقدم من خلال عملية الكروماتوغرافي. البروتينات الأنسب لتنقية من قبل التحالف الدولي للموئل وتشمل هذه المناطق مع سطح مسعور وقادرة على تحمل التعرض لتركيزات الأملاح الزائدة من الذخيرة م 2nium كبريتات ((NH 4) 2 SO 4). غالبا ما يتم اختيار التحالف الدولي للموئل كوسيلة من وسائل تنقية للبروتينات التي تفتقر إلى علامة الألفة، وغير مناسبة وبالتالي لميلان، وعندما يتم خصم المبلغ المخصص لم يقدم تنقية كاف. الأنصاف مسعور على سطح البروتين ربط مؤقتا ليجند غير القطبية بالإضافة إلى مصفوفة، خامل غير متحرك. التفاعل بين البروتين ويجند تعتمد اعتمادا كبيرا على تركيز الملح من المنطقة العازلة التي تتدفق من خلال العمود اللوني، مع تركيزات عالية الأيونية تعزيز التفاعل البروتين يجند وجعل بروتين ثابت (ملزمة أي داخل العمود) 2. كما انخفاض تركيز الملح، والتفاعل البروتين يجند تبدد، وبروتين يصبح مرة أخرى متنقلة وelutes من العمود. وسائل الاعلام الائتلاف عدة متاحة تجاريا في مخلوط مسبقا الأعمدة، كل واحد يحتوي على عدة من يغاندس مسعور (مثل S-بوتيل، بوتيل، الأوكتيل، وفينيل) عبر ربط في كثافة متفاوتة على حبات الاغاروز من المواصفاتIFIC قطرها 3. عمود الآلي الكشفية يسمح لنهج فعال لتحديد التي ينبغي استخدام وسائل الاعلام عن مستقبل التحالف الدولي للموئل، والتجارب التحسين أكثر شمولا وتنقية البروتين يعمل 4. بروتين معين يتم تنقيتها هنا هو المؤتلف ببروتين أخضر (GFP)، ومع ذلك، يمكن تكييفها لنهج لتنقية البروتينات الأخرى مع واحد أو أكثر من المناطق سطح مسعور. GFP بمثابة بروتين نموذجا مفيدا، نظرا لاستقرارها، فريد ذروة امتصاص الضوء في 397 نانومتر، ومضان عندما تتعرض لضوء الأشعة فوق البنفسجية 5. وقد أعدت المحللة البكتيرية التي تحتوي على نوع البرية GFP في منطقة عازلة عالية من الملح، وتحميلها في المتوسط ​​DuoFlow بيو راد نظام الضغط اللوني السائل، وكثف إلى الأعمدة التي تحتوي على وسائل الاعلام HiTrap الائتلاف الائتلاف المختلفة. وكان مزال البروتين من الأعمدة وتحليلها بواسطة خط في وسائل الكشف عن مرحلة ما بعد التشغيل. مزج العازلة، ودينامية حقن حلقة العينة، والعقيد تسلسليزيادة umn اختيار، وتحليل متعدد الطول الموجي، وجمع جزء انقسام شطافة وظيفة للنظام واستنساخ المنهج التجريبي.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

ويقدم وسيلة لتحديد الآلية المناسبة اللوني تفاعل مسعور (HIC) وسائل الاعلام لاستخدامها في عملية تنقية البروتين. أسلوب يستخدم لاللوني السائل المتوسطة بما في ذلك الضغط نظام مزج العازلة الآلي، وحقن الديناميكية حلقة العينة، واختيار عمود متسلسلة، وتحليل متعدد الطول الموجي، وجمع الانقسام شطافة الكسر.

آلية التفاعل اللوني مسعور اختيار عمود للاستخدام في تنقية البروتين

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

تنقية م. magneticum سلالة AMB - 1 بروتين المرتبطين Magnetosome MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

ثنائي الجزيء الإسفار التكملة (BiFC) الفحص عن البروتين البروتين في خلايا البصل التفاعل باستخدام مدفع الجينات هيليوس

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

الكروماتوجراف الدهون تقارب الحويصلة بوساطة الفرز المغناطيسي باستخدام خلية المنشط (LIMACS) : طريقة جديدة لتحليل البروتين الدهني التفاعل

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

تنقية Hsp104 ، وهو بروتين Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

تقارب المرحلة السائلة الفحص التقاطها باستخدام الخرز المغناطيسي لدراسة البروتين البروتين التفاعل: المثال فيروس شلل الأطفال، Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

بروتوكول لفج العرض وتقارب اختيار طريق الطعوم البروتين المؤتلف

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

تحديد البروتين البروتين التفاعل في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; رؤساء الكبار حسب جنبا الى جنب الانجذاب تنقية (وات)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

تحديد مواقع التفاعل البروتين البروتين عن طريق الببتيد صفائف

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

الجينوم على نطاق فحص التفاعلات بين البروتينات التي كتبها البروتين جزء التكملة الفحص (PCA) في الخلايا الحية

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...