Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af National Institutes of Health tilskud GM086822 og National Science Foundation større forskningsprojekt instrumentering tilskud DBI-0.960.313. Forfatterne vil gerne takke Drs. Jon Miyake &amp; Donna Hardy (Bio-Rad) og Jennifer Loertscher (Seattle University) for deres tekniske ekspertise. Vælge chromatografireagenser og supplerende instrumentering blev generøst tilvejebragt af Bio-Rad.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

Vælge chromatografireagenser og supplerende instrumentering blev tilvejebragt af Bio-Rad.

Flydende kromatografiske teknikker har vist sig uvurderlig for at forberede højt oprensede proteiner, der er nødvendige for at gennemføre immunologiske 6, biokemiske 7, og strukturelle 8 undersøgelser. HIC oprensningsmetoder oftest kræver empirisk bestemmelse af en foretrukken medium og ligand struktur, liganddensitet og matrix perle egenskaber, er blevet vist at påvirke chromatografiske resultater 2, 3. Automatiseret søjle scouting er en effektiv fremgangsmåde til udvælgelse af en HIC medium til efterfølgende optimering og proteinoprensning 4. Den automatiserede Kolonnen kontrolgradienten præsenteres fremgangsmåde kan let tilpasses til forskellige HIC proteinoprensningsmetoder strategier. Ændringer i saltkoncentration, valg af salt, saltgradient, og pH kan yderligere forbedre oprensningsbetingelser, og virkningerne af at variere disse vigtige parametre er tidligere blevet revideret 13,14. HIC-eluatet, som indeholder en delvist oprenset mål protei kan yderligere oprenses ved anvendelse af en komplementær kromatografisk teknik, såsom ionbytningskromatografi (IEX) eller gelfiltrering / gelpermeationskromatografi 9,10. På grund af sin unikke lysabsorbans og emissions egenskaber kan elueringsprofilen for GFP identificeres under anvendelse af in-line og post-run fremgangsmåder. Til dette formål kan denne protokol endvidere tilpasses til oprensning af rekombinante GFP-fusionsproteiner, hvori et ubeslægtet målproteinet &quot;mærket&quot; med GFP. GFP-mærkede target-proteiner kan detekteres med UV-lys 11 og oprenset ved hjælp af forskellige kromatografiske metoder, herunder HIC-oprensning er beskrevet ovenfor. GFP rensning er også blevet et pædagogisk dagligt syn i biokemi laboratorier til undervisning i moderne protein naturvidenskabelige metoder 12. Mens basisk HIC proteinoprensning kan udføres under anvendelse af en væsentligt mindre robust kromatografi systamme, instrumentering præsenteret her har et antal forskellige fordele for at hjælpe til at opnå gunstige resultater. Bemærkelsesværdige fordelene ved at benytte et højt automatiseret system omfatter forbedret løbe-to-run tilstand reproducerbarhed, tidsbesparelser, og faldt muligheder for luft der skal indføres i systemet 10. Systemet kontrolleret puffer blanding, som lettes af systemet Maximizer, giver mulighed for forøget ensartethed i buffer fremstilling og eksperimentel reproducerbarhed. Tegning nok prøve belastning i den dynamiske prøvesløjfe for alle kontrolgradienten løber yderligere at sikre ensartethed af prøven blev tilsat til hver søjle og tillader sekventiel kørsler uden afbrydelse eller manuel ladning. Styret injektion af prøve fra prøven sløjfen på søjlen aftager variabilitet, som kan forekomme med manuel prøveindføringen. Et par søjle udvælgelse ventiler tillader på hinanden følgende prøver kørsler, hver med en anden HIC kolonne, uden at replumb systemet. Udførelse af mul<html> ti-bølgelængde analyse er især fordelagtig, når analyse for et protein med en unik spektrofotometrisk profil. Ud over GFP, kan cytochromer, flavoproteiner og andre hæm-holdige proteiner omfattet af denne teknik. Ledningsevne og pH overvågnings-udstyr mulighed for verificering af real-time eksperimentelle betingelser. Split fraktion eluat samling tillader forbedret fraktion håndtering og muliggør let overførsel til post-run analysemetoder, der kræver et minimalt prøvevolumen (f.eks ELISA, SDS-PAGE, Western blot og Experion mikrofluid elektroforese). Mens driften af ​​anden fraktion solfanger offline kræver manuel synkronisering, det giver mulighed for maksimal fleksibilitet i fraktionsindsamler valg. De væsentligste ulemper ved anvendelse af en sådan robust kromatografi system til HIC kolonne scouting og proteinoprensning omfatter den første tid og budgetudgifter forbundet med instrumentet anskaffelse og operatør uddannelse. t &quot;&gt; Protokollen præsenteret her anvender en Bio-Rad DuoFlow kromatografi system. kan imidlertid også robust instrumentering fra andre fabrikanter, såsom AKTA Avant fra GE Healthcare, også anvendes og er i stand til at producere tilsvarende resultater Selv sammenlignelige kromatografi-system har unikke egenskaber (f.eks metode programmering, komponent nomenklatur, operatør præference, og skalerbarhed begrænsninger), der bør overvejes, før indlede en rensning procedure eller instrument erhvervelsen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagenset </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer (valgfri) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">Biologic DuoFlow Pathfinder 20 System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> Inkluderer systemet Maximizer, mixer, F10 arbejdsstation, AVR7-3 ventil, QuadTec UV / Vis-detektor med flowcelle, BioFrac fraktionsindsamler, biologiske software, og startpakke </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">Avr9-8 stream-vælg ventil</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> Højtryks-ventil, 9-port, 8-stillingen, 3500 psi (233 bar) grænseværdier, til brug med Biologic DuoFlow systemet </td></tr><tr><td> Omskifterventil SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> 7600410 </td><td> Magnetventil, 3-port, 2-stillingen, 30 psi (2 bar) grænseværdier, til brug med Biologic DuoFlow systemet </td></tr><tr><td> Stream splitter ventil </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tisk = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kit </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> Glidende stempel prøvesløjfe kit omfatter 25 ml DynaLoop glidende stempel sløjfe DynaLoop dele kit (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac Fraction Collector</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> To brøkdel col<html> gere anvendte </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac mikrotiterplade drop hovedet adapter</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac mikrotiterplade adapter</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>&amp; Country = US &amp; lang = da &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">UV optikmodulet</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">Halogenlampe</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> &lt;<html> en target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo Gradient pumpe</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> gradient pumpe for lavt tryk proteinoprensning, herunder slanger og fittings kit </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 Analyse Kit</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap HIC kolonne udvælgelse kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> Indeholder 7 x 1 ml færdigpakkede kolonner af HIC-medier til spejder </td></tr><tr><td> GE Healthcare-til-Bio-Rad kolonne fittings </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 og 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

I modsætning til andre kromatografiske metoder til oprensning af proteiner (fx gelfiltrering, affinitetskromatografi og ionbytning), almindeligvis hydrofob interaktionskromatografi (HIC) kræver eksperimentel bestemmelse (benævnt screening eller &quot;spejder&quot;) for at vælge den mest egnede chromatografiske medium til oprensning af et givet protein 1. Fremgangsmåden præsenteres her beskriver en automatiseret metode til opdagelse af en optimal HIC medier anvendes til proteinoprensning. HIC separerer proteiner og andre biomolekyler fra et råt lysat baseret på forskelle i hydrofobicitet. Svarende til affinitetskromatografi (AC) og ionbytningskromatografi (IEX) HIC er i stand til at koncentrere proteinet af interesse, som det skrider frem gennem det chromatografiske proces. Proteiner er bedst egnet til oprensning af HIC indbefatter dem med hydrofob overflade regioner og i stand til at modstå udsættelse for saltkoncentrationer over 2 M ammonium sulfat ((NH4) 2 SO4). HIC er ofte valgt som en fremgangsmåde til oprensning af proteiner, der mangler et affinitetsmærke og dermed uegnede til AC, og når IEX ikke tilvejebringe tilstrækkelig oprensning. Hydrofobe dele på proteinet overfladen midlertidigt bindes til en ikke-polær ligand koblet til en inert, fast matrix. Interaktionen mellem protein og liganden er stærkt afhængige af saltkoncentrationen i pufferen, der strømmer gennem kromatografisøjle med høje ionkoncentrationer styrke protein-ligand-interaktion og gøre proteinet immobile (dvs. bundet til kolonnen) 2. Som saltkoncentrationer fald, protein-ligand-interaktion spredes, proteinet igen bliver mobile og eluerer fra søjlen. Adskillige HIC medier er kommercielt tilgængelige i præ-pakkede søjler, der hver indeholder en af ​​flere hydrofobe ligander (f.eks S-butyl, butyl, octyl og phenyl) tværbundet med varierende massefylder på agaroseperler i en specforsk diameter 3. Automatiseret kolonne scouting giver mulighed for en effektiv metode til at afgøre, hvilke HIC medier bør benyttes til fremtidige, mere udtømmende optimering eksperimenter og proteinoprensning kører 4. Det specifikke protein, der oprenses her er rekombinant grønt fluorescerende protein (GFP), men kan fremgangsmåden tilpasses til oprensning af andre proteiner med en eller flere hydrofobe overfladeområder. GFP tjener som en nyttig model protein på grund af dets stabilitet, unikke lys absorbanstop ved 397 nm, og fluorescensen, når det udsættes for UV-lys 5. Bakterielysat indeholdende vildtype GFP blev fremstillet i en højsalt-buffer, fyldes i en Bio-Rad DuoFlow medium tryk-væskekromatografi systemet, og adsorberet på HiTrap HIC-søjler, der indeholder forskellige HIC medier. Proteinet blev elueret fra kolonnerne og analyseret ved in-line og post-run detektionsmetoder. Puffer blanding, dynamisk prøvesløjfe injektion, sekventiel colUMN udvælgelse, multi-bølgelængde analyse, og split brøkdel eluatet samling øget funktionalitet af systemet og reproducerbarheden af ​​den eksperimentelle tilgang.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

En automatiseret fremgangsmåde til identifikation af egnede hydrofobe interaktions-kromatografi (HIC) medier, der skal anvendes i processen proteinoprensning er præsenteret. Fremgangsmåden anvender en medium-tryk-væskekromatografi, der indbefatter automatiserede puffer blanding, dynamisk prøvesløjfe injektion, sekventiel kolonne, multi-bølgelængde analyse og opdelt fraktion eluat samling.

Automatiseret hydrofobisk interaktions-kromatografi Kolonne Valg til brug i Proteinoprensning

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

En væskefase affinitetsindfangning under anvendelse af magnetiske perler til at studere protein-protein interaktion: poliovirus-Nanobody Eksempel

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

En protokol for fagvisning og Affinity Selection Brug rekombinant protein Lokkemad

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Identifikation af protein-protein interaktion i<em&gt; Drosophila</em&gt; Voksen Heads af Tandem Affinitetsrensning (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Identifikation af protein-protein-interaktion websteder anvendelse af peptid Arrays

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

Genom-dækkende protein-protein-interaktion Screening af protein-fragmentet Komplementering Assay (PCA) i levende celler

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...