Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door National Institutes of Health subsidie ​​GM086822 en National Science Foundation grote onderzoeksprojecten instrumentatie subsidie ​​DBI-0960313. De auteurs willen graag Drs bedanken. Jon Miyake &amp; Donna Hardy (Bio-Rad) en Jennifer Loertscher (Seattle University) voor hun technische expertise. Selecteer chromatografie reagentia en aanvullende instrumenten werden rijkelijk verzorgd door Bio-Rad.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

Selecteer chromatografie reagentia en aanvullende instrumenten werden verzorgd door Bio-Rad.

Vloeistofchromatografie technieken hebben bewezen van onschatbare waarde voor het bereiden van zeer zuivere eiwitten die nodig zijn voor het uitvoeren van immunologische 6, biochemische 7, 8 en structurele studies. HIC zuiveringsmethoden meest vaak empirische bepaling van een voorkeursuitvoeringsvorm medium en ligand structuur ligand dichtheid en matrix kraal eigenschappen allemaal aangetoond chromatografische resultaten 2, 3 beïnvloeden. Automatische kolom scouting is een efficiënte aanpak voor het selecteren van een HIC medium voor de daaropvolgende optimalisatie en eiwit zuivering 4. De automatische kolom weergegeven scouting methode kan gemakkelijk worden aangepast aan verschillende HIC eiwitzuivering strategieën. Veranderingen in zoutconcentratie, de keuze van zout, zout gradiënt, en pH kan verder toenemen zuivering voorwaarden, en de effecten van verschillende deze essentiële parameters zijn eerder beoordeeld 13,14. HIC eluaat met een gedeeltelijk gezuiverd doel protein kan verder worden gezuiverd met een complementaire chromatografische technieken zoals ionenuitwisselingschromatografie (IEX) of gelfiltratie / gelpermeatiechromatografie 9,10. Door zijn unieke lichtabsorptie en de emissie-eigenschappen kan de elutie profiel van GFP worden geïdentificeerd met behulp van in-line en post-run benaderingen. Daartoe kan dit protocol verder worden aangepast voor het zuiveren van recombinant GFP-fusie-eiwitten, waarbij een onafhankelijke doelwit eiwit &quot;tag&quot; met GFP. GFP-gelabeld doelwit eiwitten kunnen worden gedetecteerd met UV licht 11 en gezuiverd met verschillende chromatografische methoden, zoals de HIC zuivering strategie hierboven beschreven. GFP zuivering heeft ook een pedagogische nietje in de biochemie labs voor het onderwijs van de moderne wetenschap eiwit technieken 12. Terwijl de basis HIC eiwit zuivering kan worden uitgevoerd met behulp van een aanzienlijk minder robuust chromatografie systam, de apparatuur hier gepresenteerde een aantal duidelijke voordelen om te helpen bij het verkrijgen van gunstige resultaten. Opmerkelijke voordelen van het gebruik van een sterk geautomatiseerd zijn: verbeterde run-to-run conditie reproduceerbaarheid, tijdwinst en een verminderde kansen op luchtvervoer in te voeren in het systeem 10. Systeem gecontroleerde buffer mengen wordt vergemakkelijkt door het systeem maximizer, maakt grotere consistentie in buffer bereiding en experimentele reproduceerbaarheid. Tekening voldoende monster last in de dynamische monsterlus voor scouting loopt verder verzekert uniformiteit van het monster worden toegevoegd aan elke kolom en maakt opeenvolgende zonder onderbreking of handmatig opnieuw. Gecontroleerde injecteren van een monster van het monster lus op de kolom af variabiliteit die zich kunnen voordoen met de hand sample laden. Een paar kolomselektiemiddelen kleppen kunnen voor opeenvolgende monsters runs, die elk een eigen HIC kolom zonder het systeem replumb. Het uitvoeren van mul<html> ti-golflengte-analyse is bijzonder gunstig bij het testen een eiwit met een unieke spectrofotometrische profiel. Naast GFP kan cytochromen, flavoproteins en andere heem-bevattende eiwitten voordeel van deze techniek. Geleidbaarheid en pH-meting apparaten kunnen voor de verificatie van real-time experimentele omstandigheden. Split fractie eluaat collectie zorgt voor een betere handling fractie en maakt een eenvoudige overdracht voor post-run analyse methoden die een minimaal monstervolume (bijv. ELISA, SDS-PAGE, western blot, en Experion microfluïdische elektroforese) vereisen. Tijdens het bedienen van de tweede fractie collector offline vereist handmatige synchronisatie, het zorgt voor maximale flexibiliteit in de fractie collector selectie. De belangrijkste nadelen aan het gebruik te maken van een dergelijk robuust chromatografie systeem voor het HIC kolom scouting en eiwit zuivering zijn de eerste tijd en budgettaire uitgaven aan de akte aankoop en de opleiding. t &quot;&gt; Het protocol die hier gebruikt een Bio-Rad DuoFlow chromatografie systeem;. echter even sterk instrumentatie andere fabrikanten zoals de Akta Avant van GE Healthcare, kunnen ook worden gebruikt en kunnen die gelijkwaardige resultaten Ook vergelijkbaar chromatografiesysteem hebben unieke kenmerken (bijv. methode programmering, het onderdeel nomenclatuur, de voorkeuren en schaalbaarheid beperkingen) dat moet worden overwogen alvorens een zuivering procedure of instrument acquisitie.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">BioLogic DuoFlow Pathfinder 20 Systeem</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> Inclusief systeem Maximizer, mixer, F10 werkstation, AVR7-3 ventiel, QuadTec UV / Vis detector met stroom cel, BioFrac fractiecollector, BioLogic software en starter kit </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">Avr9-8 stream-klep te selecteren</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> Hogedruk klep 9-poort 8-positie, 3500 psi (233 bar) limiet voor gebruik met BioLogic DuoFlow systeem </td></tr><tr><td> Omschakelklep SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> 7600410 </td><td> Magneetventiel, 3-poort, 2-positie, 30 psi (2 bar) limiet, voor gebruik met biologische DuoFlow systeem </td></tr><tr><td> Stroom splitter ventiel </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tische = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kit </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> Sliding-zuiger sample loop kit, bevat 25 ml DynaLoop schuiven zuiger lus, DynaLoop onderdelen kit (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac Fraction Collector</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> Twee fractie col<html> lectoren gebruikt </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac microplaat Drop Head-adapter</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac microtiterplaat-adapter</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>&amp; Country = US &amp; lang = nl &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">UV-Optics module</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">Halogeen lamp</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> &lt;<html> een target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo Gradient Pomp</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> gradiënt pomp voor lage druk eiwitzuivering, omvat buizen en fittingen van set </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 Analysis Kit</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap HIC kolom selectie kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> Inclusief 7 x 1 ml voorverpakte kolommen van HIC media voor scouting </td></tr><tr><td> GE Healthcare-to-Bio-Rad kolom fittingen </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 en 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

In tegenstelling tot andere chromatografische methoden voor het zuiveren eiwitten (bijv. gelfiltratie, affiniteit en ionenwisseling), hydrofobe interactie chromatografie (HIC) vereist vaak experimentele bepaling (hierna screening of &quot;scouting&quot;) om de meest geschikte chromatografische medium selecteren voor reinigen van een bepaald eiwit 1. De hier beschreven werkwijze beschrijft een automatische benadering scouting voor een optimale HIC media worden gebruikt eiwitzuivering. HIC scheidt eiwitten en andere biomoleculen van een ruw lysaat gebaseerd op verschillen in hydrofobiciteit. Net affiniteitschromatografie (AC) en ionenuitwisselingschromatografie (IEX) HIC kan concentreren het eiwit van belang omdat vordert in de chromatografisch proces. Eiwitten meest geschikt voor zuivering door HIC omvatten die met hydrofobe oppervlaktegebieden en in staat om te weerstaan ​​aan concentraties van meer dan 2 M ammo zoutnium sulfaat ((NH4) 2 SO 4). HIC wordt vaak gekozen als zuiveringsmethode voor eiwitten ontbreken een affiniteit tag, en dus niet geschikt voor AC en wanneer IEX niet in slaagt om voldoende zuivering. Hydrofobe resten op het eiwitoppervlak tijdelijk binden aan een niet-polair ligand gekoppeld met een inert, onbeweeglijk matrix. De interactie tussen eiwit en ligand zijn sterk afhankelijk van de zoutconcentratie van de buffer die door de chromatografiekolom met hoge ionische concentraties versterken eiwit-ligand interactie en waardoor het eiwit onbeweeglijke (bijvoorbeeld gebonden in de kolom) 2. Zoals zoutconcentraties afname het eiwit-ligand interactie verdwijnt het eiwit wordt weer mobiele elueert van de kolom. Verschillende HIC media zijn commercieel beschikbaar in voorverpakte kolommen, die elk een van de hydrofobe liganden (bijv. S-butyl, butyl, octyl, en fenyl) verknoopt op verschillende dichtheden agarose kralen van een specIFIC diameter 3. Automatische kolom scouting zorgt voor een efficiënte aanpak te bepalen welke HIC media moeten worden gebruikt voor toekomstige, meer volledige optimalisatie experimenten en eiwit zuivering loopt 4. De specifieke eiwit dat hier is gezuiverd recombinant green fluorescent protein (GFP), maar de benadering kan worden aangepast voor zuiveren van andere eiwitten met een of meer hydrofobe oppervlaktegebieden. GFP dient als nuttige modeleiwit, vanwege zijn stabiliteit, unieke lichtabsorptie piek bij 397 nm, en fluorescentie bij blootstelling aan UV-licht 5. Bacteriële lysaat met wild type GFP werd bereid in een hoge-zout buffer, geladen in een Bio-Rad DuoFlow medium onder druk vloeistof chromatografie systeem en geadsorbeerde HiTrap HIC kolommen die verschillende HIC media. Het eiwit werd geëlueerd van de kolom en geanalyseerd door in-lijn-en post-run detectiemethoden. Buffer mengen, dynamische monsterlus injectie, sequentiële colgegevensinvoerkolom selectie meerdere golflengte analyse en split fractie eluaat verzameling verhoogd werking van het systeem en reproduceerbaarheid van de experimentele benadering.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

Een automatische methode om geschikte hydrofobe interactie chromatografie (HIC) media te gebruiken in het proces van eiwitzuivering gepresenteerd. De werkwijze maakt gebruik van een medium-druk vloeistof chromatografie systeem met automatische buffer mengen dynamische monsterlus injectie opeenvolgende kolomselektiemiddelen, multi-golflengte analyse en split fractie eluaat collectie.

Geautomatiseerde hydrofobe interactiechromatografie Kolomselectieopties voor gebruik in Protein Purification

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Kleuring van eiwitten in Gels met Coomassie G-250 zonder organisch oplosmiddel en azijnzuur

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Zuivering van het M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome geassocieerd eiwit MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipide bolletjes-gemedieerde affiniteitschromatografie met behulp van Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): een nieuwe methode om eiwit-lipide Interactie Analyze

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Zuivering van Hsp104, een eiwit Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Een vloeibare fase Affiniteit Capture test met behulp van magnetische korrels aan eiwit-eiwit interactie te bestuderen: het poliovirus-Nanobody Voorbeeld

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

Een protocol voor faag display en Affiniteit selectie met recombinant eiwit Baits

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Het identificeren van eiwit-eiwit interactie in<em&gt; Drosophila</em&gt; Adult Heads door Tandem Affinity Purification (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Het identificeren van eiwit-eiwit interacties sites maken met Peptide Arrays

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

Genoom-brede Eiwit-eiwit Interactie Screening door Eiwit-fragment Complementatie Assay (PCA) in levende cellen

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...