Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Ce travail a été financé par les Instituts nationaux de la santé et de subvention GM086822 National Science Foundation majeure des instruments de recherche de subvention DBI-0960313. Les auteurs tiennent à remercier les Drs. Jon Miyake &amp; Donna Hardy (Bio-Rad) et Jennifer Loertscher (Seattle University) pour leur expertise technique. Sélectionnez réactifs de chromatographie et de l&#39;instrumentation supplémentaire a été généreusement fourni par la société Bio-Rad.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

Sélectionnez réactifs de chromatographie et de l&#39;instrumentation supplémentaire ont été offerts par Bio-Rad.

Les techniques de chromatographie liquide se sont avérés inestimables pour la préparation de protéines hautement purifiées nécessaires à la conduite 6 immunologiques, biochimiques 7, 8 et structurelles des études. Méthodes de purification HIC nécessitent le plus souvent la détermination empirique d&#39;un milieu privilégié, et la structure du ligand, la densité de ligand, et de la matrice des propriétés de perles ont toutes été montré à influer sur les résultats chromatographiques 2, 3. Colonne automatisé le scoutisme est une approche efficace pour la sélection d&#39;un support pour l&#39;optimisation ultérieure HIC et 4 de purification des protéines. La méthode de la colonne automatisé dépistage présenté peut être facilement adaptée à différents HIC stratégies de purification des protéines. Les modifications de la concentration en sel, le choix du sel, gradient de sel, et le pH peut en outre améliorer les conditions de purification, et les effets de la variation de ces paramètres essentiels ont déjà été examinés 13,14. Éluat contenant une HIC prote cible partiellement purifiéen peut encore être purifié en utilisant une technique de chromatographie en phase complémentaire, tels que chromatographie échangeuse d&#39;ions (IEX) ou filtration sur gel / chromatographie d&#39;exclusion de taille 9,10. En raison de son absorption de la lumière unique et des caractéristiques d&#39;émission, le profil d&#39;élution de la GFP peut être identifié à l&#39;aide en ligne et de post-terme des approches. À cette fin, ce protocole peut en outre être adaptée pour la purification de recombinants GFP-protéines de fusion, dans laquelle une protéine cible est sans rapport avec &quot;tag&quot; avec la GFP. Protéines cibles GFP-étiquette peut être détectée avec une lumière UV et 11 purifiée en utilisant diverses méthodes chromatographiques, y compris la stratégie de purification HIC décrit ci-dessus. Purification GFP est également devenu un aliment de base dans les laboratoires de biochimie pédagogique pour l&#39;enseignement des techniques modernes de la science des protéines 12. Alors que de base de purification des protéines HIC peut être effectuée en utilisant une chromatographie sensiblement moins robuste sytige, l&#39;instrumentation présentée ici possède un certain nombre d&#39;avantages distincts pour aider à l&#39;obtention de résultats favorables. Avantages notables de l&#39;utilisation d&#39;un système hautement automatisé comprennent l&#39;amélioration de fonctionner à fonctionner condition de reproductibilité, de gain de temps, et une diminution des possibilités de l&#39;air d&#39;être introduites dans le système 10. Buffer blending système contrôlé, qui est facilitée par le système Maximizer, permet une plus grande cohérence dans la préparation du tampon et de la reproductibilité expérimentale. Dessin de charge d&#39;échantillon suffisante dans la boucle d&#39;échantillonnage dynamique pour tous dépistage exécute en outre assure l&#39;uniformité de l&#39;échantillon étant ajouté à chaque colonne et permet pistes séquentielles sans interruption ou manuel de rechargement. Injection de l&#39;échantillon contrôlé à partir de la boucle d&#39;échantillonnage sur la colonne diminue la variabilité qui peut se produire avec un chargement manuelle de l&#39;échantillon. Une paire de soupapes de sélection de colonne pour permettre pistes consécutives, chacune échantillon en utilisant une colonne différente HIC, sans avoir à replumb le système. Exécution mul<html> ti-longueur d&#39;onde d&#39;analyse est particulièrement bénéfique lors du dosage d&#39;une protéine avec un profil unique spectrophotométrique. En plus de la GFP, les cytochromes, flavoprotéines et autres hème contenant des protéines peuvent bénéficier de cette technique. Dispositifs de surveillance de la conductivité et le pH permettent de vérifier en temps réel des conditions expérimentales. Collecte de l&#39;éluat de Split fraction permet une manipulation fraction améliorée et permet le transfert facile pour les méthodes d&#39;analyse post-terme qui nécessitent un volume d&#39;échantillon minime (par exemple ELISA, SDS-PAGE, western blot, et Experion microfluidique électrophorèse). Pendant le fonctionnement de la seconde fraction déconnecté collecteur nécessite une synchronisation manuelle, il permet une flexibilité maximale dans le choix collecteur de fractions. Les inconvénients les plus importants à l&#39;utilisation d&#39;un tel système de chromatographie robuste pour la colonne HIC le scoutisme et la purification des protéines incluent le temps initial et les dépenses budgétaires liées à l&#39;acquisition instrument et la formation des opérateurs. t &quot;&gt; Le protocole présenté ici utilise un Bio-Rad DuoFlow chromatographie système;. Cependant, l&#39;instrumentation aussi robuste d&#39;autres fabricants, tels que l&#39;Avant ÄKTA de GE Healthcare, peuvent également être utilisés et sont capables de produire des résultats équivalents système de chromatographie Même comparables ont des caractéristiques uniques de programmation (par exemple, la méthode, les limites nomenclature des composants, préférences de l&#39;opérateur, et l&#39;évolutivité) qui devraient être considérés avant d&#39;entamer une procédure de purification ou de l&#39;acquisition instrument.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">DuoFlow BioLogic Pathfinder 20 Système</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> Comprend un système de Maximizer, mélangeur, poste de travail F10, AVR7-3 de soupape, UV Quadtec / détecteur de Vis avec cellule d&#39;écoulement, collecteur de fractions BIOFRAC, logiciels BioLogic, et kit de démarrage </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">AVR9-8-flux Sélectionnez la vanne</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> Haut-pression à la valve, 9-port, en position 8, 3500 psi (233 bars) limite, pour une utilisation avec un système DuoFlow BioLogic </td></tr><tr><td> Vanne de dérivation SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> 7600410 </td><td> Electrovanne, 3-port, en position 2, 30 psi (2 bars) limite, pour une utilisation avec un système DuoFlow BioLogic </td></tr><tr><td> Volet clapet de répartition </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tique = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kit </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> Glisse-piston kit boucle d&#39;échantillonnage, comprend 25 ml DynaLoop coulissant boucle piston, kit de pièces DynaLoop (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">Collecteur de fraction BIOFRAC</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> Deux col fraction<html> lecteurs utilisés </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BIOFRAC microplaque adaptateur de tête goutte</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">Adaptateur BIOFRAC plaque de microtitration</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>&amp; Country = Etats-Unis &amp; lang = fr &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">Optique UV Module</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">Lampe halogène</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> &lt;<html> un target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo dégradé la pompe</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> une pompe à gradient pour la purification de protéines à basse pression, et un kit de tube comprend raccords </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion système</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Kit Experion Analyse Pro260</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap kit HIC sélection de la colonne </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> Comprend 7 x 1 ml pré-emballés colonnes des médias HIC pour le scoutisme </td></tr><tr><td> Raccords de GE Healthcare colonne à Bio-Rad </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 18111257 et </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

Contrairement à d&#39;autres méthodes chromatographiques pour les protéines purification (filtration sur gel, par exemple, l&#39;affinité et l&#39;échange d&#39;ions), chromatographie d&#39;interaction hydrophobe (HIC) nécessite souvent la détermination expérimentale (dénommé dépistage ou &quot;scouting&quot;) afin de sélectionner le support le plus approprié par chromatographie en phase pour purifier une protéine donnée 1. La méthode présentée ici décrit une approche automatisée pour le scoutisme pour un média optimales HIC à être utilisés dans la purification des protéines. HIC sépare les protéines et autres biomolécules à partir d&#39;un lysat brut basée sur les différences de caractère hydrophobe. Semblable à la chromatographie d&#39;affinité (AC) et chromatographie échangeuse d&#39;ions (IEX), CIH est capable de concentrer la protéine d&#39;intérêt à mesure qu&#39;elle progresse dans le processus chromatographique. Protéines qui conviennent le mieux pour la purification par HIC comprennent ceux qui sont avec les régions de surface hydrophobes et capables de résister à l&#39;exposition au sel concentrations supérieures à 2 M munitionssulfate de titane ((NH 4) 2 SO 4). HIC est souvent choisi comme un procédé de purification des protéines qui n&#39;ont pas un marqueur d&#39;affinité, et donc impropres à AC, et quand IEX ne parvient pas à fournir de purification adéquate. Fractions hydrophobes sur la surface de la protéine temporairement se lier à un ligand non polaire couplé à une inerte, matrice immobile. L&#39;interaction entre la protéine et le ligand sont fortement tributaires de la concentration en sel de la mémoire tampon qui coule à travers la colonne de chromatographie, avec de fortes concentrations ioniques renforcement de l&#39;interaction protéine-ligand et de faire la protéine immobile (c.-à-lié à l&#39;intérieur de la colonne) 2. Sous forme de sel concentrations diminution, l&#39;interaction protéine-ligand se dissipe, la protéine est de nouveau mobile et est éluée de la colonne. Plusieurs médias HIC sont disponibles dans le commerce pré-emballés colonnes, chacune contenant plusieurs ligands hydrophobes (par exemple S-butyle, butyle, octyle, et phényl) réticulé à différentes densités de billes d&#39;agarose d&#39;un specdiamètre ific 3. Colonne automatisé dépistage permet une approche efficace pour déterminer quels médias HIC devrait être utilisée pour de futures expériences d&#39;optimisation, les plus exhaustives et purification des protéines fonctionne 4. La protéine spécifique se purifier ici est une protéine recombinante fluorescente verte (GFP), mais l&#39;approche peut être adaptée pour la purification d&#39;autres protéines avec une ou plusieurs régions de surface hydrophobes. GFP sert une protéine modèle utile, en raison de sa stabilité, unique pic d&#39;absorbance de lumière à 397 nm et la fluorescence lorsqu&#39;ils sont exposés à la lumière UV 5. Lysat bactérien contenant la GFP de type sauvage a été préparé dans un tampon riche en sel, chargé dans un Bio-Rad moyennes DuoFlow système de pression chromatographie en phase liquide, et adsorbés sur des colonnes HiTrap HIC contenant différents médias HIC. La protéine a été élue des colonnes et analysées par en ligne et les méthodes de détection post-terme. Mélange tampon, dynamique boucle d&#39;injection de l&#39;échantillon, col séquentiellelonne de sélection, multi-longueur d&#39;onde d&#39;analyse et de collecte de l&#39;éluat scission fraction augmenté la fonctionnalité du système et la reproductibilité de la démarche expérimentale.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

Procédé automatisé pour identifier appropriés chromatographie d&#39;interaction hydrophobe (HIC) médias à être utilisés dans le procédé de purification de protéine est présenté. La méthode utilise un système de moyenne pression chromatographie en phase liquide, y compris buffer blending automatisé, dynamique boucle d&#39;injection de l&#39;échantillon, sélection de la colonne séquentielle, multi-longueur d&#39;onde d&#39;analyse et de collecte de l&#39;éluat scission fraction.

Automatisé d&#39;interaction hydrophobe Chromatographie sur colonne de sélection pour l&#39;utilisation dans la purification des protéines

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Coloration des protéines dans les gels de Coomassie G-250, sans solvant et l&#39;acide acétique organique

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Recherche

Biologie

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Purification de la M. magneticum Strain AMB-1 Protein magnétosome Associated MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimoléculaire complémentation de fluorescence (BiFC) Dosage pour les interactions protéine-protéine dans les cellules d&#39;oignon Utilisation du pistolet à gènes Helios

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Chromatographie d&#39;affinité lipidique des vésicules médiée utilisant magnétique tri cellulaire activé (LIMACS): une nouvelle méthode pour analyser les interactions protéines-lipides

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Purification de Hsp104, une protéine Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Un essai en phase liquide d&#39;affinité de capture utilisant des billes magnétiques pour étudier interaction protéine-protéine: Le poliovirus Exemple-Nanobodies

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

Un protocole pour Phage Display et Affinity sélection en utilisant appâts protéine recombinante

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Identifier les interactions protéine-protéine dans<em&gt; Drosophila</em&gt; Têtes de Tandem Affinity Purification adultes (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Identifier les sites d&#39;interaction protéine-protéine à l&#39;aide de peptides tableaux

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

L&#39;échelle du génome interaction protéine-protéine Le dépistage par Protein-fragment complémentation Assay (PCA) dans les cellules vivantes

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...