Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענק GM086822 ואת הקרן הלאומית למדע גדולה מכשור מענק מחקר DBI-0960313. המחברים מודים בני הזוג. ג&#39;ון מיאקה &amp; דונה הארדי (BIO-RAD) וג&#39;ניפר Loertscher (אוניברסיטת סיאטל) עבור המומחיות הטכנית שלהם. בחר ריאגנטים כרומטוגרפיה ומכשור משלימה נמסרו בנדיבות על ידי Bio-Rad.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

בחר ריאגנטים כרומטוגרפיה ומכשור משלימה סופקו על ידי Bio-Rad.

טכניקות כרומטוגרפיה נוזלית הוכיחו ערך רב להכנת חלבונים מטוהרים מאוד הדרושים לביצוע 6 החיסונית, ביוכימי 7, 8 מחקרים מבניים. שיטות טיהור היק לרוב דורשים קביעת אמפירית של המדיום המועדף, והמבנה ליגנד, צפיפות ליגנד, ואת מטריקס תכונות חרוזים כל הוכחו להשפיע על תוצאות chromatographic 2, 3. טור אוטומטי צופיות היא גישה יעילה לבחירת בינוני היק לאופטימיזציה לאחר וטיהור חלבון 4. שיטת הטור אוטומטי צופיות הציג ניתן להתאים בקלות אסטרטגיות שונות טיהור היק חלבון. שינויים בריכוז המלח, הבחירה מלח, צבע מלח, pH עשוי לשפר עוד יותר את התנאים טיהור, ואת ההשפעות של משתנים אלה פרמטרים חיוניים נבדקו קודם לכן 13,14. Eluate היק המכיל prote היעד מטוהרים חלקיתב יכול להיות מטוהרים יותר בטכניקה chromatographic משלימים, כגון חילוף יונים כרומטוגרפיה (IEX) או סינון / גודל ג&#39;ל הרחקת כרומטוגרפיה 9,10. בגלל ספיגת אור ייחודי ומאפיינים פליטה, פרופיל elution של ה-GFP ניתן לזהות שימוש ב-line ופוסט להפעיל גישות. לשם כך, פרוטוקול זה יכול עוד להיות מותאם לטיהור של ה-GFP-Fusion חלבונים רקומביננטיים, שבו חלבון המטרה קשור הוא &quot;מסומן&quot; עם ה-GFP. חלבונים היעד GFP-מתוייגים ניתן לאתר עם ​​האור האולטרה סגול 11 ו מטוהרים באמצעות גישות chromatographic שונים, כולל אסטרטגיה טיהור היק שתואר לעיל. טיהור GFP הפך גם מצרך פדגוגית במעבדות ביוכימיה ללימוד טכניקות מודרניות מדע חלבון 12. בעוד חלבון בסיסי טיהור היק ניתן לבצע באמצעות החזקה משמעותית פחות כרומטוגרפיה סאיגזע, מכשור המוצג כאן יש מספר יתרונות ברורים על מנת לסייע בהשגת תוצאות חיוביות. היתרונות הבולטים של ניצול מערכת אוטומטית ביותר כוללים שיפור לרוץ אל הפעל מצב, שחזור זמן חיסכון, וירידה הזדמנויות אוויר שיש להזין למערכת 10. מערכת מיזוג מבוקר חיץ, אשר בהנחייתם של Maximizer המערכת, מאפשרת עקביות מוגברת לקראת חיץ שחזור ניסיוני. ציור מטען מדגם מספיק לתוך לולאה דגימה דינמי לכל צופיות פועל עוד יותר מבטיחה אחידות המדגם להתווסף כל עמודה ומאפשר פועל ברצף ללא הפרעה או הוראות מחדש. הזרקה מדגם מבוקר מ לולאה דגימה על הטור מקטין שונות שעלולות להתרחש עם טעינת מדגם ידני. זוג שסתומים הבחירה עמודה לאפשר פועל מדגם רצופים, כל אחד באמצעות עמודת היק אחר, מבלי replumb המערכת. ביצוע מול<html> TI גל ניתוח מועילה במיוחד כאשר מנסה לאמוד חלבון עם פרופיל spectrophotometric ייחודי. בנוסף ה-GFP, cytochromes, flavoproteins, ושאר heme המכיל חלבונים עשויים להפיק תועלת טכניקה זו. מוליכות ו-pH מערכות התראה לאפשר אימות בזמן אמת תנאי הניסוי. חלק פיצול אוסף eluate מאפשר טיפול חלק משופרת המאפשרת העברה קלה לאחר להפעיל שיטות ניתוח הדורשים נפח דגימה מינימלית (למשל ELISA, SDS-PAGE, המערבי כתם, ו אלקטרופורזה Experion microfluidic). בזמן ההפעלה מחובר 2 אספן חלק דורש סנכרון ידני, היא מאפשרת גמישות מרבית בבחירת אספן חלק. החסרונות המשמעותיים ביותר תוך ניצול מערכת כזו כרומטוגרפיה חזקים עבור עמודה היק צופיות וטיהור חלבון כולל את פרק הזמן הראשוני ההוצאות התקציביות הכרוכות ברכישת מכשיר והכשרה של המפעיל. t &quot;&gt; פרוטוקול שהוצג מנצל מערכת ביו רד DuoFlow כרומטוגרפיה,. עם זאת, מכשור חזקים באותה מידה של יצרנים אחרים, כגון Avant אקטע מ GE Healthcare, עשוי גם להיות מנוצל ולא מסוגלים לייצר תוצאות מקבילות כרומטוגרפיה דומה גם במערכת יש מאפיינים ייחודיים (כגון: תכנות, מגבלות שיטת המינוח רכיב, עדיפות למפעיל, ויכולת הרחבה) כי יש לשקול לפני ביצוע הליך טיהור או רכישת מכשיר.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (לא חובה) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">DuoFlow ביולוגיים Pathfinder 20 מערכת</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> כולל מערכת Maximizer, מיקסר, תחנת עבודה F10, AVR7-3 שסתום, UV QuadTec / גלאי פנים, עם תא זרימה, אספן חלק BioFrac, תוכנה ביולוגיים, וערכת המתנע </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">AVR9-8 זרם בחר שסתום</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> שסתום לחץ גבוה, 9 יציאות, 8 מצבים, 3,500 psi (233 בר) על התחום, לשימוש עם מערכת DuoFlow ביולוגיים </td></tr><tr><td> Diverter שסתום SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> 7600410 </td><td> שסתום סולנואיד, 3 יציאות, 2 מצבים, 30 PSI (2 בר) על התחום, לשימוש עם מערכת DuoFlow ביולוגיים </td></tr><tr><td> הנחל מפצל שסתום </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tical = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kit </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> הזזה בוכנה לולאה ערכת דגימה, כולל 25 מ&quot;ל DynaLoop הזזה לולאה בוכנה, DynaLoop ערכת חלקים (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">שבר BioFrac הנציב</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> חלק שני col<html> המשפחה של לקטור שימוש </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac ראש microplate ירידה במתאם</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac microtiter מתאם צלחת</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td>&amp; = מדינה בארה&quot;ב &amp; lang = he &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">UV אופטיקה מודול</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">מנורת הלוגן</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> &lt;<html> target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo משאבת Gradient</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> משאבת שיפוע לטיהור בלחץ נמוך חלבון, כולל צינורות ערכת אביזרי </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion מערכת</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 ערכת ניתוח</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">ביו רד</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> טור היק HiTrap בחירת ערכת </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> כולל 7 x 1 מ&quot;ל מראש ארז עמודי התקשורת היק עבור צופיות </td></tr><tr><td> GE Healthcare אל ביו רד אביזרי עמודה </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 ו 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

בניגוד לשיטות אחרות chromatographic טיהור חלבונים (למשל סינון בג&#39;ל, זיקה, ואת חילוף יונים), כרומטוגרפיה אינטראקציה הידרופובי (היק) בדרך כלל דורש נחישות ניסיוני (המכונה ההקרנה או &quot;צופיות&quot;) על מנת לבחור את המדיום המתאים ביותר chromatographic לטיהור חלבון נתון 1. השיטה המוצגת כאן מתארת ​​גישה אוטומטית צופיות, לתקופה של התקשורת היק אופטימליים כדי לשמש טיהור חלבונים. היק מפריד חלבונים ביומולקולות אחרים lysate גולמי על בסיס הבדלים hydrophobicity. בדומה זיקה כרומטוגרפיה (AC) ואת חילוף יונים כרומטוגרפיה (IEX), היק מסוגל לרכז את החלבון של עניין תוך כדי התקדמות בתהליך chromatographic. חלבונים המתאימים ביותר על ידי היק לטיהור כוללים את אלה עם אזורי משטח הידרופובי ומסוגל לעמוד החשיפה מלח בריכוז העולה על תחמושת מ 2nium סולפט ((NH 4) 2 SO 4). היק נבחר לעתים קרובות כשיטה טיהור חלבונים חסרי זיקה תג, ואינם מתאימים ולכן על AC, וכאשר IEX אינה נותנת טיהור נאותה. Moieties הידרופובי על פני החלבון באופן זמני להיקשר ליגנד פולרי מצמידים את מטריקס, נייח נייח. האינטראקציה בין חלבונים ליגנד הם תלויים במידה רבה על ריכוז מלח למאגר זורם דרך העמודה כרומטוגרפיה, עם ריכוזים יוניים גבוהים לחיזוק האינטראקציה חלבונים ליגנד ולהפוך את החלבון נייח (כלומר כבול בתוך הטור) 2. כמו ירידה בריכוז המלח, אינטראקציה חלבון ליגנד מתפוגג, חלבון שוב הופך נייד elutes מהעמודה. התקשורת היק כמה זמינים מסחרית מראש ארז עמודות, שכל אחת מהן מכילה 1 של ligands הידרופובי מספר (למשל S-בוטיל, בוטיל, octyl, ואת פניל) צולבים על צפיפויות שונות כדי חרוזים agarose של המפרטific בקוטר 3. טור אוטומטי צופיות מאפשר גישה יעילה בקביעת היק התקשורת צריכה להיות מועסק על ניסויים עתידיים, אופטימיזציה ממצה יותר וטיהור החלבון מפעילה 4. החלבון הספציפי מטוהרים כאן הוא רקומביננטי חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP), אולם הגישה יכול להיות מותאם לטיהור חלבונים אחרים עם אחד או יותר אזורים משטח הידרופובי. GFP חלבון משמש מודל שימושי, בשל יציבותו, ספיגת ייחודי שיא האור 397 ננומטר, ואת הקרינה בעת חשיפה לאור UV 5. Lysate בקטריאלי המכיל GFP סוג בטבע הוכן מאגר גבוהה מלח, נטען לתוך ביו רד הלחץ DuoFlow מערכת בינונית כרומטוגרפיה נוזלית, ואת ספוחים לסחף נחלי לטורים המכילים HiTrap היק היק מדיה שונים. חלבון היה eluted מן העמודים ונותחו על ידי line-in ופוסט להפעיל שיטות זיהוי. מיזוג חיץ, הזרקת לולאה דגימה דינאמית, קול רציףהבחירה umn, רב גל ניתוח, חלק פיצול אוסף גדל eluate את הפונקציונליות של המערכת, שחזור של גישה ניסויית.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

שיטה אוטומטית לזיהוי מתאימים הידרופובי כרומטוגרפיה אינטראקציה (היק) התקשורת כדי לשמש בתהליך של טיהור חלבון מוצג. השיטה משתמשת בינוני הלחץ כרומטוגרפיה נוזלית כולל מערכת מיזוג חיץ אוטומטי, הזרקת לולאה דגימה דינמי, בחירת העמודה רצף, רב גל ניתוח, חלק פיצול אוסף eluate.

הידרופובי אוטומטי אינטראקציה כרומטוגרפיה טור בחירה עבור שימוש ב טיהור חלבון

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

הכתמה של חלבונים עם ג&#39;ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

טיהור של מ magneticum מסננים השגריר-1 Magnetosome חלבון Associated MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular השלמה פלואורסצנטי (BiFC) Assay עבור אינטראקציה בין חלבונים בתאים בצל באמצעות אקדח הליוס ג&#39;ין

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

שלפוחיות בתיווך זיקה ליפידים כרומטוגרפיה באמצעות Cell מגנטי מיון פעיל (LIMACS): שיטה חדשה לנתח חלבון, שומנים אינטראקציה

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

טיהור Hsp104, Disaggregase חלבון

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

שלב נוזלי זיקה לכידת Assay באמצעות חרוזים מגנטיים ללמוד חלבונים אינטראקציה: דוגמה poliovirus-Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

פרוטוקול לתצוגת הפאג וזיקה בחירה באמצעות פיתיונות חלבון רקומביננטי

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

זיהוי אינטראקציה בין חלבונים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; ראשי מבוגרים טנדם זיקה טיהור (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

זיהוי אתרי אינטראקציה בין חלבונים באמצעות פפטיד מערכים

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

הקרנת הגנום כל חלבונים אינטראקציה ידי חלבון-בר השלמה Assay (PCA) בתאים חיים

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...