Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
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이 작품은 건강 교부금 GM086822과 국립 과학 재단의 주요 연구 계장 보조금 DBI-0960313 국립 연구소에 의해 재정 지원되었다. 저자는 Drs를 감사드립니다. 존 미야케 &amp; 도나 하디 (바이오 방사선)과 기술적 전문성을위한 제니퍼 Loertscher (시애틀 대학). 크로마 토그래피의 시약을 선택하고 추가 장비가 넉넉한 바이오 방사선에 의해 제공되었다.

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크로마 토그래피의 시약을 선택하고 추가 장비는 바이오 - 방사선에 의해 제공되었다.

액체 크로마 토그래피 기법 7 생화 학적, 면역 6을 수행하는데 필요한 고도로 정제된 단백질을 준비하고, 구조적 8 연구를 위해 귀중한를 입증했습니다. 혼성 집적회로 정화 방법은 가장 많이 선호하는 매체의 경험적 결정을 요구하고, 리간드 구조, 리간드 밀도, 그리고 매트릭스 비드 속성은 모든 색층 결과 2, 3에 영향을 보여줘왔다. 정찰 자동 열은 이후의 최적화 및 단백질 정제 4 혼성 집적회 매체 선택을위한 효율적인 접근 방법입니다. 제시 자동화된 컬럼 탐색 방법을 쉽게 다양한 혼성 집적회로 단백질 정제 전략에 적용할 수 있습니다. 소금 농도, 소금의 선택, 소금 그라데이션, 그리고 산도의 변경은 더 정화 조건을 향상시킬 수 있으며, 이러한 필수 매개 변수를 변화의 효과는 이전에 13,14을 검토하고있다. 부분적으로 정화 대상 prote를 포함하는 혼성 집적회로 eluate안에는 더 이상 이러한 이온 교환 크로마 토그래피 (IEX) 또는 겔 여과 / 크기 배제 크로마 토그래피 9,10과 같은 보완 색층 기법을 사용하여 투석을 할 수 있습니다. 워낙 독특한 조명 흡광도 및 방출 특성 때문에, GFP의 용출 프로파일은 인라인 및 사후 운영하는 방식을 사용하여 확인할 수 있습니다. 이를 위해,이 프로토콜은 더 이상 관련이없는 대상 단백질이 GFP와 &quot;태그가&quot;되는, 재조합 GFP-융합 단백질의 정제에 맞게 조정 할 수 있습니다. GFP-태그가 대상 단백질은 자외선 11 위에서 설명한 혼성 집적회로 정화 전략 등 다양한 색층 접근법을 사용하여 정제로 감지가 가능하다. GFP 정화는 또한 현대 단백질 과학 기술 12 교육을위한 생화학 실험실에서 교육학 주식이되었다. 기본적인 혼성 집적회로 단백질 정제는 크게 덜 강력한 크로마 토그래피 싸이를 사용하여 수행할 수 있지만줄기, 여기서 제시된 계측이 유리한 결과를 얻기에 투입하기 위해 뚜렷한 장점을 가지고 있습니다. 고도로 자동화된 시스템을 활용의 주목할만한 장점이 실행 대 실행 조건 재현성, 시간 절감 효과를 개선하고, 시스템 10에 소개되는 공기의 기회를 감소 등이 있습니다. 시스템 극대화에 의해 촉진되고 시스템 제어 버퍼 블렌딩은, 버퍼 준비 및 실험 재현성의 향상 일관성을 허용합니다. 모든 정찰을위한 동적 샘플 루프에 충분한 샘플 하중을 설계하고 실행하는 것은 더욱 각 컬럼에 추가되는 샘플의 균일을 보장하고 중단하거나 다시로드 매뉴얼없이 순차적인 실행을 허용합니다. 칼럼쪽으로 샘플 루프에서 제어 샘플 주입 수동 샘플 로딩과 함께 발생할 수있는 다양성을 낮춥니다. 열 선택 밸브의 쌍은 시스템을 replumb 필요없이 연속 샘플 실행, 다른 혼성 집적회로 컬럼을 사용하여 각각에 대해 허용합니다. mul 공연<html> 독특한 분광 프로필로 단백질을 시금 때 TI-파장 분석에 특히 유용합니다. GFP 외에도 cytochromes, flavoproteins 및 기타 헴 함유 단백질이 기술로부터 혜택을 누릴 수 있습니다. 전도율과 산도 모니터링 디바이스는 실시간 실험 조건의 확인을 위해 수 있습니다. 분할 분획 eluate 컬렉션은 향상된 분획 처리 가능하며 최소한의 샘플 볼륨 (예 : 엘리사, SDS-PAGE, 서부 얼룩 및 Experion microfluidic 전기 영동) 요구 이후의 운영 분석 방법에 대해 쉽게 전송이 가능합니다. 두 번째 분획 컬렉터 오프라인을 운영하는 것은 수동 동기화가 필요하지만, 그것은 분획 수집기 선택에 최대의 유연성을 허용합니다. 혼성 집적회로 정찰 칼럼 및 단백질 정제를 위해 이러한 강력한 크로마 토그래피 시스템을 활용하여 가장 중요한 단점은 초기 시간과 악기 수집 및 운영자 교육과 관련된 예산 지출을 포함합니다. T &quot;&gt; 여기를 제시 프로토콜 바이오 방사선 DuoFlow 크로마 토그래피 시스템을 활용,. 그러나, 이러한 GE 헬스케어에서 악타의 복고 등 다른 제조 업체,에서 똑같이 강력 계장도 활용 수 있으며, 이에 상응하는 결과를 생산하는 능력이있다하더라도 비교 크로마 토그래피 시스템 정화 절차 또는 악기 수집을 시작하기 전에 고려해야하는 고유의 특성 (예를 들면 메소드 프로그래밍, 컴포넌트 명명법, 사업자 환경, 그리고 확장성 제한)가.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">생물 학적 DuoFlow 탐험자 20 시스템</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7,602,257</a> </td><td> 시스템의 극대화, 믹서, F10 워크 스테이션, AVR7-3 밸브, QuadTec의 UV / 흐름 전지, BioFrac 분획 수집기, 생물 학적 소프트웨어 VIS 검출기 및 스타터 키트 포함 </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">AVR9-8 스트림의 선택 밸브</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7,600,408</a> </td><td> 생물 학적 DuoFlow 시스템에서 사용하기에 고압 밸브, 9 포트, 8 위치, 3,500 PSI (233 바) 한도, </td></tr><tr><td> 분배기 밸브 SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> 7,600,410 </td><td> 생물 학적 DuoFlow 시스템을 함께 사용하기위한 솔레노이드 밸브, 3 포트, 2 순위, 30 PSI (2 바) 한도, </td></tr><tr><td> 스트림 스플리터 밸브 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tical = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; DynaLoop 25 키트 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7,500,451</a> </td><td> 샘플 루프 키트 슬라이딩 - 피스톤은 피스톤 루프를 슬라이딩 25 ML의 DynaLoop, DynaLoop 부품 키트 (# 750-0450)가 포함되어 있습니다 </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac 분수 수집기</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7,410,002</a> </td><td> 두 분획 열<html> lectors 사용된 </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac microplate 드롭 헤드 어댑터</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7,410,088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac microtiter 플레이트 어댑터</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td>&amp; 국가 = 미국과 랭 = ko를 &amp; 제품 일련 = 741-0017 &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">자외선 광학 모듈</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7,500,202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">할로겐 램프</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> &lt;<html> 대상 = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">이코노 그라데이션 펌프</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7,319,001</a> </td><td> 저압 단백질 정제를위한 기울기 펌프, 튜브 및 부속품 키트를 포함 </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion 시스템</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?에 cmd = BRCatgProductDetail &amp; 제품 일련 번호 = 224301 &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 분석 키트</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">바이오 방사선</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7,007,102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap 혼성 집적회로 열 선택 키트 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 28-4110-07 </td><td> 정찰을위한 혼성 집적회로 미디어 7 × 1 ML 미리 포장 열이 포함 </td></tr><tr><td> GE 헬스케어 - 투 - 바이오 - 방사선 칼럼 피팅 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 18111251 및 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

정화 단백질 (예 : 젤 여과, 친화력, 그리고 이온 교환) 다른 색층 방법와는 달리, 소수성 상호 작용 크로마 토그래피 (혼성 집적회로)는 일반적으로 가장 적합한 색층 매체를 선택하기 위해 실험적 결정 (심사 또는 &quot;정찰&quot;로 칭함)가 필요합니다 주어진 단백질 1 정화입니다. 여기에 제시된 방법은 단백질 정제에 사용되는 최적의 혼성 집적회로 미디어를 찾는다는 뜻에 대한 자동 접근 방식을 설명합니다. 혼성 집적회로가 소수성의 차이를 기반으로 원유 lysate에서 단백질 및 기타 biomolecules를 분리시킵니다. 친화성 크로마 토그래피 (AC)와 이온 교환 크로마 토그래피 (IEX)와 마찬가지로, 혼성 집적회는 색층 프로세스를 통해 진행됨에 따라 관심 단백질을 집중시킬 것입니다. 최고의 혼성 집적회로에 의해 정화에 적합 단백질은 소수성 표면 영역 및 2 M의 탄약을 초과하는 농도를 방해하기 위해 노출을 견딜 수있는 사람을 포함nium 황산 ((NH 4) 2 SO 4). 혼성 집적회로 종종 친화 태그가 부족한 단백질을위한 정제 방법으로 선택하고, 교류를위한 따라서 적합하고, IEX는 충분한 정화를 제공하는 데 실패하면된다. 단백질 표면의 소수성 moieties 일시적으로 불활성, 움직이기 힘드는 매트릭스를 결합 무극 성 리간드에 바인딩. 단백질과 리간드 사이의 상호 작용이 단백질 - 리간드 상호 작용을 강화하고 움직이기 힘드는 단백질 (즉, 열은 내부 구속) 2를 만들기 높은 이온 농도로, 크로마 토그래피 칼럼을 통해 흐르는 버퍼의 소금 농도에 크게 의존합니다. 소금 농도 감소로 단백질 리간드 상호 작용 없어져요, 단백질 다시 컬럼에서 모바일 및 elutes된다. 여러 혼성 집적회로 미디어가 미리 포장 컬럼에서 상업적으로 사용할 수있는 여러 소수성 리간드 (예 : octyl S-부틸, 부틸, 그리고 페닐) 각각 포함하는 하나 사양의 아가로 오스 비즈로 밀도를 변화에서 크로스는-연결된ific 직경 3. 정찰 자동 열은 혼성 집적회로 미디어가 앞으로 더 철저한 최적화 실험을 위해 고용 및 단백질 정제 4를 운영해야하는 결정하기위한 효율적인 접근을 허용합니다. 여기를 정화하는 특정 단백질은 재조합 녹색 형광 단백질 (GFP)입니다 있으나, 접근은 하나 이상의 소수성 표면 영역과 다른 단백질 정화에 맞게 조정될 수 있습니다. GFP가 자외선 5로 노출시의 안정성, 397 nm의에서 독특한 빛의 흡광 피크, 그리고 형광에 의한 유용한 모델 단백질로서의 역할을합니다. 야생 형 GFP를 포함하는 세균성 lysate는 높은 소금 버퍼에 준비된 바이오 방사선 DuoFlow 매체 압력 액체 크로마 토그래피 시스템에로드하고, 다른 혼성 집적회로 미디어를 포함하는 HiTrap 혼성 집적회로 컬럼에 adsorbed되었다. 단백질은 칼럼에서 eluted과 인라인 및 사후 운영하는 검출 방법에 의해 분석되었다. 버퍼 블렌딩, 동적 시료 루프 주입, 순차 열umn 선택, 다중 파장 분석 및 분할 분획 eluate 컬렉션은 실험적 접근 방식의 시스템과 재현성의 기능을 향상시켰습니다.

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Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

단백질 정제의 과정에서 사용될 적합한 소수성 상호 작용 크로마 토그래피 (혼성 집적회로) 미디어를 식별하는 자동화된 방법을 설명하고있다. 방법은 자동화된 버퍼 블렌딩, 동적 시료 루프 주입, 순차 열 선택, 다중 파장 분석 및 분할 분획 eluate 컬렉션을 포함하여 중간 압력 액체 크로마 토그래피 시스템을 활용합니다.

단백질 정제에서 사용하기 위해 자동화된 소수성 상호 작용 크로마 토그래피 칼럼 선정

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A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

단백질 - 단백질 상호 작용 연구를 자성 비즈를 사용하여 액상 동질 캡처 분석 : Poliovirus-Nanobody의 예

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

재조합 단백질의 미끼를 사용 파지 디스플레이와 궁합 선택을위한 프로토콜

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

단백질 - 단백질 상호 작용을 확인<em&gt; 초파리</em탠덤 선호도 정화로&gt; 성인 머리 (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

펩타이드 배열을 사용하여 단백질 - 단백질 상호 작용 사이트를 확인

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

살아있는 세포의 단백질 조각 보완 분석 (PCA)에 의해 게놈 전체 단백질 - 단백질 상호 작용 상영

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...