Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av National Institutes of Health stipend GM086822 og National Science Foundation større forskningsprosjekt instrumentering stipend DBI-0960313. Forfatterne ønsker å takke legene. Jon Miyake &amp; Donna Hardy (Bio-Rad) og Jennifer Loertscher (Seattle University) for sin tekniske ekspertise. Velg kromatografidatasystemer reagenser og supplerende instrumentering ble sjenerøst gitt av Bio-Rad.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

Velg kromatografidatasystemer reagenser og supplerende instrumentering ble gitt av Bio-Rad.

Væskekromatografi teknikker har vist seg uvurderlig for å forberede høyt rensede proteiner er nødvendige for å gjennomføre immunologisk 6, biokjemiske 7, og strukturelle 8 studier. Hic rensemetoder som oftest krever empirisk bestemmelse av en foretrukket medium, og ligand struktur, ligand tetthet, og matrise perle egenskaper alle har vist seg å påvirke kromatografiske resultater 2, 3. Automatisert kolonne speiding er en effektiv metode for å velge en HIC medium for senere optimalisering og proteinrensing 4. Den automatiserte kolonnen speiding metoden presenteres lett kan tilpasses ulike Hic proteinrensing strategier. Endringer i salt konsentrasjon, valg av salt, salt gradient, og pH kan ytterligere forbedre rensing forholdene, og effekten av varierende disse viktige parametre, har tidligere blitt anmeldt 13,14. HIC eluatet inneholder en delvis renset mål Protei kan renses ytterligere ved hjelp av en komplementær kromatografisk teknikk, for eksempel ionebytting kromatografi (IEX) eller gel filtrering / størrelse utestenging kromatografi 9,10. På grunn av sin unike lys absorbans og utslipp egenskaper, kan eluering profilen GFP bli identifisert ved hjelp av in-line og post-run tilnærminger. For dette formål kan denne protokollen videre være tilrettelagt for rensing av rekombinante GFP-fusion proteiner, som et uavhengig mål protein er &quot;tagget&quot; med GFP. GFP-merket target proteiner kan oppdages med UV lys 11 og renset ved hjelp av forskjellige kromatografiske metoder, inkludert HIC rensing strategien beskrevet ovenfor. GFP rensing har også blitt en pedagogisk stift i biokjemi laboratorier for undervisning i moderne protein vitenskap teknikker 12. Mens grunnleggende HIC proteinrensing kan bli utført ved hjelp av en vesentlig mindre robust kromatografi systammen, har instrumentering presenteres her en rekke klare fordeler å hjelpe med å skaffe gode resultater. Kjente fordelene ved å benytte en svært automatisert system inkluderer forbedret kjøre-til-serie tilstand reproduserbarhetsforhold, tid-sparing, og redusert mulighet for luft til å bli introdusert inn i systemet 10. System-kontrollert buffer blanding, som er tilrettelagt av systemet MAXIMIZER, åpner for økt konsistens i buffer forberedelse og eksperimentell reproduserbarhet. Tegning nok prøve laste inn i dynamiske prøven løkke for all speiding går videre sikrer ensartethet av prøven blir lagt til hver kolonne og gir mulighet for sekvensielle kjører uten avbrudd eller manuell omlasting. Kontrollert prøve injeksjon fra prøven sløyfen på kolonnen reduseres variasjonen som kan oppstå med manuell prøven lasting. Et par kolonne utvalg ventiler tillate påfølgende prøven nedfarter, hver med en annen HIC kolonne, uten å replumb systemet. Utføre mul<html> TI-bølgelengde analyse er spesielt gunstig når analysere et protein med en unik Spektrofotometrisk profil. I tillegg til GFP kan cytokromer, flavoproteins og andre heme som inneholder proteiner dra nytte av denne teknikken. Ledningsevne og pH overvåkingsutstyr tillater verifisering av sanntids eksperimentelle forhold. Split brøkdel eluatet samling muliggjør forbedret brøkdel håndtering og muliggjør enkel overføring til post-run analysemetoder som krever en minimal prøvevolum (f.eks ELISA, SDS-PAGE, western blot, og Experion microfluidic elektroforese). Når du bruker andre fraksjonen samleren offline krever manuell synkronisering, gir det mulighet for maksimal fleksibilitet i fraksjonen kollektoren valg. De mest betydelige ulemper til å utnytte et slikt robust kromatografi system for HIC kolonne speiding og proteinrensing inkludere den opprinnelige tiden og budsjettmessige utgifter forbundet med instrument oppkjøp og opplæring av operatører. t &quot;&gt; Protokollen presenteres her utnytter en Bio-Rad DuoFlow kromatografi system;. men kan like robust instrumentering fra andre produsenter, som for eksempel AKTA Avant fra GE Healthcare, også bli utnyttet og er i stand til å produsere tilsvarende resultater Selv sammenlignbare kromatografi system har unike egenskaper (f.eks metode programmering, komponent nomenklatur, operatør preferanse, og skalerbarhet begrensninger) som bør vurderes før du starter en renselse prosedyre eller instrument oppkjøp.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagensen </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valgfritt) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">Biologisk DuoFlow Pathfinder 20 System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> Inkluderer system MAXIMIZER, mikser, F10 arbeidsstasjon, AVR7-3 ventil, QuadTec UV / Vis detektor med strømningscellen, BioFrac brøkdel samleren, biologisk programvare, og Starter Kit </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">AVR9-8 stream-velger ventil</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> Høytrykksventil, 9-port, 8-posisjon, 3500 psi (233 bar) grenseverdier, for bruk med Biologisk DuoFlow system </td></tr><tr><td> Omskifterventil SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> 7600410 </td><td> Magnetventil, 3-port, 2-stilling, 30 psi (2 bar) grenseverdier, for bruk med Biologisk DuoFlow system </td></tr><tr><td> Stream splitter ventil </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tisk = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kit </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> Sliding-stempel prøve Loop kit, inneholder 25 ml DynaLoop skyve stempelet loop, DynaLoop deler kit (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac Brøk Collector</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> To brøkdel col<html> lectors brukt </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac mikroplate dråpe hodet adapter</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac microtiter plate adapter</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>&amp; Country = US &amp; lang = no &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">UV Optics Module</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">Halogen lampe</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> &lt;<html> en target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo Gradient Pump</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> gradient pumpe for lavt trykk proteinrensing, omfatter rør og rørdeler kit </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7007001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 Analyse Kit</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap HIC kolonne utvalg kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> Inkluderer 7 x 1 ml ferdigpakkede kolonner med Hic medier for speiding </td></tr><tr><td> GE Healthcare-til-Bio-Rad kolonne fittings </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 og 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

I motsetning til andre kromatografiske metoder for rensing av proteiner (f.eks gel filtrering, slektskap, og ionebytting), krever hydrofob interaksjon kromatografi (HIC) vanligvis eksperimentell bestemmelse (referert til som screening eller &quot;speiding&quot;) for å velge den mest egnede kromatografiske medium for rensing av en gitt protein 1. Metoden som presenteres her beskriver en automatisert tilnærming til speiding for et optimalt Hic medier skal brukes i protein rensing. HIC skiller proteiner og andre biomolekyler fra en rå lysate basert på forskjeller i hydrofobisitet. I likhet med affinitet kromatografi (AC) og ionebytting kromatografi (IEX), er HIC stand til å konsentrere protein av interesse som det skrider frem gjennom kromatografisk prosess. Proteiner best egnet for rensing av HIC omfatter de med hydrofob overflate regioner og i stand til å tåle eksponering til salt konsentrasjoner i overkant av 2 M ammunisjonnium sulfat ((NH 4) 2 SO 4). HIC blir ofte valgt som en metode for rensing for proteiner som mangler en affinitet tag, og dermed uegnet for AC, og når IEX unnlater å gi tilstrekkelig rensing. Hydrofobe moieties på protein overflaten midlertidig binde seg til en polare ligand koblet til en inert, immobile matrise. Samspillet mellom protein og ligand er svært avhengig av salt konsentrasjonen av buffer strømmer gjennom kromatografi kolonnen, med høye ioniske konsentrasjoner styrking protein-ligand samhandling og gjøre protein immobile (dvs. bundet inne i kolonne) 2. Som salt konsentrasjoner nedgang, protein-ligand interaksjon forsvinner, proteinet blir igjen mobil og elutes fra kolonnen. Flere Hic media er kommersielt tilgjengelig i pre-pakkede kolonner som hver inneholder en av flere hydrofobe ligander (f.eks S-butyl, butyl, octyl, og fenyl) krysskoblet ved varierende tettheter til agarose perler av en specific diameter tre. Automatisert kolonne speiding gir en effektiv tilnærming for å bestemme hvilke Hic medier bør benyttes for fremtidige, mer uttømmende optimalisering eksperimenter og proteinrensing kjører fire. Den spesifikke protein blir renset her er rekombinant grønt fluorescerende protein (GFP), men kan tilnærmingen være tilrettelagt for rensing av andre proteiner med en eller flere hydrofobe overflaten regioner. GFP fungerer som en nyttig modell protein, på grunn av sin stabilitet, unike lys absorbans topp på 397 nm, og fluorescens når det utsettes for UV-lys 5. Bakteriell lysate inneholder villtype GFP ble utarbeidet i en høy-salt buffer, lastet inn en Bio-Rad DuoFlow middels trykk væskekromatografi system, og adsorbert til HiTrap Hic kolonner som inneholder ulike Hic medier. Proteinet ble elueres fra kolonnene og analyseres av in-line og post-styrte deteksjonsmetoder. Buffer blending, dynamisk prøve sløyfe injeksjon, sekvensiell colUMN valg, multi-bølgelengde analyse, og split brøkdel eluatet samling økte funksjonaliteten i systemet og reproduserbarheten til eksperimentell tilnærming.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

En automatisert metode for å identifisere egnede hydrofobe interaksjoner kromatografi (HIC) media som skal brukes i prosessen med proteinrensing presenteres. Metoden utnytter et middels trykk væskekromatografi system inkludert automatisert buffer blending, dynamisk prøve sløyfe injeksjon, sekvensiell kolonne valg, multi-bølgelengde analyse, og split brøkdel eluatet samling.

Automatisert Hydrofobisk Samspill Kromatografi Kolonne markering for bruk i proteinrensing

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

En væskefase Affinity Capture Assay hjelp av magnetiske perler å studere protein-Protein Interaction: Den poliovirus-Nanobody Eksempel

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

En protokoll for Fag Display og Affinitetsutvelgelse Bruke rekombinante protein agn

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Identifisere Protein-protein samhandling i<em&gt; Drosophila</em&gt; Voksen Heads av Tandem Affinitetsrensing (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Identifisere Protein-protein interaksjons nettsteder Bruke Peptide Arrays

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaksjon Screening av Protein-fragment Komplemente analyse (PCA) i levende celler

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...