Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Detta arbete har finansierats av National Institutes of Health bidrag GM086822 och National Science Foundation stora forsknings instrumentering bidrag DBI-0.960.313. Författarna vill tacka Dr. Jon Miyake &amp; Donna Hardy (Bio-Rad) och Jennifer Loertscher (Seattle University) för sin tekniska kompetens. Välja kromatografi reagensen och supplementära instrumentering var generöst tillhandahållet av Bio-Rad.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

Välj kromatografi reagenser och kompletterande instrument lämnades av Bio-Rad.

Vätskekromatografi tekniker har visat sig ovärderlig för framställning av höggradigt renade proteiner som är nödvändiga för att genomföra immunologiska 6, biokemiska 7 och strukturella 8 studier. HIC reningsmetoder oftast kräver empirisk bestämning av en föredragen medium och ligandstruktur, ligandtäthet och matris bead egenskaper alla har visat sig påverka kromatografiska resultat 2, 3. Automatiserad kolumnen scouting är en effektiv metod för att välja en HIC medium för efterföljande optimering och proteinrening 4. Den automatiserade kolonn spana metod som presenteras kan lätt anpassas till olika HIC strategier proteinreningstekniker. Förändringar i saltkoncentration, val av salt, salt gradient, och pH kan ytterligare förbättra rening villkor, och effekterna av varierande dessa viktiga parametrar har tidigare granskats 13,14. HIC-eluat innehållande en partiellt renad målsubstans protei kan renas ytterligare med användning av en komplementär kromatografisk teknik, såsom jonbyteskromatografi (lEX) eller gelfiltrering / storleksuteslutningskromatografi 9,10. På grund av sin unika ljusabsorbans och egenskaper utsläpp kan elueringsprofilen för GFP kan identifieras med hjälp av in-line och efter-run metoder. För detta ändamål, kan detta protokoll vidare anpassas för rening av rekombinanta GFP-fusionsproteiner, i vilka en obesläktad målproteinet är &quot;taggade&quot; med GFP. GFP-märkta mål-proteiner kan detekteras med UV-ljus 11 och renades med hjälp av olika kromatografiska metoder, inklusive HIC rening som beskrivs ovan. GFP rening har också blivit en pedagogisk stapelvara i biokemi laboratorier för undervisning av modern teknik Protein Science 12. Medan den grundläggande HIC proteinrening kan utföras med hjälp av en betydligt mindre robust kromatografi systam har instrumentering som presenteras här ett antal distinkta fördelar för att hjälpa till att erhålla gynnsamma resultat. Noterbara fördelarna med att använda ett mycket automatiserat system inkluderar förbättrade kör-to-köra villkor reproducerbarhet tidsbesparingar och minskad möjlighet för luft att införas i systemet 10. Systemet kontrollerad buffert blandning, vilket underlättas av att systemet Maximizer, ger ökad konsistens i buffert framställning och experimentell reproducerbarhet. Ritning tillräckligt prov last i det dynamiska provslingan för alla spana löper vidare säkerställer likformighet av provet sätts till varje kolonn och medger sekventiella körningar utan avbrott eller manuell lastning. Kontrollerad prov injektion från provet slingan på kolonnen minskar variationen som kan uppstå med manuell prov belastning. Ett par ventiler kolumn val tillåta varandra följande prov körningar, var med en annan HIC-kolonn, utan att behöva replumb systemet. Utföra Mul<html> Ti-våglängd analys är särskilt fördelaktigt när analys av ett protein med en unik spektrofotometrisk profil. Förutom GFP, kan cytokromer och flavoproteins och andra heme-innehållande proteiner omfattas av denna teknik. Konduktivitet och pH övervakningsanordningar möjliggör verifiering av realtid experimentella betingelser. Split bråkdel Eluatuppsamlingen möjliggör förbättrad bråkdel hantering och möjliggör enkel överföring för post-run analysmetoder som kräver en minimal prov volym (t.ex. ELISA, SDS-PAGE, Western blot och Experion mikroflödessystem elektrofores). När du använder den andra offline fraktionsuppsamlaren kräver manuell synkronisering, gör det för maximal flexibilitet i fraktionssamlare val. De viktigaste nackdelarna att utnyttja ett sådant robust kromatografi för HIC kolonnen scouting och proteinrening omfattar den första tiden och budgetutgifter i samband med instrumentet förvärv och utbildning av operatörer. t &quot;&gt; Protokollet presenteras här använder en Bio-Rad DuoFlow kromatografi systemet,. men kan lika robust instrument från andra tillverkare, till exempel ÄKTA Avant från GE Healthcare, även tas tillvara och är kapabla att producera likvärdiga resultat även jämförbara kromatografisystemet har unika egenskaper (t.ex. metod programmering, komponenter nomenklatur, operatör företräde och skalbarhet begränsningar) som bör beaktas innan man inleder en reningsprocedur eller instrument förvärv.

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (valfri) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">Biologisk DuoFlow Pathfinder 20 System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> Innehåller systemet Maximizer, mixer, F10 arbetsstation AVR7-3 ventil QuadTec UV / Vis-detektor med flödescell, BioFrac fraktionssamlare, Biologisk programvara och startpaket </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">Avr9-8 stream-välj ventil</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> Högt tryck ventil, 9-port, 8-position, 3500 psi (233 bar) gräns för användning med biologiska DuoFlow systemet </td></tr><tr><td> Omkastare SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> 7600410 </td><td> Magnetventil, 3-port, 2-läge, 30 psi (2 bar) begränsar för användning med biologiska DuoFlow systemet </td></tr><tr><td> Stream fördelningsventilen </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>tiska = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kit </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> Glidande-kolv provslinga kit innefattar 25 ml DynaLoop glidkolv slinga, DynaLoop delar kit (# 750-0450) </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac fraktionsuppsamlare</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> Två fraktion col<html> lektorer används </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac mikroplatta droppe huvud adaptern</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac mikrotiterplatta adaptern</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>&amp; Country = US &amp; lang = sv &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">UV Optik Modul</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">Halogenlampa</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> &lt;<html> en target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo gradientpump</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> gradientpump för lågt tryck proteinrening innehåller slangar och kopplingar kit </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion System</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224.301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7.007.001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 Analys Kit</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap HIC-kolonn selektion kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> Innehåller 7 x 1 ml i förväg packade kolonner av HIC media för spana </td></tr><tr><td> GE Healthcare till Bio-Rad kolonn beslag </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 och 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

I motsats till andra kromatografiska metoder för rening av proteiner (t.ex. gelfiltrering, affinitets-och jonbyteskromatografi), kräver hydrofob interaktionskromatografi (HIC) som vanligen experimentell bestämning (hänvisad till som screening eller &quot;spana&quot;) för att välja den mest lämpliga kromatografiska mediet för rening av ett givet protein 1. Den metod som presenteras här beskriver en automatiserad metod för scouting för en optimal HIC-media kan användas vid rening av proteiner. HIC separerar proteiner och andra biomolekyler från en rått lysat baserade på skillnader i hydrofobicitet. Liknande affinitetskromatografi (AC) och jonbyteskromatografi (lEX) är HIC som kan koncentrera proteinet av intresse när det fortsätter genom det kromatografiska processen. Proteiner är bäst lämpade för rening genom HIC inkluderar de med hydrofoba ytan regioner och som kan motstå exponering för salt halter som överskrider 2 M ammonium-sulfat ((NH4) 2 SO4). HIC väljs ofta som en reningsmetod för proteiner som saknar en affinitetsmärkning, och sålunda olämpligt för växelström, och när lEX inte tillhandahåller tillräcklig rening. Hydrofoba delar på proteinytan binda temporärt till en icke-polär ligand kopplad till en inert, orörlig matris. Interaktionen mellan proteinet och liganden är starkt beroende på saltkoncentrationen i bufferten strömmar genom kromatografi kolonn med höga jonkoncentrationer som stärker protein-ligand-interaktion och att göra proteinet orörliga (dvs. bundet inuti kolonnen) 2. Såsom salt koncentrationer minskar, det protein-ligand-interaktion avleder, proteinet blir åter rörlig och eluerar från kolonnen. Flera HIC medier är kommersiellt tillgängliga i förväg packade kolonner, vardera innehållande en av flera hydrofoba ligander (t.ex. S-butyl, butyl, oktyl och fenyl) tvärbunden med varierande densiteter till agarospärlor av en spekific diametern 3. Automatiserad kolumnen scouting möjliggör en effektiv metod för att avgöra vilka HIC media bör användas för framtida, mer uttömmande optimering experiment och proteinrening kör 4. Det specifika proteinet som renas här är rekombinant grönt fluorescerande protein (GFP), dock kan det tillvägagångssätt anpassas för rening av andra proteiner med en eller flera hydrofoba ytområden. GFP fungerar som en användbar modell protein, på grund av dess stabilitet, unika Ijusabsorbans topp vid 397 nm, och fluorescens när den utsätts för UV-ljus 5. Bakterielysat innehållande vildtyp-GFP framställdes i en buffert med hög salthalt, laddas in i en Bio-Rad DuoFlow mediumtryck-vätskekromatografi-system, och adsorberades på HiTrap HIC-kolonner innehållande olika HIC medier. Proteinet eluerades från kolonnerna och analyserades genom in-line-och post-run detektionsmetoder. Buffert blandning, dynamisk Provslinga injektion, sekventiell colkolumnval selektion, för flera våglängder analys, och delad fraktion eluatet uppsamling ökade funktionaliteten hos systemet och reproducerbarheten av den experimentella tillvägagångssätt.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

En automatiserad metod för att identifiera lämpliga hydrofoba interaktionskromatografi (HIC)-media kan användas i förfarandet för proteinrening presenteras. Metoden utnyttjar en medellång trycksystem vätskekromatografi med automatiserad buffert blandning, dynamisk Provslinga injektion, sekventiell kolumnen urval, flera våglängder analys och delad bråkdel eluat samling.

Automatiserad Hydrofob Interaktion kromatografikolonn val för användning i Protein Purification

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Färgning av proteinerna i geler med Coomassie G-250 utan organiska lösningsmedel och ättiksyra

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Rening av M. magneticum Sila AMB-1 Magnetosome Medverkande Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescens komplement (BiFC) analys av protein-protein interaktion i lök celler med Helios Gene Gun

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Blås-medierad affinitetskromatografi med magnetkamera Aktivt cellsortering (LIMACS): en ny metod för att analysera protein-lipid Interaktion

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Rening av Hsp104, ett protein Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

En vätskefas affinitetsinfångning Analys med användning av magnetiska pärlor för att studera protein-proteininteraktion: polioviruset-Nanobody Exempel

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

Ett protokoll för Fag Display och Affinity val med rekombinanta protein Beten

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Identifiera protein-proteininteraktion i<em&gt; Drosophila</em&gt; Vuxen Heads av Tandem Affinity Purification (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Identifiera protein-proteininteraktion webbplatser Använda peptid Arrays

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

Genomvid Protein-proteininteraktion Screening av Protein-fragment kompletteringsanalys (PCA) i levande celler

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...