Name: automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification
Uploaded: 2011-09-21T13:00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Bu çalışma Sağlık hibe GM086822 ve Ulusal Bilim Vakfı başlıca araştırma enstrümantasyon hibe DBI-0.960.313 Ulusal Enstitüsü tarafından finanse edildi. Yazarlar Dr teşekkür etmek istiyorum. Jon Miyake ve Donna Hardy (Bio-Rad) ve teknik uzmanlık için Jennifer Loertscher (Seattle). Kromatografisi reaktifler seçin ve tamamlayıcı enstrümantasyon cömertçe Bio-Rad tarafından sağlanmıştır.

<ol>
	<li>Cummins, P. M., O'Connor, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography.">Hydrophobic interaction chromatography.</a> Methods Mol. Biol. 681, 431-437 (2011).</li><li>Nagrath, D., Xia, F., Cramer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+modeling+of+nonlinear+hydrophobic+interaction+chromatographic+systems.">Characterization and modeling of nonlinear hydrophobic interaction chromatographic systems.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 1219-1226 (2011).</li><li>To, B. C., Lenhoff, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.+IV.+Protein+adsorption+capacity+and+transport+in+preparative+mode.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins. IV. Protein adsorption capacity and transport in preparative mode.</a> J. Chromatogr. A. 1218, 427-440 (2011).</li><li>Huddleston, J. G., Wang, R., Lyddiatt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+mild+hydrophobic+interaction+chromatography+for+"method+scouting"+protein+purification+strategies+in+aqueous+two-phase+systems:+a+study+using+model+proteins.">On the use of mild hydrophobic interaction chromatography for "method scouting" protein purification strategies in aqueous two-phase systems: a study using model proteins.</a> Biotechnol Bioeng. 44, 626-635 (1994).</li><li>Arun, K. H., Kaul, C. L., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+proteins+in+receptor+research:+an+emerging+tool+for+drug+discovery.">Green fluorescent proteins in receptor research: an emerging tool for drug discovery.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 51, 1-23 (2005).</li><li>Terrizzi, S. C., Banh, C., Brossay, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.A+Protocol+for+the+Production+of+KLRG1+Tetramer.">L.A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer.</a> J. Vis. Exp. (35), e1701-e1701 (2010).</li><li>Murphy, P. J. M., Morishima, Y., Kovacs, J. J., Yao, T. P., Pratt, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+dynamics+of+hsp90+action+on+the+glucocorticoid+receptor+by+acetylation/deacetylation+of+the+chaperone.">Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.</a> J. Biol. Chem. 280, 33792-33799 (2005).</li><li>Zeytuni, N., Zarivach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+M.+magneticum+strain+AMB-1+Magnetosome+Associated+Protein+MamA&#916;41.">Purification of the M. magneticum strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&#916;41.</a> J. Vis. Exp. (37), 10-3791 (2010).</li><li>Kong, Y., Li, X., Bai, G., Ma, G., Su, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automatic+system+for+multidimensional+integrated+protein+chromatography.">An automatic system for multidimensional integrated protein chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 6898-6904 (2010).</li><li>Camper, D. V., Viola, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+protein+purification.">Fully automated protein purification.</a> Anal. Biochem. 393, 176-181 (2009).</li><li>Hammon, J., Palanivelu, D. V., Chen, J., Patel, C., Minor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+screen+for+identification+of+well-expressed+membrane+proteins+from+a+cohort+of+extremophilic+organisms.">A green fluorescent protein screen for identification of well-expressed membrane proteins from a cohort of extremophilic organisms.</a> Protein Sci. 18, 121-133 (2009).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+green+and+red+fluorescent+proteins+to+teach+protein+expression,+purification,+and+crystallization.">Using green and red fluorescent proteins to teach protein expression, purification, and crystallization.</a> Biochem. Mol. Biol. Educ. 36, 43-54 (2008).</li><li>Queiroz, J. A., Tomaz, C. T., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+interaction+chromatography+of+proteins.">Hydrophobic interaction chromatography of proteins.</a> J. Biotechnol. 87, 143-159 (2001).</li><li>McCue, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+and+use+of+hydrophobic+interaction+chromatography+in+protein+purification+applications.">Theory and use of hydrophobic interaction chromatography in protein purification applications.</a> Methods Enzymol. 463, 405-414 (2009).</li></ol>

Kromatografisi reaktifler seçin ve tamamlayıcı enstrümantasyon Bio-Rad tarafından sağlanmıştır.

Sıvı kromatografi teknikleri 7 biyokimyasal, immünolojik 6 yürütülmesi için gerekli olan yüksek derecede saflaştırılmış protein hazırlanması, ve yapısal 8 çalışmalar için çok değerli olduğu kanıtlanmıştır. HIC saflaştırma yöntemleri çoğunlukla tercih edilen ortamın ampirik belirlenmesi gerekir, ve ligand yapısı, ligand yoğunluğu, ve matris boncuk özellikleri her kromatografik sonuçlar 2, 3 etkisi gösterilmiştir. Izcilik Otomatik sütun sonraki optimizasyonu ve protein saflaştırma 4 için bir HIC orta seçilmesi için etkili bir yaklaşımdır. Sunulan otomatik sütun izcilik yöntemi kolaylıkla çeşitli HIC protein saflaştırma stratejileri adapte edilebilir. Tuz konsantrasyonu, tuz seçimi, tuz degrade ve pH değişiklikler ilave arıtma hastalıkları iyileştirebilir ve bu temel parametreleri değişen etkileri daha önce 13,14 gözden geçirilmiştir. Kısmen saflaştırılmış hedef prote içeren HIC eluatdaha da bu tür iyon değişimi kromatografisi (IEX) veya jel filtrasyonu / boyut harici kromatografi 9,10 olarak tamamlayıcı bir kromatografik tekniği kullanılarak saflaştırılabilir. Çünkü eşsiz ışık absorbans ve emisyon karakteristikleri, GFP ile elüsyon profiline-line ve post-çalıştırma yaklaşımlar kullanılarak belirlenebilir. Bu amaçla, bu protokol daha da alakasız bir hedef protein GFP &quot;tagged&quot; olduğu, rekombinant GFP-füzyon proteinlerinin saflaştırılması için adapte edilebilir. GFP-etiketli hedef proteinin UV ışığı 11 ve yukarıda açıklanan HIC saflaştırma stratejisini içeren çeşitli kromatografik yaklaşımlar kullanılarak saflaştırıldı ile tespit edilebilir. GFP arıtma aynı zamanda modern protein bilimi teknikleri 12 öğretimi için biyokimya laboratuvarlarında pedagojik bir elyaf haline gelmiştir. Temel HIC protein saflaştırılması bir ölçüde daha az sağlam kromatografisi sy kullanarak yürütülebilirkenKök, burada sunulan enstrümantasyon olumlu sonuçlar elde yardımcı olmak için farklı bir takım avantajları vardır. Son derece otomatik bir sistem kullanmanın önemli yararları çalıştırmak çalıştırılmaya koşulu tekrarlanabilirlik, zaman tasarrufu da geliştirilmiş ve sistem 10 içine verilmek üzere hava için fırsatlar azalma sayılabilir. Sistem arttıran kolaylaştırılır Sistemi kontrollü tampon karıştırma, tampon hazırlanması ve deneysel tekrarlanabilirlik artan tutarlılık sağlar. Tüm izcilik için dinamik örnek döngü içine yeterince örnek yük Çizim çalışan başka her sütun eklenmeden örnek uyum sağlar ve kesinti veya yeniden manuel olarak sıralı çalışmaları için izin verir. Sütun üzerine örnek loop kontrollü numune enjeksiyonu el ile örnek yükleme ile oluşabilir değişkenliği azalır. Sütun seçimi valf bir çift sistemi replumb gerek kalmadan, ardışık Örnek ishal, farklı bir HIC kolonu kullanılarak her biri için olanak sağlar. Mul Sahne<html> eşsiz bir spektrofotometrik profil ile bir protein test edilmesinden sonra ti-dalgaboyu analizi özellikle faydalı olmaktadır. GFP ek olarak, sitokromlar, flavoproteins, ve diğer heme ihtiva eden proteinler Bu tekniğin yararlanabilir. İletkenlik ve pH izleme cihazları gerçek zamanlı deneysel koşullar doğrulanması için izin verir. Bölünmüş fraksiyonu eluat toplama geliştirilmiş fraksiyonu bir şekilde kullanılmasını sağlar ve minimal bir örnek hacmi (örneğin ELISA, SDS-PAGE, western blot ve Experion mikroakışkan elektroforezi) gerektiren post-run analiz yöntemleri için kolay aktarım sağlar. Ikinci fraksiyon toplayıcı çevrimdışı kullanma kılavuzu senkronizasyon gerektirir iken, fraksiyon toplayıcı seçimi maksimum esneklik sağlar. HIC izcilik sütun ve protein saflaştırma için böyle sağlam bir kromatografi sistemi kullanan için en önemli sakıncaları başlangıç ​​zamanı ve aracı satın alma ve operatör eğitimi ile ilgili bütçe harcamaları içerir. t &quot;&gt; Burada sunulan protokolü Bio-Rad Çift Geçişli kromatografi sistemi kullanır;. Ancak, bu tür GE Healthcare gelen Akta Avant diğer üreticilerin, eşit derecede sağlam enstrümantasyon da olabilir kullanıldığı ve eşdeğer sonuçlar üretmektedir bile karşılaştırılabilir kromatografi sistemi bir arınma prosedürü veya cihaz satın başlamadan önce düşünülmelidir benzersiz özellikleri (örneğin yöntemi programlama, bileşen adlandırma, operatör tercihi ve ölçeklenebilirlik sınırlamalar) var.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">Biyolojik Çift Geçişli Pathfinder 20 Sistemi</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=223301" target="_blank">7602257</a> </td><td> Sistemi arttırıcı, mikser, F10 iş istasyonu, AVR7-3 valf, QuadTec UV / akış hücresi, BioFrac fraksiyon toplayıcı, biyolojik yazılımı ile Vis dedektör ve başlangıç ​​kiti içerir </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">AVR9-8 akışı seçin valf</a><html></td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-0408&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7600408</a> </td><td> Biyolojik Çift Geçişli sistemi ile kullanım için yüksek basınç vana, 9-port, 8-konumunda, 3500 psi (233 bar) sınırı, </td></tr><tr><td> Yönlendirici vana SV3T-2 </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> 7600410 </td><td> Biyolojik Çift Geçişli sistemi ile kullanım için selenoid vana, 3 yollu, 2 konumlu, 30 psi (2 bar) sınırı, </td></tr><tr><td> Akış ayrıştırıcı vana </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tical = LSR &amp; parentCategoryGUID = 22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; DynaLoop 25 Kiti </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0451&vertical=LSR&parentCategoryGUID=22c495f1-36ff-44a3-9140-ee7e54d0b1ba" target="_blank">7500451</a> </td><td> Örnek döngü kiti Sürme-piston, döngü sürgülü 25 ml DynaLoop, DynaLoop parça kiti (# 750-0450) içerir </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">BioFrac Kesir Collector</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e/BioFractrade_Fraction_Collector" target="_blank">7410002</a> </td><td> İki fraksiyon col<html> lectors kullanılan </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">BioFrac mikroplak damla kafa adaptörü</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=741-0088&vertical=LSR&parentCategoryGUID=ec82e7b4-919e-428b-ac03-9adf1f50a48e" target="_blank">7410088</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&vertical=LSR&country=US&lang=en&productID=741-0017" target="_blank">BioFrac mikrotitre plakası adaptörü</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>&amp; Country = ABD &amp; lang = tr &amp; ProductID = 741-0017 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7410017 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">UV Optik Modülü</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=750-0202&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c140016b-1958-4a91-be4c-8645a4c8204f" target="_blank">7500202</a> </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=catProductDetail&isFromSearch=true&productID=760-1331&vertical=LSR&parentCategoryGUID=c4095dc1-9260-4431-b066-823b050048c8" target="_blank">Halojen lamba</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> &lt;<html> Bir target = &quot;_blank&quot;&gt; 7601331 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">Econo Gradient Pompası</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=220901" target="_blank">7319001</a> </td><td> düşük basınçlı protein saflaştırılması için gradient pompa, boru ve bağlantı parçaları kiti içerir </td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224301" target="_blank">Experion Sistemi</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td>bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad? cmd = BRCatgProductDetail &amp; ProductID = 224301 &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; 7.007.001 </td><td></td></tr><tr><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">Experion Pro260 Analiz Kiti</a> </td><td> <a href="http://www.bio-rad.com/" target="_blank">Bio-Rad</a> </td><td> <a href="https://www.bio-rad.com/prd/en/US/adirect/biorad?cmd=BRCatgProductDetail&productID=224101" target="_blank">7007102</a> </td><td></td></tr><tr><td> HiTrap HIC sütun seçimi kiti </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-4110-07 </td><td> Izcilik için HIC medyanın 7 x 1 ml kullanıma hazır sütunlar içerir </td></tr><tr><td> GE Healthcare-to-Bio-Rad sütun parçaları </td><td> GE Healthcare </td><td> 18111251 ve 18111257 </td><td></td></tr></tbody></table>

automated hydrophobic interaction chromatography column selection for use in protein purification

Temizleyici proteinleri (örneğin, jel filtrasyonu, afinite, ve iyon değişimi) için diğer kromatografik metodlar aksine, hidrofobik etkileşim kromatografısi (HIC) yaygın olarak en uygun kromatografik orta seçmek için deneysel tayini (tarama ya da &quot;izcilik&quot; olarak anılacaktır) gerektirir Verilen bir proteinin saflaştırılması için 1. Burada anlatılan yöntem proteinin saflaştırılması kullanılmak üzere en uygun HIC ortam için izcilik için otomatik bir yaklaşımı tarif eder. HIC hidrofobiklik farklılıklara bağlı olarak bir ham lizat proteinleri ve diğer biyomoleküllerin ayırır. Afinite kromatografisi (AC) ve iyon değişimi kromatografisi (IEX) benzer şekilde, bu HIC kromatografi işlemi boyunca ilerlerken ilgili proteini konsantre yeteneğine sahiptir. Iyi HIC tarafından arıtma için uygundur Proteinler hidrofobik yüzey bölgeler ve 2 M cephane aşan konsantrasyonlarda tuz maruz dayanabilmesi olanlar dahilNeodinyum sülfat ((NH4) 2 SO4). HIC genellikle bir yakınlık etiketi eksik proteinler için bir arınma yöntemi olarak seçilmiş, ve AC için böylece uygun ve IEX yeterli arıtma sağlamak için başarısız olduğunda edilir. Proteininin yüzeyde hidrofobik yarımlar geçici bir inert, hareketsiz matris şekilde bağlanmış bir polar olmayan ligant bağlama. Protein ve ligand arasındaki etkileşimi protein-ligand etkileşimi güçlendirmek ve hareketsiz protein (yani sütun içindeki bağlı) 2 yaparak yüksek iyonik konsantrasyonları, kromatografi sütunu akan tampon tuz konsantrasyonu son derece bağımlıdırlar. Tuz konsantrasyonu düşüş olarak, protein-ligand etkileşimi dağıtır, protein tekrar sütundan mobil ve elutes hale gelir. Çeşitli HIC ortam önceden paketlenmiş kolon, ticari olarak mevcuttur, birkaç hidrofobik ligandları (örn. oktil S-butil, butil, ve fenil) her birinin içeren bir spec agaroz boncukları üzere yoğunlukları değişen çapraz-bağlantılıIFIC çapı 3. Izcilik Otomatik sütun HIC medyanın geleceği, daha ayrıntılı bir optimizasyon denemeleri için istihdam ve protein saflaştırma 4 çalışır gereken belirlemek için etkin bir yaklaşım getirmektedir. Burada saflaştırılmış olan özel protein rekombinant yeşil flöresanlı protein (GFP) &#39;dir, ancak bir yaklaşım, bir veya daha fazla hidrofobik yüzey bölgeleri ile diğer proteinleri saflaştırılması için adapte edilmiş olabilir. GFP UV ışığı 5 maruz kaldığında kendi istikrar, 397 nm&#39;de benzersiz ışık absorbansı tepe, ve floresan nedeniyle yararlı bir model protein olarak hizmet vermektedir. Wild tip GFP içeren bakteri lisatı, yüksek tuz tamponu içinde hazırlanan bir Bio-Rad Çift Geçişli orta basınçlı sıvı kromatografisi sisteme yüklenir ve farklı bir ortam ihtiva HIC HiTrap HIC kolonlara adsorbe edildi. Protein kolonlardan elüt ve in-line ve post-çalıştırma tespit yöntemleri ile analiz edildi. Tampon karıştırma, dinamik örnek döngü enjeksiyon, sıralı colUMN seçimi, çoklu dalga boyu analizi, ve iki fraksiyon eluat toplama deneysel yaklaşımın sistemi ve çoğaltılabilirlik işlevselliği artmıştır.

Watch this Scientific Journal Video about Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification at JoVE.com

Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

Proteinin saflaştırılması işleminde kullanılmak üzere uygun hidrofobik etkileşim kromatografısi (HIC) ortam tanımlanması için otomatik bir yöntem sunulmaktadır. Otomatik bir yöntem tampon karışım, dinamik bir örnek enjeksiyon döngüsü, ardışık sütun seçimi, çoklu dalga boyu analizi, ve iki fraksiyon eluat toplama dahil olmak üzere, orta basınçlı sıvı kromatografisi sistemi kullanır.

Protein Saflaştırma Kullanım için Otomatik Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi Sütun Seçimi

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Organik Solvent ve Asetik Asit olmadan Jeller Coomassie G-250 ile Proteinlerin Boyama

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Saflaştırılması M. magneticum Deformasyon AMB-1 Magnetosome İlişkili Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Helios Gen Tabancası kullanarak Soğan Hücrelerde Protein-Protein Etkileşimi Bimoleküler Floresan tamamlama (BiFC) Testi

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Manyetik Aktif Hücre Ayırma (LIMACS) kullanarak Lipid veziküllü aracılı Afinite Kromatografisi: Protein-lipit Etkileşim Analiz Roman Yöntemi

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Hsp104 saflaştırılması, Protein Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Protein-Protein Etkileşimi Okumak Manyetik Boncuk Kullanarak Bir Sıvı Faz Affinity Yakalama Testi: Poliovirüs-Nanobody Örnek

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

Rekombinant Protein Yemler Kullanarak Phage Ekran ve Affinity seçimi için Protokol

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Protein-protein etkileşimi belirlenmesi<em&gt; Drosophila</emTandem Affinity Arıtma tarafından&gt; Adult Başlar (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Peptit Diziler protein-protein etkileşim Siteleri belirlenmesi

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

Yaşayan Hücrelerde Protein-fragmanı tamamlama Assay (PCA) ile genom Protein-protein etkileşimi Eleme

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...