Name: aseptic laboratory techniques: plating methods
Uploaded: 2012-05-11T12:00:00
Duration: 18 min
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> شكر خاص لساندرز كوري في تصاميم IROC لإعداد الرسوم التوضيحية وكريس Reddi وBhairav ​​شاه في جامعة كاليفورنيا لإنشاء نموذج الثقافات ومساعدة وأرقام. وقدمت التمويل لهذا المشروع من قبل HHMI (HHMI منحة رقم 52006944). </p>

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>At the Bench: A Laboratory Navigator</em>. , (1998).</li><li>US Department of Health and Human Services (DHHS). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</em>. , (2009).</li><li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique.">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> <em style='font-style: italic'>Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol</em>. <b>18</b>, 273-279 (1953).</li><li>Fields, B. N., Knipe, D. M., Chanock, R. M., Hirsch, M. S., Melnick, J. L., Monath, T. P., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Fields Virology</em>. <b>1</b>, (1991).</li><li>Gilbert, R. A., Ouwerkerk, D., Zhang, L. H., Klieve, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+Research+Center+for+Beef+Genetic+Technologies.+In+vitro+detection+and+primary+cultivation+of+bacteria+producing+materials+inhibitory+to+ruminal+methanogens.">Cooperative Research Center for Beef Genetic Technologies. In vitro detection and primary cultivation of bacteria producing materials inhibitory to ruminal methanogens.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Microbiological Methods</em>. <b>80</b>, 217-218 (2010).</li><li>Jett, B. D., Hatter, K. L., Huycke, M. M., Gilmore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+agar+plate+method+for+quantifying+viable+bacteria.">Simplified agar plate method for quantifying viable bacteria.</a> <em style='font-style: italic'>BioTechniques</em>. <b>23</b>, 648-650 (1997).</li><li>Karam, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Molecular Biology of Bacteriophage T4</em>. , (1994).</li><li>Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A., Roizman, B., Straus, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Fundamental Virology</em>. , (2001).</li><li>Lederberg, J., Lederberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replica+plating+and+indirect+selection+of+bacterial+mutants.">Replica plating and indirect selection of bacterial mutants.</a> <em style='font-style: italic'>J. Bacteriol</em>. <b>63</b>, 399-406 (1952).</li><li>Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>A Short Course in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and related bacteria</em>. , (1992).</li><li>Mills, K. V., Gareau, J. R., Garcia, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-cost+modification+to+the+Copacabana+method+for+spreading+transformation+mixtures.">Low-cost modification to the Copacabana method for spreading transformation mixtures.</a> <em style='font-style: italic'>BioTechniques</em>. <b>39</b>, 188 (2005).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</em>. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Molecular Cloning - A Laboratory Manual</em>. , (2001).</li><li>Sanders, E. R., Miller, J. H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Microbiologist: A Discovery-based Course in Microbial Ecology and Molecular Evolution</em>. , (2010).</li><li>Slonczewski, J. L., Foster, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Microbiology - An Evolving Science</em>. , (2011).</li><li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Congo+Red-Polysaccharide+Interactions+in+Enumeration+and+Characterization+of+Cellulolytic+Bacteria+from+the+Bovine+Rumen.">Use of Congo Red-Polysaccharide Interactions in Enumeration and Characterization of Cellulolytic Bacteria from the Bovine Rumen.</a> <em style='font-style: italic'>Applied and Environmental Microbiology</em>. <b>43</b>, 777-780 (1982).</li><li>Wise, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Preparing Spread Plates Protocols</em>. , (2006).</li><li>Worthington, M., Luo, R. Q., Pelo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copacabana+method+for+spreading+E.+coli+and+yeast+colonies.">Copacabana method for spreading E. coli and yeast colonies.</a> <em style='font-style: italic'>BioTechniques</em>. <b>30</b>, 738-742 (2001).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> الكائنات الدقيقة زراعة ينطوي على عدد من الطرق والطلاء، والتي تتطلب أن يتم الحفاظ تقنية العقيم طوال التلاعب من الخلايا وسائل الإعلام. وصفت خمسة إجراءات مختلفة في هذا البروتوكول. على الرغم من أن تستخدم هذه التقنيات بشكل روتيني الطلاء لمعالجة البكتيريا وبالعاثية، فإنها يمكن أيضا أن تطبق على ثقافة خلايا الثدييات والكائنات الدقيقة حقيقية النواة التي تستخدم عادة في علم الوراثة الجزيئية مثل الخميرة (أي <em>خميرة الخباز، المبيضات البيض، السكيراء pombe)،</em> والطحالب والبروتوزوا ( أي <em>Volvox، المتلحفة، الأميبا، المتناعلة)،</em> والديدان الخيطية (أي <em>Caenorhabditis ايليجانس).</em> هناك أيضا العديد من (وحتى أكثر تعقيدا) أشكال مختلفة من الطلاء كل أسلوب اعتمادا على الهدف التجريبية أو الكائن قيد الدراسة. وبالتالي، فمن المهم أن لا فقط تحديد الأسلوب الأكثر ملائمة لتجربة الكائنات الحية الدقيقة أو هدف معين ولكن أيضا لتكييف هذه المنهجية رقبعة نتائج تجريبية معالجة مناسبة على سؤال البحث أو المشكلة. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> بعض من أكثر التطبيقات الحالية للتقنيات الطلاء التي تمت مناقشتها في هذا البروتوكول ينطوي التقدم التكنولوجي الذي تحقق الإنتاجية العالية للنتائج التجارب اكتشاف الفحص والمخدرات. على سبيل المثال، استخدام تسلسل الجينوم مراكز &quot;أسلوب كوباكابانا&quot; لمكتبات استنساخ انتشار الطلاء، والتي هي <em>E.</em> تحول الخلايا <em>القولونية</em> مع البلازميدات تحتوي على شظايا الحمض النووي المستمدة من الجينوم من الكائنات الحية الدقيقة. لأن يتم إعداد العشرات من لوحات كبيرة (وتسمى الصواني الأحيائي) في آن واحد، يتم استخدام لوحة شاكر الآلي لزعزعة الخرز الزجاجي للدفعة كاملة من الصواني. وعلاوة على ذلك، عند اختيار المستعمرات من هذه اللوحات بعد الحضانة، يتم استخدام منتقي مستعمرة الروبوتية لجمع الخلايا من المستعمرات حسب الاقتضاء على اللقاح للمرق LB في 384 جيدا microplates. لهذا الفحص الفرز الفائق الإنتاجية، ومبادئ الإجرائية للانتشار فتقنية أواخر تطبيق التكنولوجيا ولكن يسمح أن تتم بشكل مختلف الخطوات وتوسيع نطاقها للسماح لعدد كبير من العينات لتحليلها في وقت واحد وضمن فترة زمنية قصيرة. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> التكنولوجيا الحيوية وشركات الأدوية استثمار موارد كبيرة في تطوير تكنولوجيا عالية الإنتاجية لأكثر التقنيات الأساسية في علم الأحياء المجهرية وعلم الوراثة الجزيئي. على سبيل المثال، هناك متعدد القنوات micropipettors لأداء عمليات نقل الصوت ليصل إلى 8 أو 12 عينة في وقت واحد. بل هناك محطات العمل الروبوتية التي مناورة رئيس ماصة 96-قناة! وتشمل هذه الجهود فرق متعددة التخصصات من العلماء، علماء الأحياء الاقتران التي تمتلك الخبرة المنهجية مع المهندسين ومبرمجي الكمبيوتر الذين يمكن تطوير الأجهزة اللازمة لتنفيذ العمليات الميكانيكية المرتبطة التجارب. بغض النظر عن التطبيق البحوث، والهدف المشترك من قبل شركات تطوير هذه التكنولوجيات هو نفسه - لأتمتة laboratoعمليات راي والأدوات والنظم والأدوات، مما يجعلها أقل كثافة اليد العاملة وأكثر كفاءة. </p>

<p class="jove_step">1. Yeast Tryptone Agar (YTA)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">If preparing tubes for the pour-plate procedure, allow the agar to cool to ~55&deg;C then add 2.0 ml of 50 mg/ml cycloheximide. Aseptically dispense 18.0 ml of the melted agar per 18 mm tube then store at 4&deg;C. The agar will solidify and will need to be melted in a steamer or microwave prior to use.</p>
<p class="jove_step">2. Minimal Salts Agar (MSA) + 0.1% (w/v) carbon source</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.14 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>1.09 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>0.2 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon source*</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trace salts solution**</td>
			<td>10.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">* Carbon sources used for experiments presented in <strong>Figure 13</strong> include acetamide, lactose, and glycine.</p>
<p class="jove_content">** Trace salts solution is prepared in 0.1 N HCl as follows. It is added to the base before sterilization (autoclave at 121&deg;C for 20 minutes).</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>300.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>180.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>130.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>40.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>20.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>1.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>1000.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (0.1 N)</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">3. EHA soft agar (0.65 % w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>6.5 g</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">4. EHA hard agar (1.2% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>12.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">5. 1X Middlebrook Top Agar (MBTA soft agar, 0.5% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mM CaCl<sub>2</sub> stock*</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 liquid medium: <em>Neat </em>**</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2XTA ***</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Melt 50 ml of 2XTA and allow it to cool to ~55&deg;C. Using aseptic technique, add the CaCl<sub>2</sub> and 7H9 broth to the melted agar. Aseptically dispense 4.5 ml of the mixture per 13 mm tube and store in a 55&deg;C incubator &le;7 days. Cooling MBTA to room temperature or 4&deg;C will cause the CaCl<sub>2</sub> to precipitate out of solution.</p>
<p class="jove_content">* 100 mM CaCl<sub>2</sub>. stock must be stored at room temperature to prevent CaCl<sub>2</sub> from precipitating out of solution.</p>
<p class="jove_content">** 7H9 liquid medium: Neat</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 900.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the base with water then add the glycerol while stirring. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">*** 2X Middlebrook Top Agar (2XTA, 1.0% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Dispense 50 ml aliquots into 100 ml bottles and store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">6. Middlebrook 7H10 Agar Plates (MHA hard agar, 1.9% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>19.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>12.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>887.5 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the agar base with water then add the glycerol while stirring. Heat the solution to boiling then stir for one minute to completely dissolve the base powder. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add the following reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AD supplement (pre-warmed to 37&deg;C)*</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mg/ml Carbenicillin **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mg/ml Cycloheximide **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">* AD supplement</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NaCl &gt;</td>
			<td>17 g &gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)&gt;</td>
			<td>100 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (<em>D</em>-Glucose)&gt;</td>
			<td>40 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water&gt;</td>
			<td>up to 2000.0 ml&gt;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Filter-sterilize this solution; do not autoclave. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">** Filter-sterilize and store these solutions at 4&deg;C for &le;60 days.</p>
<p class="jove_step">7. LB agar (1.5% w/v) + X-Gal (60 &mu;g/ml)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>5.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.5 at 25&deg;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add 3.0 ml of 20 mg/ml X-Gal solution. Freshly prepare X-gal stock by dissolving 400 mg X-Gal in 20 ml dimethylformamide (DMF).</p>
<p class="jove_step">Table of specific reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of the reagent</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>212750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>211705</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>214030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>123340010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30435</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 303-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A-0500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>L6-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-3634</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230375</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z4750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>213621000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>209198</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cycloheximide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>038K1561</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>46-100-RG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S271-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S279-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (Dextrose)</td>
			<td>BD</td>
			<td>215530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>BD</td>
			<td>271310</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>BD</td>
			<td>262710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Shelton</td>
			<td>IB15760</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S71907</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&beta;-D-galactopyranoside)</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>X1205</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4551</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CDA19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorine Bleach</td>
			<td>Chlorox</td>
			<td>02490/06644884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CiDecon (disinfectant)</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc.</td>
			<td>8504</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">Table of specific equipment:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of equipment</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
			<td><strong>Experiment</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal loops</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S17352</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic loops</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wooden sticks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-400-104</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat Toothpicks</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S67859</td>
			<td>Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turn tables</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-758Q</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass rods</td>
			<td>Bellco Glass</td>
			<td>NC9004380</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm glass beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-312B</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Velveteen cloth</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-2</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cylindrical block</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-1</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aseptic laboratory techniques: plating methods

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> الكائنات الدقيقة موجودة على كل الأسطح الجامدة خلق مصادر التلوث في كل مكان ممكن في المختبر. النجاح يعتمد على التجارب قدرة لتعقيم الأسطح عالم العمل والمعدات، فضلا عن منع الاتصال من الأدوات المعقمة والحلول مع الأسطح غير معقمة. هنا نقدم الخطوات لأساليب الطلاء عدة تستخدم بشكل روتيني في المختبر لعزل، نشر، أو الكائنات الحية الدقيقة تعداد مثل البكتيريا وبالعاثية. جميع الطرق الخمسة دمج تقنية العقيم، أو الإجراءات التي تحافظ على عقم المواد التجريبية. وتشمل الإجراءات المذكورة (1) خط الطلاء الثقافات البكتيرية لعزل المستعمرات واحد، (2) صب الطلاء و (3) انتشار الطلاء تعداد المستعمرات البكتيرية قابلة للحياة، (4) لينة التراكبات أجار لعزل بالعاثية و لويحات تعداد، و( 5) طبق الطلاء لنقل الخلايا من لوحة واحدة إلى آخر في نمط والمكاني متطابقة. لا يمكن أن يؤديها في هذه الإجراءات رشريطة أن مقاعد البدلاء المختبر، أنها تنطوي على غير المسببة للأمراض سلالات من الكائنات الحية الدقيقة (السلامة الأحيائية المستوى 1، BSL-1). إذا كان يعمل مع BSL-2 الكائنات، ثم يجب أن تكون هذه المناورات تجري في خزانة السلامة الأحيائية. الرجوع إلى الطبعة الأحدث من <em>السلامة في المختبرات الميكروبيولوجية والطبية الحيوية</em> (BMBL)، وكذلك <em>صفائح بيانات سلامة المواد</em> (MSDS) بالنسبة للمواد المعدية لتحديد تصنيف بيولوجية فضلا عن احتياطات السلامة والتسهيلات اللازمة لاحتواء الكائن الدقيق في السؤال. ويمكن الحصول على سلالات بكتيرية والأرصدة بالعاثية من المحققين البحوث والشركات والمجموعات التي تحتفظ بها منظمات معينة مثل <em>مجموعة نوع الثقافة الأمريكية</em> (ATCC). فمن المستحسن أن يتم استخدام سلالات غير ممرضة عندما تعلم أساليب الطلاء المختلفة. عن طريق اتباع الإجراءات المذكورة في هذا البروتوكول، يجب أن يكون الطلاب قادرين على: </p><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عمليات الطلاء دون contaminatiوسائل الإعلام نانوغرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل المستعمرات البكتيرية واحدة من خلال طريقة خط الطلاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام أساليب صب الطلاء والطلاء انتشار لتحديد تركيز البكتيريا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء تراكب أجار لينة عند العمل مع بالعاثية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا البكتيرية من لوح واحد إلى آخر باستخدام الإجراء طبق الطلاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نظرا مهمة تجريبية، حدد طريقة الطلاء المناسب. </li></ul></p>

Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods at JoVE.com

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

<p class="jove_content">عند العمل مع وسائل الإعلام والكواشف المستخدمة في الكائنات الحية الدقيقة الثقافة، يجب أن تمارس أسلوب العقيم لضمان أن يتم التقليل من التلوث. وتستخدم بشكل روتيني مجموعة متنوعة من الأساليب لعزل الطلاء، نشر، أو البكتيريا تعداد وبالعاثية، والتي تتضمن الإجراءات التي تحافظ على عقم المواد التجريبية.</p>

مختبر تقنيات العقيم: طرق تصفيح

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

المجتمعات الميكروبية في الطبيعة ومختبر -- مقابلة

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

مختبر تقنيات العقيم: التحويلات الحجم مع الماصات المصلية وMicropipettors

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

الأمثل أساليب النمذجة وتلوين لرصد انتشار استخدام الأصباغ انقسام الخلية خلية تتبع

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

تقنيات لتحليل خارج الخلية الحويصلات عن طريق التدفق الخلوي

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Cultivation of <em>Caenorhabditis elegans</em> in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

زراعة<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; في ثلاثة أبعاد في المختبر

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

تقنيات للحث وتحديد الخلوي الشيخوخة

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly <em>Bemisia tabaci</em>

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

طرق استخراج إندوسيمبيونتس من الذبابة البيضاء<em&gt; بيميسيا تاباسي</em

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

إدارة بسيطة وفعالة والتصور من المجهرية الدقيقة في الدورة الدموية للأسماك الصغيرة باستخدام الحقن الكلي

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

تقنيات خزعة البقري الغدة الثديية

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

العزلة ، تنقيه ، والتمايز من السلائف العظمية من نخاع العظم الفئران

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or ...