Name: aseptic laboratory techniques: plating methods
Uploaded: 2012-05-11T12:00:00
Duration: 18 min
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<p class="jove_content"> Un merci spécial à Cori Sanders aux conceptions IROC pour la préparation des illustrations et de Kris Reddi et Bhairav ​​Shah à l&#39;UCLA pour la mise en place des cultures d&#39;échantillons et d&#39;aider avec les chiffres. Le financement de ce projet a été fourni par HHMI (HHMI Grant n ° 52006944). </p>

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>At the Bench: A Laboratory Navigator</em>. , (1998).</li><li>US Department of Health and Human Services (DHHS). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</em>. , (2009).</li><li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique.">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> <em style='font-style: italic'>Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol</em>. <b>18</b>, 273-279 (1953).</li><li>Fields, B. 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<p class="jove_content"> Je n&#39;ai rien à communiquer. </p>

<p class="jove_content"> Culture de microorganismes implique un certain nombre de méthodes de revêtement, qui exigent tous des conditions d&#39;asepsie que soit maintenue pendant toute la manipulation de cellules et les médias. Cinq procédures différentes ont été décrites dans le présent protocole. Bien que ces techniques de placage sont couramment utilisés pour manipuler les bactéries et les bactériophages, ils peuvent aussi être appliquée à la culture de cellules de mammifères et de micro-organismes eucaryotes couramment utilisé en génétique moléculaire comme la levure <em>(c.-à-Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Schizosaccharomyces pombe),</em> les algues et les protozoaires ( <em>c.-à-Volvox, Chlamydomonas, Amoeba, la paramécie),</em> et les nématodes <em>(c.-à-Caenorhabditis elegans).</em> Il ya aussi de nombreux (et encore plus sophistiquée) des variations de chaque procédé de placage selon l&#39;objectif expérimental ou de l&#39;organisme à l&#39;étude. Ainsi, il est important non seulement pour choisir la technique la plus appropriée pour un microorganisme donné l&#39;expérience ou de la cible, mais aussi d&#39;adapter la méthodologie t telschapeau les résultats expérimentaux s&#39;occuper de manière appropriée la question de recherche ou un problème. </p><p class="jove_content"> Quelques-unes des applications les plus courantes des techniques de placage abordés dans le présent protocole impliquent des avancées technologiques qui donnent des résultats à haut débit pour des expériences de découverte de dépistage et de drogues. Par exemple, centres de séquençage du génome d&#39;utiliser la «méthode Copacabana&quot; pour les bibliothèques clone propagation-placage, qui sont <em>E.</em> des cellules de <em>E.</em> transformé par des plasmides contenant des fragments d&#39;ADN dérivées du génome d&#39;un microorganisme. Parce que des dizaines de grandes plaques (appelé plateaux de dosage biologique) sont préparés à la fois, un système automatisé Agitateur de plaque est utilisée pour serrer les perles de verre pour le lot entier de plateaux. En outre, lors de la sélection des colonies de ces plaques après incubation, un sélecteur de colonie robotique est utilisée pour recueillir des cellules provenant de colonies appropriées que l&#39;inoculum pour le bouillon LB dans 384 microplaques. Pour ce test de dépistage à haut débit, les principes de procédure de la propagation-ptechnique de la fin de s&#39;appliquer, mais la technologie permet diverses mesures pour être automatisé et mis à l&#39;échelle pour permettre à un grand nombre d&#39;échantillons à analyser simultanément et dans un court laps de temps. </p><p class="jove_content"> Les entreprises de biotechnologie et pharmaceutiques investissent des ressources considérables dans le développement de la technologie à haut débit pour les techniques les plus élémentaires de la microbiologie et la génétique moléculaire. Par exemple, il ya multi-canaux micropipettes pour effectuer les transferts de volume pour un maximum de 8 ou 12 échantillons à la fois. Il ya même des postes de travail robotiques qui manœuvre une tête 96-pipette à canaux! Ces efforts impliquent des équipes multidisciplinaires de chercheurs, biologistes appariement qui possèdent une expertise méthodologique avec les ingénieurs et les programmeurs informatiques, qui peuvent développer l&#39;instrumentation nécessaire pour effectuer les opérations mécaniques associées aux expériences. Indépendamment de l&#39;application de la recherche, l&#39;objectif partagé par les entreprises en développement de ces technologies est le même - pour automatiser laboratoiresprocessus ry, outils, systèmes et instruments, les rendant moins de main-d&#39;œuvre et plus efficace. </p>

<p class="jove_step">1. Yeast Tryptone Agar (YTA)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">If preparing tubes for the pour-plate procedure, allow the agar to cool to ~55&deg;C then add 2.0 ml of 50 mg/ml cycloheximide. Aseptically dispense 18.0 ml of the melted agar per 18 mm tube then store at 4&deg;C. The agar will solidify and will need to be melted in a steamer or microwave prior to use.</p>
<p class="jove_step">2. Minimal Salts Agar (MSA) + 0.1% (w/v) carbon source</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.14 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>1.09 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>0.2 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon source*</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trace salts solution**</td>
			<td>10.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">* Carbon sources used for experiments presented in <strong>Figure 13</strong> include acetamide, lactose, and glycine.</p>
<p class="jove_content">** Trace salts solution is prepared in 0.1 N HCl as follows. It is added to the base before sterilization (autoclave at 121&deg;C for 20 minutes).</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>300.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>180.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>130.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>40.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>20.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>1.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>1000.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (0.1 N)</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">3. EHA soft agar (0.65 % w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>6.5 g</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">4. EHA hard agar (1.2% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>12.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">5. 1X Middlebrook Top Agar (MBTA soft agar, 0.5% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mM CaCl<sub>2</sub> stock*</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 liquid medium: <em>Neat </em>**</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2XTA ***</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Melt 50 ml of 2XTA and allow it to cool to ~55&deg;C. Using aseptic technique, add the CaCl<sub>2</sub> and 7H9 broth to the melted agar. Aseptically dispense 4.5 ml of the mixture per 13 mm tube and store in a 55&deg;C incubator &le;7 days. Cooling MBTA to room temperature or 4&deg;C will cause the CaCl<sub>2</sub> to precipitate out of solution.</p>
<p class="jove_content">* 100 mM CaCl<sub>2</sub>. stock must be stored at room temperature to prevent CaCl<sub>2</sub> from precipitating out of solution.</p>
<p class="jove_content">** 7H9 liquid medium: Neat</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 900.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the base with water then add the glycerol while stirring. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">*** 2X Middlebrook Top Agar (2XTA, 1.0% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Dispense 50 ml aliquots into 100 ml bottles and store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">6. Middlebrook 7H10 Agar Plates (MHA hard agar, 1.9% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>19.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>12.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>887.5 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the agar base with water then add the glycerol while stirring. Heat the solution to boiling then stir for one minute to completely dissolve the base powder. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add the following reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AD supplement (pre-warmed to 37&deg;C)*</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mg/ml Carbenicillin **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mg/ml Cycloheximide **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">* AD supplement</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NaCl &gt;</td>
			<td>17 g &gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)&gt;</td>
			<td>100 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (<em>D</em>-Glucose)&gt;</td>
			<td>40 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water&gt;</td>
			<td>up to 2000.0 ml&gt;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Filter-sterilize this solution; do not autoclave. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">** Filter-sterilize and store these solutions at 4&deg;C for &le;60 days.</p>
<p class="jove_step">7. LB agar (1.5% w/v) + X-Gal (60 &mu;g/ml)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>5.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.5 at 25&deg;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add 3.0 ml of 20 mg/ml X-Gal solution. Freshly prepare X-gal stock by dissolving 400 mg X-Gal in 20 ml dimethylformamide (DMF).</p>
<p class="jove_step">Table of specific reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of the reagent</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>212750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>211705</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>214030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>123340010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30435</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 303-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A-0500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>L6-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-3634</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230375</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z4750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>213621000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>209198</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cycloheximide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>038K1561</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>46-100-RG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S271-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S279-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (Dextrose)</td>
			<td>BD</td>
			<td>215530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>BD</td>
			<td>271310</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>BD</td>
			<td>262710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Shelton</td>
			<td>IB15760</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S71907</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&beta;-D-galactopyranoside)</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>X1205</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4551</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CDA19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorine Bleach</td>
			<td>Chlorox</td>
			<td>02490/06644884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CiDecon (disinfectant)</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc.</td>
			<td>8504</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">Table of specific equipment:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of equipment</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
			<td><strong>Experiment</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal loops</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S17352</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic loops</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wooden sticks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-400-104</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat Toothpicks</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S67859</td>
			<td>Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turn tables</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-758Q</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass rods</td>
			<td>Bellco Glass</td>
			<td>NC9004380</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm glass beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-312B</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Velveteen cloth</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-2</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cylindrical block</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-1</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aseptic laboratory techniques: plating methods

<p class="jove_content"> Micro-organismes sont présents sur toutes les surfaces inanimées la création de sources de contamination possible omniprésents dans le laboratoire. Succès expérimentale repose sur la capacité d&#39;un scientifique de stériliser les surfaces de travail et de l&#39;équipement ainsi que d&#39;éviter tout contact des instruments stériles et des solutions avec des surfaces non stériles. Nous présentons ici les étapes à suivre pour les méthodes de placage plusieurs couramment utilisés dans le laboratoire afin d&#39;isoler, de propager, ou d&#39;énumérer les micro-organismes comme les bactéries et de phages. Tous les cinq méthodes incorporer une technique aseptique, ou des procédures qui assurent la stérilité des matériaux expérimentaux. Les procédures décrites comprennent (1) série-placage des cultures bactériennes pour isoler des colonies isolées, (2) versez-placage et (3) propagation de placage à énumérer viables colonies bactériennes, (4) superpositions agar mou pour isoler des phages et plaques énumérer, et ( 5) réplique de placage pour transférer des cellules d&#39;une plaque à l&#39;autre dans une configuration spatiale identique. Ces procédures peuvent être effectuées à l&#39;instant til paillasse de laboratoire, à condition qu&#39;ils impliquent des souches non pathogènes de micro-organismes (niveau de biosécurité 1, BSL-1). Si vous travaillez avec BSL-2 organismes, ces manipulations doivent avoir lieu dans une enceinte de biosécurité. Consultez l&#39;édition la plus récente de <em>la</em> prévention des risques <em>dans les laboratoires microbiologiques et biomédicaux</em> (BMBL) ainsi que <em>les fiches signalétiques</em> (FS) pour les substances infectieuses pour déterminer la classification de risque biologique, ainsi que les consignes de sécurité et des installations de confinement requis pour le micro-organisme en question. Les souches bactériennes et les stocks de phages peuvent être obtenues auprès des enquêteurs de recherche, des entreprises, et des collections gérées par des organisations particulières telles que <em>l&#39;American Type Culture Collection</em> (ATCC). Il est recommandé que les souches non pathogènes être utilisé lors de l&#39;apprentissage des méthodes de placage différents. En suivant les procédures décrites dans ce protocole, les élèves devraient être en mesure de: </p><ul><li> Effectuer les procédures de placage sans contaminatimédias ng. </li><li> Isoler simples colonies bactériennes par la méthode strie de placage. </li><li> Utiliser des méthodes versez-placage et la propagation de placage pour déterminer la concentration de bactéries. </li><li> Effectuer des superpositions agar mou lorsque vous travaillez avec le phage. </li><li> Transférer les cellules bactériennes d&#39;une plaque à l&#39;autre en utilisant la procédure réplique-plaquage. </li><li> Compte tenu d&#39;une tâche expérimentale, sélectionnez la méthode de placage appropriée. </li></ul></p>

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Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

<p class="jove_content">Lorsque vous travaillez avec les médias et des réactifs utilisés pour les micro-organismes de la culture, une technique aseptique doit être pratiqué afin d&#39;assurer la contamination est réduit au minimum. Une variété de méthodes de placage sont couramment utilisés pour isoler, de propager ou de bactéries et de phages énumérer, toutes les procédures qui incorporent qui maintiennent la stérilité des matériaux expérimentaux.</p>

Techniques de laboratoire aseptiques: Méthodes de placage

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

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