Name: aseptic laboratory techniques: plating methods
Uploaded: 2012-05-11T12:00:00
Duration: 18 min
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> תודה מיוחדת קורי סנדרס על עיצובים Iroc להכנת איורים וכדי קריס Reddi ו Bhairav ​​השאה ב-UCLA להקמת תרבויות מדגם וסיוע עם דמויות. המימון לפרויקט זה סופק על ידי HHMI (HHMI גרנט מס &#39;52006944). </p>

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>At the Bench: A Laboratory Navigator</em>. , (1998).</li><li>US Department of Health and Human Services (DHHS). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</em>. , (2009).</li><li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique.">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> <em style='font-style: italic'>Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol</em>. <b>18</b>, 273-279 (1953).</li><li>Fields, B. N., Knipe, D. M., Chanock, R. M., Hirsch, M. S., Melnick, J. L., Monath, T. P., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Fields Virology</em>. <b>1</b>, (1991).</li><li>Gilbert, R. A., Ouwerkerk, D., Zhang, L. H., Klieve, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+Research+Center+for+Beef+Genetic+Technologies.+In+vitro+detection+and+primary+cultivation+of+bacteria+producing+materials+inhibitory+to+ruminal+methanogens.">Cooperative Research Center for Beef Genetic Technologies. In vitro detection and primary cultivation of bacteria producing materials inhibitory to ruminal methanogens.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Microbiological Methods</em>. <b>80</b>, 217-218 (2010).</li><li>Jett, B. D., Hatter, K. L., Huycke, M. M., Gilmore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+agar+plate+method+for+quantifying+viable+bacteria.">Simplified agar plate method for quantifying viable bacteria.</a> <em style='font-style: italic'>BioTechniques</em>. <b>23</b>, 648-650 (1997).</li><li>Karam, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Molecular Biology of Bacteriophage T4</em>. , (1994).</li><li>Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A., Roizman, B., Straus, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Fundamental Virology</em>. , (2001).</li><li>Lederberg, J., Lederberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replica+plating+and+indirect+selection+of+bacterial+mutants.">Replica plating and indirect selection of bacterial mutants.</a> <em style='font-style: italic'>J. Bacteriol</em>. <b>63</b>, 399-406 (1952).</li><li>Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>A Short Course in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and related bacteria</em>. , (1992).</li><li>Mills, K. V., Gareau, J. R., Garcia, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-cost+modification+to+the+Copacabana+method+for+spreading+transformation+mixtures.">Low-cost modification to the Copacabana method for spreading transformation mixtures.</a> <em style='font-style: italic'>BioTechniques</em>. <b>39</b>, 188 (2005).</li><li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</em>. , (2008).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Molecular Cloning - A Laboratory Manual</em>. , (2001).</li><li>Sanders, E. R., Miller, J. H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Microbiologist: A Discovery-based Course in Microbial Ecology and Molecular Evolution</em>. , (2010).</li><li>Slonczewski, J. L., Foster, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Microbiology - An Evolving Science</em>. , (2011).</li><li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Congo+Red-Polysaccharide+Interactions+in+Enumeration+and+Characterization+of+Cellulolytic+Bacteria+from+the+Bovine+Rumen.">Use of Congo Red-Polysaccharide Interactions in Enumeration and Characterization of Cellulolytic Bacteria from the Bovine Rumen.</a> <em style='font-style: italic'>Applied and Environmental Microbiology</em>. <b>43</b>, 777-780 (1982).</li><li>Wise, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Preparing Spread Plates Protocols</em>. , (2006).</li><li>Worthington, M., Luo, R. Q., Pelo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copacabana+method+for+spreading+E.+coli+and+yeast+colonies.">Copacabana method for spreading E. coli and yeast colonies.</a> <em style='font-style: italic'>BioTechniques</em>. <b>30</b>, 738-742 (2001).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> אין לי מה לחשוף. </p>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקרואורגניזמים culturing כוללת מספר שיטות ציפוי, כל אלה דורשים כי טכניקה אספטי להישמר לאורך כל מניפולציה של תאים מדיה. חמישה הליכים שונים תוארו בפרוטוקול זה. למרות הטכניקות האלה ציפוי משמשים באופן שגרתי כדי לתפעל חיידקים הפאג, הם גם יכולים להיות מיושמים על תרבית תאים יונקים מיקרואורגניזמים האיקריוטים נפוץ גנטיקה מולקולרית כמו שמרים (כלומר, <em>cerevisiae Saccharomyces, קנדידה אלביקנס, pombe Schizosaccharomyces),</em> אצות פרוטוזואה ( כלומר, <em>Volvox, Chlamydomonas, אמבה, הסנדלית),</em> ו נמטודות (כלומר, <em>Caenorhabditis elegans).</em> יש גם רבים (ועוד יותר מתוחכמת) וריאציות של כל שיטה ציפוי בהתאם המטרה האורגניזם הניסוי או על פי המחקר. לכן, חשוב לא רק כדי לבחור את הטכניקה המתאימה ביותר עבור מיקרואורגניזם הניסוי או יעד נתון, אלא גם כדי להתאים את המתודולוגיה לא כזהכובע תוצאות הניסוי כראוי להתמודד עם שאלת המחקר או בעיה. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק מהיישומים העדכניים ביותר של טכניקות ציפוי שנדונו בפרוטוקול זה כרוך כי ההתקדמות הטכנולוגית להניב תפוקה גבוהה תוצאות ניסויים ההקרנה ו גילוי תרופות. לדוגמה, רצף הגנום מרכזים להשתמש &quot;שיטת קופקבנה&quot; להתפשטות-ציפוי ספריות לשכפל, אשר <em>א</em> תאים <em>קולי</em> הפך עם פלסמידים המכילים קטעי דנ&quot;א שמקורם הגנום של החיידק. בגלל עשרות צלחות גדולות (המכונה מגשים המבדק) מוכנים בבת אחת, אוטומטית צלחת שאכר משמש לנער את חרוזי זכוכית עבור אצווה שלמה של מגשים. יתר על כן, כאשר אתם בוחרים מושבות של הצלחות אלה לאחר הדגירה, בורר המושבה רובוטית משמש לאיסוף תאים ממושבות בהתאם הבידוד של מרק LB ב 384 גם microplates. עבור assay תפוקה גבוהה זה ההקרנה, עקרונות פרוצדורליים של p-התפשטותהטכניקה מאוחר להחיל אבל הטכנולוגיה מאפשרת צעדים שונים כדי להיות אוטומטי ו scaled כדי לאפשר מספר גדול של דגימות כדי לנתח בו זמנית תוך פרק זמן קצר. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> חברות ביוטכנולוגיה ותרופות משקיעות משאבים רבים בפיתוח טכנולוגיה תפוקה גבוהה עבור הטכניקות הבסיסיות ביותר במיקרוביולוגיה וגנטיקה מולקולרית. למשל, יש הרב ערוצית micropipettors לבצע העברות בנפח של עד 8 או 12 דגימות בו זמנית. יש אפילו הם תחנות עבודה רובוטיות תמרון הראש 96 ערוצים פיפטה! מאמצים אלה כוללים רב תחומית צוותים של מדענים, זיווג ביולוגים שיש להם מומחיות מתודולוגית עם מהנדסים, מתכנתי מחשבים, אשר יכולה לפתח את המכשור הדרוש כדי לבצע את הפעולות המכניות הקשורות הניסויים. ללא תלות ביישום המחקר, המטרה המשותפת חברות המפתחות טכנולוגיות אלה היא אחת - כדי להפוך laboratoר&quot;י תהליכים, כלים, מערכות ומכשירים, מה שהופך אותם פחות עבודה אינטנסיבית ויעילה יותר. </p>

<p class="jove_step">1. Yeast Tryptone Agar (YTA)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">If preparing tubes for the pour-plate procedure, allow the agar to cool to ~55&deg;C then add 2.0 ml of 50 mg/ml cycloheximide. Aseptically dispense 18.0 ml of the melted agar per 18 mm tube then store at 4&deg;C. The agar will solidify and will need to be melted in a steamer or microwave prior to use.</p>
<p class="jove_step">2. Minimal Salts Agar (MSA) + 0.1% (w/v) carbon source</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.14 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>1.09 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>0.2 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon source*</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trace salts solution**</td>
			<td>10.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">* Carbon sources used for experiments presented in <strong>Figure 13</strong> include acetamide, lactose, and glycine.</p>
<p class="jove_content">** Trace salts solution is prepared in 0.1 N HCl as follows. It is added to the base before sterilization (autoclave at 121&deg;C for 20 minutes).</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>300.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>180.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>130.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>40.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>20.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>1.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>1000.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (0.1 N)</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">3. EHA soft agar (0.65 % w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>6.5 g</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">4. EHA hard agar (1.2% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>12.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">5. 1X Middlebrook Top Agar (MBTA soft agar, 0.5% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mM CaCl<sub>2</sub> stock*</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 liquid medium: <em>Neat </em>**</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2XTA ***</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Melt 50 ml of 2XTA and allow it to cool to ~55&deg;C. Using aseptic technique, add the CaCl<sub>2</sub> and 7H9 broth to the melted agar. Aseptically dispense 4.5 ml of the mixture per 13 mm tube and store in a 55&deg;C incubator &le;7 days. Cooling MBTA to room temperature or 4&deg;C will cause the CaCl<sub>2</sub> to precipitate out of solution.</p>
<p class="jove_content">* 100 mM CaCl<sub>2</sub>. stock must be stored at room temperature to prevent CaCl<sub>2</sub> from precipitating out of solution.</p>
<p class="jove_content">** 7H9 liquid medium: Neat</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 900.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the base with water then add the glycerol while stirring. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">*** 2X Middlebrook Top Agar (2XTA, 1.0% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Dispense 50 ml aliquots into 100 ml bottles and store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">6. Middlebrook 7H10 Agar Plates (MHA hard agar, 1.9% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>19.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>12.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>887.5 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the agar base with water then add the glycerol while stirring. Heat the solution to boiling then stir for one minute to completely dissolve the base powder. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add the following reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AD supplement (pre-warmed to 37&deg;C)*</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mg/ml Carbenicillin **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mg/ml Cycloheximide **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">* AD supplement</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NaCl &gt;</td>
			<td>17 g &gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)&gt;</td>
			<td>100 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (<em>D</em>-Glucose)&gt;</td>
			<td>40 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water&gt;</td>
			<td>up to 2000.0 ml&gt;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Filter-sterilize this solution; do not autoclave. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">** Filter-sterilize and store these solutions at 4&deg;C for &le;60 days.</p>
<p class="jove_step">7. LB agar (1.5% w/v) + X-Gal (60 &mu;g/ml)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>5.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.5 at 25&deg;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add 3.0 ml of 20 mg/ml X-Gal solution. Freshly prepare X-gal stock by dissolving 400 mg X-Gal in 20 ml dimethylformamide (DMF).</p>
<p class="jove_step">Table of specific reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of the reagent</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>212750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>211705</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>214030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>123340010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30435</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 303-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A-0500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>L6-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-3634</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230375</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z4750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>213621000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>209198</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cycloheximide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>038K1561</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>46-100-RG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S271-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S279-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (Dextrose)</td>
			<td>BD</td>
			<td>215530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>BD</td>
			<td>271310</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>BD</td>
			<td>262710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Shelton</td>
			<td>IB15760</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S71907</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&beta;-D-galactopyranoside)</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>X1205</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4551</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CDA19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorine Bleach</td>
			<td>Chlorox</td>
			<td>02490/06644884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CiDecon (disinfectant)</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc.</td>
			<td>8504</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">Table of specific equipment:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of equipment</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
			<td><strong>Experiment</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal loops</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S17352</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic loops</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wooden sticks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-400-104</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat Toothpicks</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S67859</td>
			<td>Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turn tables</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-758Q</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass rods</td>
			<td>Bellco Glass</td>
			<td>NC9004380</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm glass beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-312B</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Velveteen cloth</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-2</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cylindrical block</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-1</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aseptic laboratory techniques: plating methods

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקרואורגניזמים נמצאים בכל משטחים דוממים יצירת מקורות בכל מקום אפשרי של זיהום במעבדה. הצלחת הניסוי מסתמך על היכולת של המדען לעקר משטחי עבודה וציוד, כמו גם למנוע מגע של כלים ופתרונות סטריליים עם לא סטריליים משטחים. כאן אנו מציגים את השלבים כמה שיטות ציפוי המשמשים באופן שגרתי במעבדה לבודד, להפיץ, או למנות מיקרואורגניזמים כגון חיידקים הפאג. כל חמש שיטות לשלב טכניקה מזוהם, או נהלים, כי לשמור על סטריליות של חומרים ניסיוניים. הנהלים שתוארו כוללים (1) רצף, ציפוי תרבויות לבודד מושבות חיידקים בודדים, (2) לשפוך, ציפוי ו (3) התפשטות, ציפוי על מנת לספור מושבות חיידקים קיימא (4) שכבות אגר רך לבודד הפאג ושלטים למנות, ו ( 5) העתק, ציפוי להעביר תאים מהצלחת אחד למשנהו בתבנית מרחבית זהה. נהלים אלה ניתן לבצע tהוא ספסל במעבדה, בתנאי שהם כרוכים פתוגניים שאינם זנים של מיקרואורגניזמים (רמת בטיחות ביולוגית 1, BSL-1). אם עובדים עם BSL-2 אורגניזמים, אז המניפולציות האלה חייב להתבצע בתוך ארון בטיחות ביולוגית. להתייעץ המהדורה העדכנית ביותר של <em>בטיחות ביולוגית במעבדות מיקרוביולוגיות ביו</em> (BMBL), כמו גם <em>בטיחות חומרים גיליונות נתונים</em> (MSDS) של חומרים זיהומיות על מנת לקבוע את סיווג Biohazard, כמו גם את אמצעי בטיחות ומתקנים הבלימה הנדרש מיקרואורגניזם הנדון. זני חיידקים ומניות הפאג ניתן לקבל החוקרים מחקר, חברות, ואוספים מתוחזק על ידי ארגונים מסוימים כגון <em>אוסף התרבות האמריקאית סוג</em> (ATCC). מומלץ לא להשתמש זנים פתוגניים כאשר לומדים את שיטות ציפוי שונים. על ידי ביצוע הליכים המתוארים בפרוטוקול זה, התלמידים צריכים להיות מסוגלים: </p><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהלי ציפוי ללא contaminatiנג התקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד מושבות חיידקים בודדים בשיטת פס-ציפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש בשיטות לשפוך, ציפוי, פרוסים ציפוי כדי לקבוע את ריכוז החיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע שכבות אגר רך בעבודה עם הפאג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת תאים חיידקיים מהצלחת אחד לאחר באמצעות ההליך העתק-ציפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאור ניסיוני המשימה, בחר את שיטת ציפוי מתאים. </li></ul></p>

Watch this Scientific Journal Video about Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods at JoVE.com

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

<p class="jove_content">כאשר עובדים עם התקשורת ריאגנטים המשמשים מיקרואורגניזמים תרבות, הטכניקה aseptic חייב להיות מתורגל כדי להבטיח זיהום ממוזער. מגוון שיטות ציפוי משמשים באופן שגרתי כדי לבודד, להפיץ, או חיידקים למנות ו הפאג, אשר כולם לשלב נהלים השומרים על עקרות של חומרים ניסיוניים.</p>

טכניקות מעבדה אספטיים: שיטות ציפוי

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microbial Communities in Nature and Laboratory - Interview

הקהילות מיקרוביאלית בטבע מעבדה - ראיון

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו Micropipettors סרולוגיות

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

אופטימיזציה שיטות דוגמנות מכתימה והפצת נשק לניטור חלוקת תא באמצעות צבעי מעקב סלולרי

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

טכניקות לניתוח של תאית שלפוחית ​​שימוש cytometry הזרימה

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Cultivation of <em>Caenorhabditis elegans</em> in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

טיפוח<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; ב בשלושה ממדים במעבדה

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

טכניקות כדי להשרות ולכמת סלולר הזדקנות

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly <em>Bemisia tabaci</em>

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

שיטות להפקת endosymbionts מן Whitefly<em&gt; Bemisia Tabaci</em

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

ניהול פשוטה ויעילה והדמיה של Microparticles במערכת הדם של דגים קטנים באמצעות הזרקת כליות

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

טכניקות ביופסיה בלוטת חלב שור

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

בידוד, טיהור, והבידול של אוסטאוקלסט מקדים של מח עצם חולדה

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or ...