Name: aseptic laboratory techniques: plating methods
Uploaded: 2012-05-11T12:00:00
Duration: 18 min
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<p class="jove_content"> 샘플 문화권을 설정하고 그림과 함께 지원을 위해 그림을 준비하고 크리스 Reddi와 UCLA의 Bhairav​​ 샤에 대한 Iroc 설계에서 Cori 샌더스에 대한 특별 감사합니다. 이 프로젝트에 대한 자금 지원은 HHMI (HHMI 그랜트 번호 52006944)에 의해 제공되었다. </p>

<ol>
	<li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>At the Bench: A Laboratory Navigator</em>. , (1998).</li><li>US Department of Health and Human Services (DHHS). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</em>. , (2009).</li><li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique.">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> <em style='font-style: italic'>Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol</em>. <b>18</b>, 273-279 (1953).</li><li>Fields, B. 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<p class="jove_content"> Culturing의 미생물 무균 기술은 세포와 미디어의 조작에 걸쳐 유지하는 것이 필요한 모든 중 도금 방법의 수를 포함한다. 다섯 가지 절차는이 프로토콜에서 설명되었다. 이러한 도금 기법은 일상적으로 세균과 파지를 조작하는 데 사용하고 있지만, 그들은 또한 (일반적으로 같은 효모 (즉, <em>Saccharomyces의 cerevisiae, 칸디다 albicans, Schizosaccharomyces의 pombe),</em> 해조류 등 분자 유전학에서 사용하고 원생 동물문 포유 동물 세포 배양 및 진핵 미생물에 적용할 수 즉, <em>Volvox, Chlamydomonas, 아메바, Paramecium)</em> 및 nematodes (즉, <em>Caenorhabditis elegans).</em> 또한 연구 미만 실험 목표 또는 유기체에 따라 각각의 도금 방법의 다양한 (그리고 훨씬 더 정교한) 차이가 있습니다. 그러므로, 그것은 단지 방법론 같은 T를 주어진 실험 또는 대상 미생물에 가장 적합한 기술을 선택할뿐만 아니라 봉제에하지하는 것이 중요모자 실험 결과는 적절한 연구 질문이나 문제를 해결합니다. </p><p class="jove_content"> 이 프로토콜에서 언급한 도금 기술의 최신 애플 리케이션 중 일부는 선별 및 약물 발견 실험에 대한 높은 처리량 결과를 얻을 기술 진보를 포함. 예를 들어, 게놈 시퀀싱 센터 <em>E.되는,</em> 확산 도금 클론 라이브러리에 대해 &quot;Copacabana 방법&quot;을 사용 <em>대장균 세포는</em> 미생물의 게놈으로부터 파생된의 DNA 조각을 포함하는 plasmids으로 바꾸었다. 큰 접시 수십개이 (bioassay 트레이라고도 함) 한번에 준비가되어 있기 때문에, 자동 번호판 뿌리는 쟁반의 전체 배치를 위해 유리 구슬을 떨쳐낼하는 데 사용됩니다. 또한, 부화에 따라 다음과 접시에서 콜로니를 선택할 때, 로봇 식민지 따는 사람은 384 잘 microplates의 LB의 국물을위한 inoculum 따라 식민지에서 세포를 수집하는 데 사용됩니다. 이러한 높은 처리량 심사 분석, 확산-P의 절차적 원칙에 대한늦은 기법이 적용될 수 있지만 기술은 여러 단계가 자동화되어 있으며 동시에 짧은 시간 내에 분석해야 할 시료의 큰 숫자를 허용하도록 조정 수 있습니다. </p><p class="jove_content"> 생명 공학 및 제약 회사들은 미생물학과 분자 유전학의 가장 기본적인 기술에 대한 높은 처리량 기술 개발에 상당한 자원을 투자합니다. 예를 들어, 최대 한번에 8 또는 12 샘플에 대해 볼륨 전송을 수행하는 멀티 채널 micropipettors가 없습니다. 심지어 로봇 워크 스테이션 그 책략 96 채널 피펫 머리가있다! 이러한 노력은 실험과 관련된 기계적인 작업을 수행하기 위해 필요한 장비를 개발할 수 있습니다 엔지니어와 컴퓨터 프로그래머가 방법론적인 전문 지식을 가진 생물학 자 페어 링, 과학자의 멀티 징계 팀을 포함됩니다. 에 관계없이 연구에 응용 프로그램의 이러한 기술을 개발 회사에 의해 공동 목표는 동일 - laborato를 자동화공예 프로세스, 도구, 시스템 및 악기, 그들 집중 적은 노동과 더 효율적인. </p>

<p class="jove_step">1. Yeast Tryptone Agar (YTA)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">If preparing tubes for the pour-plate procedure, allow the agar to cool to ~55&deg;C then add 2.0 ml of 50 mg/ml cycloheximide. Aseptically dispense 18.0 ml of the melted agar per 18 mm tube then store at 4&deg;C. The agar will solidify and will need to be melted in a steamer or microwave prior to use.</p>
<p class="jove_step">2. Minimal Salts Agar (MSA) + 0.1% (w/v) carbon source</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.14 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>1.09 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>0.2 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon source*</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trace salts solution**</td>
			<td>10.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">* Carbon sources used for experiments presented in <strong>Figure 13</strong> include acetamide, lactose, and glycine.</p>
<p class="jove_content">** Trace salts solution is prepared in 0.1 N HCl as follows. It is added to the base before sterilization (autoclave at 121&deg;C for 20 minutes).</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>300.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>180.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>130.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>40.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>20.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>1.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>1000.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (0.1 N)</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">3. EHA soft agar (0.65 % w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>6.5 g</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">4. EHA hard agar (1.2% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>12.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">5. 1X Middlebrook Top Agar (MBTA soft agar, 0.5% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mM CaCl<sub>2</sub> stock*</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 liquid medium: <em>Neat </em>**</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2XTA ***</td>
			<td>50 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Melt 50 ml of 2XTA and allow it to cool to ~55&deg;C. Using aseptic technique, add the CaCl<sub>2</sub> and 7H9 broth to the melted agar. Aseptically dispense 4.5 ml of the mixture per 13 mm tube and store in a 55&deg;C incubator &le;7 days. Cooling MBTA to room temperature or 4&deg;C will cause the CaCl<sub>2</sub> to precipitate out of solution.</p>
<p class="jove_content">* 100 mM CaCl<sub>2</sub>. stock must be stored at room temperature to prevent CaCl<sub>2</sub> from precipitating out of solution.</p>
<p class="jove_content">** 7H9 liquid medium: Neat</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 900.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the base with water then add the glycerol while stirring. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">*** 2X Middlebrook Top Agar (2XTA, 1.0% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Dispense 50 ml aliquots into 100 ml bottles and store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_step">6. Middlebrook 7H10 Agar Plates (MHA hard agar, 1.9% w/v)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>19.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% glycerol stock</td>
			<td>12.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>887.5 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Mix the agar base with water then add the glycerol while stirring. Heat the solution to boiling then stir for one minute to completely dissolve the base powder. Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add the following reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AD supplement (pre-warmed to 37&deg;C)*</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mg/ml Carbenicillin **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mg/ml Cycloheximide **</td>
			<td>1.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">* AD supplement</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NaCl &gt;</td>
			<td>17 g &gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)&gt;</td>
			<td>100 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (<em>D</em>-Glucose)&gt;</td>
			<td>40 g&gt;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water&gt;</td>
			<td>up to 2000.0 ml&gt;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Filter-sterilize this solution; do not autoclave. Store at 4&deg;C.</p>
<p class="jove_content">** Filter-sterilize and store these solutions at 4&deg;C for &le;60 days.</p>
<p class="jove_step">7. LB agar (1.5% w/v) + X-Gal (60 &mu;g/ml)</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>5.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>up to 1000.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>pH 7.5 at 25&deg;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_content">Autoclave at 121&deg;C for 20 minutes to sterilize. Allow the agar to cool to ~55&deg;C then aseptically add 3.0 ml of 20 mg/ml X-Gal solution. Freshly prepare X-gal stock by dissolving 400 mg X-Gal in 20 ml dimethylformamide (DMF).</p>
<p class="jove_step">Table of specific reagents:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of the reagent</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>212750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>211705</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>214030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>4</sub>Cl</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>123340010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30435</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 303-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A-0500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>L6-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO<sub>4</sub>&bull;7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl<sub>2</sub>&bull;4H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-3634</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co(NO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>&bull;6H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230375</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z4750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H<sub>2</sub>MoO<sub>4</sub></td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>213621000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO<sub>4</sub>&bull;5H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>209198</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cycloheximide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>038K1561</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>46-100-RG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S271-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Citrate&bull;2H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S279-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (Dextrose)</td>
			<td>BD</td>
			<td>215530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 broth base</td>
			<td>BD</td>
			<td>271310</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H10 agar base</td>
			<td>BD</td>
			<td>262710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Shelton</td>
			<td>IB15760</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S71907</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&beta;-D-galactopyranoside)</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>X1205</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4551</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CDA19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorine Bleach</td>
			<td>Chlorox</td>
			<td>02490/06644884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CiDecon (disinfectant)</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc.</td>
			<td>8504</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<p class="jove_step">Table of specific equipment:</p>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>Name of equipment</strong></td>
			<td><strong>Company</strong></td>
			<td><strong>Catalogue number</strong></td>
			<td><strong>Experiment</strong></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal loops</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S17352</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic loops</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wooden sticks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-400-104</td>
			<td> Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat Toothpicks</td>
			<td>American Educational Products</td>
			<td>S67859</td>
			<td>Streak plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turn tables</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-758Q</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass rods</td>
			<td>Bellco Glass</td>
			<td>NC9004380</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm glass beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-312B</td>
			<td>Spread plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Velveteen cloth</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-2</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cylindrical block</td>
			<td>Bel-Art Products</td>
			<td>09-718-1</td>
			<td>Replica plating</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aseptic laboratory techniques: plating methods

<p class="jove_content"> 미생물 실험실에서 가능한 오염의 유비 쿼터스 소스를 만들고 모든 생명이없는 표면에 존재한다. 실험 성공은 작업 표면 및 장비를 소독뿐만 아니라 비 멸균 표면 살균 장비와 솔루션의 접촉을 방지하기 위해 과학자의 능력에 의존하고 있습니다. 여기에서 우리는 정기적으로, 고립 전파, 또는 세균과 파지와 같은 미생물을 열거하기 위해 실험실에서 사용되는 여러 가지 도금 방법에 대한 단계를 제시한다. 다섯 가지 방법 무균 기술, 또는 실험 재료의 불임을 유지 절차를 포함. 설명된 절차는 단일 콜로니를 분리하기 (1) 탄력 - 도금 세균성 문화, (2) 붓다 - 도금 (3) 확산 도금 가능한 세균성 식민지를 열거하기 위해, 파지 및 열거 plaques를 분리하기 (4) 부드러운 한천 오버레이, 및 (포함 5) 복제 - 도금을 한 판에서 동일한 공간적 패턴에서 다른 세포를 전송할 수 있습니다. 이러한 절차는 t에서 수행할 수그는 실험실 벤치는 그들이 미생물의 비 병원성 변종을 (Biosafety 레벨 1, BSL-1) 참여 제공. BSL-2 생물과 협력한다면, 이러한 조작은 biosafety 캐비닛에서 개최한다. 생물 학적 분류는 물론 문제의 미생물에 필요한 안전 조치 및 억제 시설을 결정하는 감염성 물질에 대한 최신 <em>미생물 및 바이오 메디컬 연구소의 Biosafety의</em> 판 (BMBL)뿐만 아니라 <em>재료 안전 데이터 시트</em> (MSDS)를 참조하십시오. 박테리아 변종과 파지 주식 같은 <em>미국 유형 문화 수집</em> (ATCC)와 같은 특정 단체에 의해 관리 연구 조사관, 회사 및 컬렉션에서 얻을 수있다. 그것은 여러 가지 도금 방법을 배우고 비 병원성 종자를 사용하는 것이 좋습니다. 이 프로토콜에서 설명한 절차에 따라, 학생들은 수 있어야합니다 : </p><ul><li> contaminati없이 도금 절차를 수행NG 미디어. </li><li> 줄무늬-도금 방법으로 단일 세균성 식민지를 분리. </li><li> 박테리아의 농도를 결정 부어 - 도금 및 확산 도금 방법을 사용합니다. </li><li> 파지 작업시 부드러운 한천 오버레이를 수행합니다. </li><li> 한 접시의 복제 - 도금 절차를 사용하여 다른 세균 세포를 전송합니다. </li><li> 실험적인 작업을 감안할 때, 적절한 도금 방법을 선택합니다. </li></ul></p>

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Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

<p class="jove_content">문화 미생물에 사용되는 미디어 및 시약과 함께 작업할 경우 무균 기술은 오염을 최소화하기 위해 실천해야합니다. 도금 방법의 다양한 정기적으로, 고립 전파, 또는 열거 세균 및 파지, 실험 재료의 불임을 유지 절차를 포함 모두의하는 데 사용됩니다.</p>

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