Name: placing growth factor-coated beads on early stage chicken embryos
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos at JoVE.com

<p class="jove_step"> 1. Ta bort ägg från inkubatorn </p><p class="jove_content"> I E2-2.5 (~ St 17 HH), ta bort äggen och förbereda dem därefter. De kan arbetat omedelbart eller tillbaka till inkubator för ett par timmar. Äggen kan placeras i rumstemperatur på ett säkert sätt i över en timme. Ägg kan stanna ute för länge manipulationer. Ibland kan dessa kan ta en timme eller mer. </p><p class="jove_content"> <em>Notera:</em> Ju längre de sitter i rumstemperatur, desto mindre sannolikt är det att överleva. </p><p class="jove_st...

<ol>
	<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Windowing+Chicken+Eggs+for+Developmental+Studies.">Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies.</a> <em style='font-style: italic'>Jounal of Visualized Experiments</em>. <b>8</b>, (2007).</li><li>Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinate+expression+of+Fgf8,+Otx2,+Bmp4,+and+Shh+in+the+rostral+prosencephalon+during+development+of+the+telencephalic+and+optic+vesicles.">Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles.</a> <em style='font-style: italic'>Neuroscience</em>. <b>108</b>, 183-206 (2001).</li><li>Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+and+negative+regulations+by+FGF8+contribute+to+midbrain+roof+plate+developmental+plasticity.">Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity.</a> <em style='font-style: italic'>Development </em>. <b>133</b>, 2905-2913 (2006).</li></ol>

<p> Beroende på det protein du vill använda, det finns olika protokoll på hur man förbereder pärlor. I dessa försök använder vi heparin-akrylpärlor, men Affi-gel pärlor kan också användas. Vi har funnit att den heparin-akrylpärlor är lättare att manipulera i vattenfasen miljö äggalbumin. Pärlor är dränkta i 5 l protein över natten vid 4 ° C. Kontroll pärlor placeras i sterila PBS fram till tiden för placeringen. Fördelen med att använda en i ovo förberedelse är att embryot fortfarande lever och gratis att utvecklas n...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>Animal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH)
</td>
</tr>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>Profi-I</td>
<td>Lyon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>India Ink</td>
<td>Tool</td>
<td>Higgins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Prepare a 4% solution in sterile PBS.</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternatively, an antibody cocktail can be used</td>
</tr>
<tr>
<td>1ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>27G 1/2 needles</td>
<td>Tool</td>
<td>BD</td>
<td>305109</td>
<td>Angled at 90 degrees</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>size 55</td>
</tr>
<tr>
<td>Hemostats</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissection scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500086</td>
<td>vannas, 8.5cm</td>
</tr>
<tr>
<td>Parafilm tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>to seal eggs</td>
</tr>
<tr>
<td>Tungsten Probe</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>62091</td>
<td>Tool #24.  Handle optional. </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

placing growth factor-coated beads on early stage chicken embryos

<p class="jove_content"> Neuralröret uttrycker många proteiner i specifika Spatiotemporal mönster under utveckling. Dessa proteiner har visat sig vara avgörande för cellernas öde beslutsamhet, cell migration, och bildandet av neurala kretsar. Neuronal induktion och mönstring innebär protein benmorfogenetiskt (BMP), Sonic Hedgehog (SHH), fibroblast tillväxtfaktor (FGF), bland annat. I synnerhet är uttrycket mönster av Fgf8 i nära anslutning till områden uttrycka BMP4 och SHH. Detta uttryck mönster stämmer överens med utvecklande samspel som underlättar mönster i telencephalon. </p><p class="jove_content"> Här erbjuder vi en visuell demonstration av en metod där en ovo preparatet kan användas för att testa effekterna av Fgfs i bildandet av framhjärnan. Pärlor är belagda med protein och placeras i utvecklingsländerna neuralrörsdefekter att ge långvarig exponering. Eftersom förfarandet använder små, omsorgsfullt placerade kulor, det är minimalt invasiva och tillåter flera pärlor ska placeras i en enda neuralrörsdefekter. Dessutom tillåter metoden för fortsatt utveckling så att embryon kan analyseras på ett mer moget stadium upptäcka förändringar i anatomi och neurala mönster. Denna enkla men användbara protokollet möjliggör för realtids bildbehandling. Det ger en möjlighet att göra rumsligt och timligt begränsade ändringar endogena protein nivåer. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos at JoVE.com

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

<p class="jove_content">En mängd olika tillväxtfaktorer och proteiner samverkar för att få celler att ta på annan cell öden under utveckling. Här har vi demonstrera användningen av ett i ovo förberedelse för att hantera eventuella interaktioner mellan olika proteiner i utvecklingen genom att placera pärlor på E2.5 kycklingembryon.</p>

Placering Growth Factor-Coated Pärlor på tidiga embryon Stage Kyckling

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

Growth Factor-Coated Bead Placering på ryggfenan framhjärnan explants

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Dubbel Hela Montera in situ hybridisering för tidig kycklingembryon

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

Kromatin Immunoprecipitation analys för Tissue-specifika gener med början av karriären musembryon

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by <em>ex ovo</em> Electroporation

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Genöverföring till äldre kycklingembryon med<em&gt; Ex ovo</em&gt; Elektroporering

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from <em>Arabidopsis thaliana</em> Seeds

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

Effektiv och snabb isolering av tidigt stadium embryon från<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Frön

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a ...

Dissection and Downstream Analysis of Zebra Finch Embryos at Early Stages of Development

Dissection och Downstream Analys av Zebra Finch embryon på ett tidigt utvecklingsskede

The zebra finch (Taeniopygiaguttata) has become an increasingly important model organism in many areas of research including toxicology1,2, behavior3, and ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca<sup>2+</sup>-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening analyser för bedömning av effekter på Ca<sup>2 +</sup>-signalering och akrosomen reaktion i mänskliga spermier

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...