Name: rat mesentery angiogenesis assay
Uploaded: 2011-06-18T14:00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rat Mesentery Angiogenesis Assay at JoVE.com

وقدمت الدعم المالي لمعظم الدراسات التي أجراها مجلس البحوث الطبية السويدية (منحة 5942).

<ol>
	<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+angiogenesis.">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+testing+with+angiogenesis+models.">Drug testing with angiogenesis models.</a> Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).</li><li>Norrby, K., Jakobsson, A., Sorbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast-cell-mediated+angiogenesis:+a+novel+experimental+model+using+the+rat+mesentery.">Mast-cell-mediated angiogenesis: a novel experimental model using the rat mesentery.</a> Virchows Arch. B Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. 52, 195-206 (1986).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cells+and+angiogenesis.">Mast cells and angiogenesis.</a> APMIS. 110, 355-371 (2002).</li><li>Albertsson, P., Lennernas, B., Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+meteronomic+chemotherapy:+modulation+of+angiogenesis+mediated+by+VEGF-A.">On meteronomic chemotherapy: modulation of angiogenesis mediated by VEGF-A.</a> Acta Oncol. 45, 144-155 (2006).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apo-lactoferrin+enhances+angiogenesis+mediated+by+vascular+endothelial+growth+factor+A+in+vivo.">Human apo-lactoferrin enhances angiogenesis mediated by vascular endothelial growth factor A in vivo.</a> J. Vasc. Res. 41, 293-304 (2004).</li><li>Norrby, K., Mattsby-Baltzer, I., Innocenti, M., &amp;amp, T. u. n. e. b. e. r. g., S, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orally+administered+bovine+lactoferrin+systemically+inhibits+VEGF(165)-mediated+angiogenesis+in+the+rat.">Orally administered bovine lactoferrin systemically inhibits VEGF(165)-mediated angiogenesis in the rat.</a> Int. J. Cancer. 91, 236-240 (2001).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-molecular-weight+heparins+and+angiogenesis.">Low-molecular-weight heparins and angiogenesis.</a> APMIS. 114, 79-102 (2006).</li><li>Norrby, K., Nordenhem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dalteparin,+a+low-molecular-weight+heparin,+promotes+angiogenesis+mediated+by+heparin-binding+VEGF-A+in+vivo.">Dalteparin, a low-molecular-weight heparin, promotes angiogenesis mediated by heparin-binding VEGF-A in vivo.</a> APMIS. 118, 949-957 (2010).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis.">Basic fibroblast growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res.. 48, 96-113 (1994).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis.">Vascular endothelial growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 51, 153-163 (1996).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+density+in+terms+of+number+and+length+of+microvessel+segments+per+unit+tissue+volume+in+mammalian+angiogenesis.">Microvascular density in terms of number and length of microvessel segments per unit tissue volume in mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 55, 43-53 (1998).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد قدم في عام 1986 فحص (3) ولقد تم تطويرها تباعا وصقلها في مختبرنا 7،10-12. كما نوقشت في ورقات الاستعراض (دعوة) 1 ، 2 ، مقايسة يقارن جيدا مع الثدييات الأخرى في مقايسة الأوعية الدموية في الجسم الحي الصدد ولا سيما إلى ميزات هامة مثل النسيج اختبار الكبار أصلا أوعية دموية ويفتقر إلى الأوعية الدموية الفسيولوجية ؛ الحد الأدنى من الصدمة ، إن وجد ، هو لحقت النسيج ؛ تقاس المتغيرات الكمية حقا ، والذي يسمح التحليل الإحصائي السليم بشأن الاستجابة للجرعة والدراسات الجزيئية النشاط ؛ تنتشر الأوعية الدموية يحدث ، وهو غلبة في الأنسجة الطبيعية والأورام ، ويتم تجميع البيانات بسهولة السمية في الفئران التي تنمو بقوة من الناحية الفسيولوجية في مرحلة البلوغ. قد تتضمن ميزات غير ملائم حقيقة أن مقايسة نسبيا تستغرق وقتا طويلا ، وخصوصا عندما تقدير عدد وطول قطاعات microvessel الفردية وبراعم microvessel ، وأنه لا يسمح real-time/serial الملاحظات ، وأنه لا يصلح بالمرة لالفئران منذ العديد من النوافذ المساريقي في الفئران عدم microvessels الأصل المحتملة من الشعيرات الدموية الجديدة التي يمكن أن تنشأ. هي ، في الوقت الحقيقي الملاحظات ومع ذلك ، تمكين بواسطة المجهر intravital حيث مفلطحة النوافذ سليمة المساريقي exteriorized لكن على مدى مرحلة المجهر بينما الحيوان هو تخدير ، كما نوقش في 1. وقد تم تحقيق تقدم كبير في مجال البحوث الأوعية الدموية في العقود الماضية باستخدام نماذج مثل micropocket القرنية ، والغشاء فرخ مشيمائي ، والمقايسات SC Matrigel المكونات ، والتي هي أدوات مفيدة لكنها محدودة في نهاية المطاف. التطبيقات السريرية في المستقبل من العلاجات المضادة للعائية وعائية الموالية - يستلزم إنشاء والتحقق من صحة أكثر حساسية وأهمية من الناحية البيولوجية ، ونماذج ما قبل السريرية الكمية حقا ، مثل تلك التي وصفها في التقرير الحالي.

مخازن والكواشف 0.5 حل M - تريس حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.8) المخزون يذوب تريس (hydroxymethyl) aminomethan (60،57 غ) في ماء مقطر ~ 900 مل ويضاف ~ 45 مل من حمض الهيدروكلوريك 25 ٪ (تركزت) لتحقيق درجة الحموضة 7.8 تليها لتمييع 1 ليتر ماء مقطر مع. تريس العازلة المالحة (TBS ، الرقم الهيدروجيني 7.8) يضاف الى 200 مل من محلول كلوريد الصوديوم الاسهم 18 ز المذابة في ماء مقطر ~ 1800 مل مع تعديل الرقم الهيدروجيني إلى 7.8 باستخدام محلول المخزون ، تليها التخفيف إلى 2 لتر ماء مقطر مع. TBS (الرقم الهيدروجيني 7.4) يضاف الى 200 مل من محلول كلوريد الصوديوم الاسهم 18 ز الذائبة في المذابة في ماء مقطر ~ 1800 مل مع تعديل الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام محلول المخزون ، تليها التخفيف إلى 2 لتر ماء مقطر مع. التربسين الحل (0.05 ٪ التربسين ، 0.1 ٪ CaCl 2) يحتوي على 0.1 و 0.2 التربسين ز ز 2 CaCl في TBS 200 مل (7.8 درجة الحموضة). حل السكروز 2.5 ٪ يحتوي على 5 غرام في السكروز TBS 200 مل (7.8 درجة الحموضة). محلول المخزون من أزيد الصوديوم 1 ٪ في TBS (الرقم الهيدروجيني 7.4) يحتوي على 1 غرام نا آزيد في 100 مل مع TBS (الرقم الهيدروجيني 7.4). تمييع العازلة : 0.1 ٪ BSA ، 0.01 ٪ نا آزيد (مستعملة لإضعاف الأجسام المضادة في عدة Vectastain ABC). يحتوي على 0.1 غ ألبومين المصل البقري (BSA) و 1 مل من 1 ٪ نا آزيد ، مخففة الى 100 مل مع TBS (الرقم الهيدروجيني 7.4). ABC مجموعة Vectastain PK 4002 ، ABC البيروكسيداز الماوس مفتش مصل طبيعي الحصان ؛ حجب المصل ؛ حل الصفراء : 3 مل التخفيف drops/10 العازلة. Biotinylated الأجسام المضادة ، ومكافحة الفأر مفتش ؛ حل الزرقاء : 1 تخفيف مل drop/10 العازلة. ABC - الكاشف : حل البرتقالي (2) ، بالإضافة إلى قطرات البني الحل 2 مل drops/10 TBS (الرقم الهيدروجيني 7.4). مزيج هذه الحلول قبل 20 دقيقة من الاستخدام! الماوس (وحيدة النسيلة) لمكافحة الفئران البطانة (بيوسورس الدولية ، كاماريللو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كتالوج # </td><td> ARU0181 </td></tr><tr><td> استنساخ # </td><td> OX MRC - 43 </td></tr></tbody></table> يتم توجيه هذه الأجسام المضادة ضد خلايا بطانة الأوعية الدموية في جميع الفئران وذلك باستثناء تلك الموجودة في الدماغ. Vectastain البيروكسيداز أفيدين البيوتين مجمع (ABC) طقم طقم يحتوي جسم الابتدائي ، الثانوي biotinylated الأضداد ، أفيدين - biotinylated مجمع انزيم (ABC) ، والركيزة الانزيم. انظر <a href="http://www.vectorlabs.com/">www.vectorlabs.com</a> أو <a href="http://www.immunkemi.se/">www.immunkemi.se</a> عن البروتوكولات. ألبومين المصل البقري (BSA) (سيغما الدريخ ، وأنواع # A - 4503). DAB = 3،3 &#39;- Diaminobenzidine Isopac (سيغما الدريخ ، وأنواع # D 9015). التربسين من البنكرياس البقري (سيغما الدريخ ، وأنواع # T 4665). Vectastain البيروكسيداز ABC - عدة ، الفأر مفتش (Immunkemi F &amp; D AB ، Jarfalla ، السويد)

rat mesentery angiogenesis assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Watch this Scientific Journal Video about Rat Mesentery Angiogenesis Assay at JoVE.com

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

لم تكن طبيعية نسيج أوعية دموية الكبار الثدييات التي تفتقر الأوعية الدموية الفسيولوجية والتي تتعرض لتدخل جراحي يستخدم لدراسة : (ط) بدء وتطوير الأوعية الدموية داخل الصفاق التالية من وكلاء الإدارة الاختبار ، و (ب) تعديل الأوعية الدموية التالية للادارة الشاملة اختيار وكلاء الاختبار.

الفئران الفحص مساريق الأوعية الدموية

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

كريستوفر هيوز : حدث في نموذج المختبر لدراسة الأوعية الدموية (مقابلة)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

الفحص الأمثل الفايبرين الخرزة جل لدراسة الأوعية الدموية

Angiogenesis is a complex multi-step process, where, in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature.  These ...

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

عضوي النمط من الثقافة شريحة أدمغة الفئران E18

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

رسم الخرائط البصرية القلوب الجرذ Langendorff - perfused

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

زرع الأنسجة المهندسة في قلب فأر

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

الابتدائية ثقافة الكبار Myocytes قلب فأر

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

العزلة والثقافة الأساسي في الخلايا الكبدية الجرذ

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

جرذ الاهتمام لأمور ظاهرية مساريق: نموذج للتحقيق في حيوية الخلوي شارك في الأوعية الدموية

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

البطانية أنبوب تشكيل خلية الفحص ل<em&gt; في المختبر</em&gt; دراسة الأوعية الدموية

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

تروية دقيقة التقنية المعنية بالتحقيق في تنظيم Microvessel النفاذية في الفئران مساريق

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...