Name: rat mesentery angiogenesis assay
Uploaded: 2011-06-18T14:00:00
Duration: 18 min 30 s
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पढ़ाई के अधिकांश के लिए वित्तीय सहायता स्वीडिश चिकित्सा अनुसंधान परिषद (5942 अनुदान) द्वारा प्रदान किया गया.

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	<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+angiogenesis.">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+testing+with+angiogenesis+models.">Drug testing with angiogenesis models.</a> Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).</li><li>Norrby, K., Jakobsson, A., Sorbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast-cell-mediated+angiogenesis:+a+novel+experimental+model+using+the+rat+mesentery.">Mast-cell-mediated angiogenesis: a novel experimental model using the rat mesentery.</a> Virchows Arch. B Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. 52, 195-206 (1986).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cells+and+angiogenesis.">Mast cells and angiogenesis.</a> APMIS. 110, 355-371 (2002).</li><li>Albertsson, P., Lennernas, B., Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+meteronomic+chemotherapy:+modulation+of+angiogenesis+mediated+by+VEGF-A.">On meteronomic chemotherapy: modulation of angiogenesis mediated by VEGF-A.</a> Acta Oncol. 45, 144-155 (2006).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apo-lactoferrin+enhances+angiogenesis+mediated+by+vascular+endothelial+growth+factor+A+in+vivo.">Human apo-lactoferrin enhances angiogenesis mediated by vascular endothelial growth factor A in vivo.</a> J. Vasc. Res. 41, 293-304 (2004).</li><li>Norrby, K., Mattsby-Baltzer, I., Innocenti, M., &amp;amp, T. u. n. e. b. e. r. g., S, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orally+administered+bovine+lactoferrin+systemically+inhibits+VEGF(165)-mediated+angiogenesis+in+the+rat.">Orally administered bovine lactoferrin systemically inhibits VEGF(165)-mediated angiogenesis in the rat.</a> Int. J. Cancer. 91, 236-240 (2001).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-molecular-weight+heparins+and+angiogenesis.">Low-molecular-weight heparins and angiogenesis.</a> APMIS. 114, 79-102 (2006).</li><li>Norrby, K., Nordenhem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dalteparin,+a+low-molecular-weight+heparin,+promotes+angiogenesis+mediated+by+heparin-binding+VEGF-A+in+vivo.">Dalteparin, a low-molecular-weight heparin, promotes angiogenesis mediated by heparin-binding VEGF-A in vivo.</a> APMIS. 118, 949-957 (2010).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis.">Basic fibroblast growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res.. 48, 96-113 (1994).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis.">Vascular endothelial growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 51, 153-163 (1996).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+density+in+terms+of+number+and+length+of+microvessel+segments+per+unit+tissue+volume+in+mammalian+angiogenesis.">Microvascular density in terms of number and length of microvessel segments per unit tissue volume in mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 55, 43-53 (1998).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

परख तीन +१९८६ में पेश किया गया था और क्रमिक आगे और विकसित किया गया है हमारे 7,10-12 प्रयोगशाला में परिष्कृत. समीक्षा कागजात (आमंत्रित) 1, 2 में चर्चा की, अन्य स्तनधारी परख के साथ अच्छी तरह से vivo angiogenesis परख में संबंध में तुलना natively विशेष रूप से वयस्क परीक्षण के ऊतकों जैसे महत्वपूर्ण सुविधाओं है vascularized और शारीरिक angiogenesis का अभाव है , कम से कम आघात है, यदि कोई हो, ऊतक पर दिए गए, वास्तव में मात्रात्मक चर मापा जो ध्वनि सांख्यिकीय खुराक - प्रतिक्रिया और आणविक गतिविधि अध्ययन के बारे में विश्लेषण की अनुमति देता है, अंकुरण angiogenesis होता है, जो सामान्य ऊतकों और ट्यूमर में predominating है, और विषाक्तता डेटा चूहों कि robustly बढ़ने में आसानी से जमा कर रहे हैं physiologically वयस्कता में. हानिकर सुविधाओं के तथ्य यह है कि परख अपेक्षाकृत समय लेने वाली है, खासकर जब और व्यक्तिगत microvessel क्षेत्रों और microvessel अंकुरित की संख्या की लंबाई का आकलन शामिल हो सकते हैं, कि यह real-time/serial टिप्पणियों की अनुमति नहीं है, और है कि यह शायद ही चूहों के लिए उपयुक्त है के बाद चूहों में कई mesenteric खिड़कियों संभावित माता पिता microvessels कमी से नया capillaries पैदा कर सकते हैं. वास्तविक समय टिप्पणियों, लेकिन कर रहे हैं, जहां exteriorized लेकिन बरकरार mesenteric खिड़कियां एक खुर्दबीन मंच पर बाहर splayed हैं, जबकि पशु anesthetized है, के रूप में 1 में चर्चा intravital माइक्रोस्कोपी द्वारा सक्षम है. Corneal micropocket, लड़की chorioallantoic झिल्ली, और सुप्रीम कोर्ट Matrigel प्लग assays है, जो उपयोगी है, लेकिन अंततः सीमित उपकरण हैं जैसे मॉडल का उपयोग कर पिछले दशकों में angiogenesis अनुसंधान के क्षेत्र में उल्लेखनीय प्रगति हासिल किया गया है. विरोधी angiogenic और समर्थक angiogenic चिकित्सा के भविष्य के नैदानिक ​​अनुप्रयोगों स्थापना और अधिक संवेदनशील और biologically प्रासंगिक है, वास्तव में मात्रात्मक वर्तमान रिपोर्ट में वर्णित के रूप में पूर्व नैदानिक ​​मॉडल, के सत्यापन की जरूरत है.

Buffers और अभिकर्मकों 0.5 Tris - एचसीएल एम (7.8 पीएच) के शेयर समाधान Tris (hydroxymethyl) aminomethan (60.57 ग्राम) ~ 900 मिलीलीटर पानी dest में भंग कर रहा है और ~ 25% (केंद्रित) एचसीएल का 45 मिलीलीटर के लिए 7.8 पीएच कमजोर पड़ने द्वारा एक्वा dest साथ 1 लीटर के बाद प्राप्त करने के लिए जोड़ा जाता है. Tris बफर खारा (टीबीएस, पीएच 7.8) शेयर समाधान के करने के लिए 200 मिलीलीटर जोड़ा जाता है 18 छ NaCl 7.8 पीएच के समायोजन शेयर समाधान, एक्वा dest के साथ 2 लीटर करने के लिए कमजोर पड़ने के बाद का उपयोग कर के साथ ~ 1800 मिलीलीटर पानी dest में भंग. टीबीएस (पीएच 7.4) करने के लिए 200 मिलीलीटर शेयर समाधान के लिए जी 18 में 7.4 पीएच के समायोजन शेयर समाधान, एक्वा dest के साथ 2 लीटर करने के लिए कमजोर पड़ने के बाद का उपयोग कर के साथ ~ 1800 मिलीलीटर पानी dest में भंग भंग NaCl जोड़ा जाता है. Trypsin समाधान (0.05% trypsin, 0.1% 2 CaCl) 0.1 छ trypsin और 200 मिलीलीटर टीबीएस (7.8 पीएच) में 0.2 छ CaCl 2 शामिल हैं. Sucrose समाधान 2.5% 5 200 मिलीलीटर टीबीएस (7.8 पीएच) में छ sucrose शामिल है. % 1 टीबीएस में सोडियम azide (7.4 पीएच) के शेयर समाधान 1 100 मिलीलीटर में ना azide टीबीएस (7.4 पीएच) के साथ जी शामिल हैं. बफर गिराए: 0.1% BSA, 0.01% ना के azide (Vectastain एबीसी किट में एंटीबॉडी कमजोर प्रयुक्त). छ 0.1 गोजातीय सीरम (BSA) albumin और 1% ना के azide के 1 मिलीलीटर, 100 मिलीलीटर टीबीएस (7.4 पीएच) के साथ पतला शामिल हैं. एबीसी किट Vectastain पीके 4002, एबीसी peroxidase माउस आईजीजी सामान्य घोड़े सीरम, अवरुद्ध सीरम, पीला समाधान: 3 drops/10 मिलीलीटर कमजोर पड़ने बफर. Biotinylated एंटीबॉडी, नीले समाधान; विरोधी माउस आईजीजी: 1 drop/10 मिलीलीटर कमजोर पड़ने बफर. एबीसी अभिकर्मक: नारंगी समाधान, 2 बूँदें प्लस भूरे रंग के 2 drops/10 मिलीलीटर टीबीएस (7.4 पीएच) समाधान. इन समाधानों का उपयोग करने से पहले 20 मिनट मिक्स! माउस मोनोक्लोनल () विरोधी चूहे endothelium (BioSource इंटरनेशनल, Camarillo, सीए, अमरीका) <table border="1"><tbody><tr><td> # सूचि </td><td> ARU0181 </td></tr><tr><td> क्लोन # </td><td> MRC बैल - 43 </td></tr></tbody></table> इस एंटीबॉडी चूहे में सभी संवहनी endothelial कोशिकाओं के खिलाफ निर्देशित है मस्तिष्क में उन लोगों के अपवाद के साथ. Vectastain peroxidase Avidin बायोटिन (एबीसी) परिसर किट किट प्राथमिक एंटीबॉडी, biotinylated माध्यमिक एंटीबॉडी, avidin biotinylated एंजाइम जटिल (एबीसी), और एंजाइम सब्सट्रेट शामिल हैं. देखें <a href="http://www.vectorlabs.com/">www.vectorlabs.com</a> या <a href="http://www.immunkemi.se/">www.immunkemi.se</a> प्रोटोकॉल के लिए. गोजातीय सीरम albumin (BSA) (सिग्मा Aldrich सूची # A-4503). थपका = 3,3 &#39;Diaminobenzidine Isopac (सिग्मा Aldrich, 9015 सूची # डी). गोजातीय अग्न्याशय (सिग्मा Aldrich, # कैटलॉग 4665 टी) से trypsin. Vectastain peroxidase एबीसी किट, माउस आईजीजी (Immunkemi एफ एंड डी एबी, Jarfalla, स्वीडन)

rat mesentery angiogenesis assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

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Rat Mesentery Angiogenesis Assay

सामान्य वयस्क vascularized स्तनधारी ऊतक कि शारीरिक angiogenesis और उस का अभाव शल्य चिकित्सा का अध्ययन किया है हस्तक्षेप करने के लिए उजागर नहीं किया गया: (i) दीक्षा और परीक्षण एजेंटों के intraperitoneal प्रशासन निम्नलिखित angiogenesis के विकास, और (ii) angiogenesis के प्रणालीगत प्रशासन के बाद संशोधन परीक्षण एजेंट चुना गया.

चूहा अन्त्रपेशी Angiogenesis परख

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

क्रिस्टोफर ह्यूजेस: एक Angiogenesis के अध्ययन के लिए इन विट्रो मॉडल में (साक्षात्कार)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

Angiogenesis के अध्ययन के लिए अनुकूलित आतंच जेल मनका परख

Angiogenesis is a complex multi-step process, where, in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature.  These ...

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

E18 चूहे के दिमाग के Organotypic स्लाइस संस्कृति

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

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Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

इंजीनियर ऊतक के चूहा दिल में आरोपण

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

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Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

अलगाव और चूहा यकृत कोशिकाओं की प्राथमिक संस्कृति

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

चूहा अन्त्रपेशी बाह्यीकरण: सेलुलर angiogenesis में शामिल गतिशीलता जांच के लिए एक मॉडल

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

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Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

के लिए endothelial सेल ट्यूब गठन परख<em&gt; इन विट्रो</em&gt; Angiogenesis के अध्ययन

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Microperfusion तकनीक चूहा अन्त्रपेशी में microvessel पारगम्यता के नियमन जांच

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...