Name: rat mesentery angiogenesis assay
Uploaded: 2011-06-18T14:00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rat Mesentery Angiogenesis Assay at JoVE.com

Финансовую поддержку для большинства исследований были предоставлены шведским Советом по медицинским исследованиям (грант 5942).

<ol>
	<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+angiogenesis.">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+testing+with+angiogenesis+models.">Drug testing with angiogenesis models.</a> Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).</li><li>Norrby, K., Jakobsson, A., Sorbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast-cell-mediated+angiogenesis:+a+novel+experimental+model+using+the+rat+mesentery.">Mast-cell-mediated angiogenesis: a novel experimental model using the rat mesentery.</a> Virchows Arch. B Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. 52, 195-206 (1986).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cells+and+angiogenesis.">Mast cells and angiogenesis.</a> APMIS. 110, 355-371 (2002).</li><li>Albertsson, P., Lennernas, B., Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+meteronomic+chemotherapy:+modulation+of+angiogenesis+mediated+by+VEGF-A.">On meteronomic chemotherapy: modulation of angiogenesis mediated by VEGF-A.</a> Acta Oncol. 45, 144-155 (2006).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+apo-lactoferrin+enhances+angiogenesis+mediated+by+vascular+endothelial+growth+factor+A+in+vivo.">Human apo-lactoferrin enhances angiogenesis mediated by vascular endothelial growth factor A in vivo.</a> J. Vasc. Res. 41, 293-304 (2004).</li><li>Norrby, K., Mattsby-Baltzer, I., Innocenti, M., &amp;amp, T. u. n. e. b. e. r. g., S, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orally+administered+bovine+lactoferrin+systemically+inhibits+VEGF(165)-mediated+angiogenesis+in+the+rat.">Orally administered bovine lactoferrin systemically inhibits VEGF(165)-mediated angiogenesis in the rat.</a> Int. J. Cancer. 91, 236-240 (2001).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-molecular-weight+heparins+and+angiogenesis.">Low-molecular-weight heparins and angiogenesis.</a> APMIS. 114, 79-102 (2006).</li><li>Norrby, K., Nordenhem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dalteparin,+a+low-molecular-weight+heparin,+promotes+angiogenesis+mediated+by+heparin-binding+VEGF-A+in+vivo.">Dalteparin, a low-molecular-weight heparin, promotes angiogenesis mediated by heparin-binding VEGF-A in vivo.</a> APMIS. 118, 949-957 (2010).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis.">Basic fibroblast growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res.. 48, 96-113 (1994).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis.">Vascular endothelial growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 51, 153-163 (1996).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+density+in+terms+of+number+and+length+of+microvessel+segments+per+unit+tissue+volume+in+mammalian+angiogenesis.">Microvascular density in terms of number and length of microvessel segments per unit tissue volume in mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 55, 43-53 (1998).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Анализ был введен в 1986 году и имеет 3 последовательно получили дальнейшее развитие и уточнение в нашей лаборатории 7,10-12. Как отмечалось в обзорных статьях (приглашен) 1, 2, анализа сравнивает хорошо с других млекопитающих в естественных условиях анализа ангиогенеза в отношении особенно важны такие функции, как взрослые ткани тест изначально васкуляризированной и недостатки физиологического ангиогенеза; минимальные травмы, если таковые имеются, нанесенных ткани; действительно количественные переменные измерены, которая позволяет звуковой статистический анализ по доза-реакция и молекулярно-активность исследований; прорастания кровеносных сосудов происходит, который преобладает в нормальных тканях и опухолей, а также данных о токсичности легко накапливаются в крысах, которые растут энергично физиологически во взрослом возрасте. Невыгодные особенности могут включать то, что анализ является сравнительно много времени, особенно при оценке количества и длины отдельных сегментов капилляров и микрососудов ростки, что оно не позволяет real-time/serial наблюдений, и что она вряд ли подойдет для мышей так как многие брыжеечной окнами у мышей отсутствие потенциальных микрососудов родителей, из которых новые капилляры могут возникать. В режиме реального времени наблюдения, однако, включены по прижизненной микроскопии, где экстериоризируется но нетронутыми брыжеечной окна растопыренными над столике микроскопа в то время как животное под наркозом, как описано в 1. Значительные достижения в области ангиогенеза исследования были достигнуты в последние десятилетия с использованием моделей, таких как роговицы micropocket, цыпленок chorioallantoic мембраны, и подкожно анализов Матригель вилки, которые являются полезными, но в конечном счете, ограниченные средства. Будущее клинического применения антиангиогенного и проангиогенных терапии необходимость создания и проверки более чувствительным и биологически значимым, по-настоящему количественные доклинических моделях, например, описанный в настоящем докладе.

Буферы и реагенты 0,5 М Трис-HCl (рН 7,8) исходного раствора Трис (гидроксиметил) aminomethan (60,57 г) растворяют в ~ 900 мл аква Dest и ~ 45 мл 25% HCl (концентрированный) добавляется для достижения рН 7,8 с последующим разбавлением до 1 литра аква Dest. Трис-буфер физиологического раствора (TBS, рН 7,8) К 200 мл исходного раствора добавляют 18 г NaCl, растворенных в ~ 1800 мл аква Dest с регулировкой рН до 7,8 использованием маточного раствора, с последующим разбавлением до 2 л с аква Dest. TBS (рН 7,4) К 200 мл исходного раствора добавляют 18 г NaCl, растворенных в растворяется в ~ 1800 мл аква Dest с регулировкой рН до 7,4 использованием маточного раствора, с последующим разбавлением до 2 л с аква Dest. Трипсин раствора (0,05% трипсина, 0,1% CaCl 2) Содержит 0,1 г трипсина и 0,2 г CaCl 2 в 200 мл TBS (рН 7,8). Раствором сахарозы 2,5% Содержит 5 г сахарозы в 200 мл TBS (рН 7,8). Исходный раствор 1% натрия азид в TBS (рН 7,4) Содержит в 1 г Na-азид в 100 мл с TBS (рН 7,4). Разводящий буфер: 0,1% BSA, 0,01% Na-азид (Используется для разбавления антител в Vectastain ABC комплект). Содержит 0,1 г бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 1 мл 1% Na-азид, разбавленный до 100 мл TBS (рН 7,4). ABC комплект Vectastain PK 4002, ABC пероксидазы мышь IgG Нормальной лошадиной сыворотки; блокирование сыворотке крови; желтый раствор: 3 drops/10 мл буфером для разведения. Биотинилированные антител, анти-IgG мыши, синий раствор: 1 мл drop/10 буфером для разведения. ABC-реагент: оранжевый раствор, 2 капли плюс коричневый раствор 2 мл drops/10 TBS (рН 7,4). Смешайте эти решения за 20 минут до использования! Мышь (моноклональные) анти-крыса эндотелия (Биосурс International, Camarillo, Калифорния, США) <table border="1"><tbody><tr><td> Каталог # </td><td> ARU0181 </td></tr><tr><td> Клон # </td><td> MRC ОХ-43 </td></tr></tbody></table> Это антитело направлено против всех сосудистых эндотелиальных клеток у крыс, за исключением тех, в головном мозге. Vectastain пероксидазой авидин Биотин комплекса (ABC) комплект Набор состоит из первичного антитела, биотинилированного вторичными антителами, авидин-биотинилированного ферментный комплекс (ABC), и фермента субстратом. Смотрите <a href="http://www.vectorlabs.com/">www.vectorlabs.com</a> или <a href="http://www.immunkemi.se/">www.immunkemi.se</a> для протоколов. Бычий сывороточный альбумин (BSA) (Sigma-Aldrich, каталог #-4503). DAB = 3,3 &#39;-диаминобензидина Isopac (Sigma-Aldrich, каталог # D 9015). Трипсин из бычьей поджелудочной железы (Sigma-Aldrich, каталог № Т 4665). Vectastain пероксидазы ABC-кит, мышь IgG (Immunkemi F &amp; D AB, Jarfalla, Швеция)

rat mesentery angiogenesis assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Watch this Scientific Journal Video about Rat Mesentery Angiogenesis Assay at JoVE.com

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

Нормальный взрослый васкуляризированной ткани млекопитающих, что не хватает физиологических ангиогенеза и который не подвергался хирургическому вмешательству используется для изучения: (я) возникновение и развитие ангиогенеза после внутрибрюшинного введения тестовых агентов, и (II) изменение ангиогенеза следующие системные администрации выбранного теста агентов.

Крыса Брыжейка Ангиогенез Пробирной

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

Кристофер Хьюз: в пробирке модель для изучения ангиогенеза (Интервью)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

Оптимизированная фибринового геля из бисера тест для изучения ангиогенеза

Angiogenesis is a complex multi-step process, where, in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature.  These ...

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

Органотипической культуре Кусочек E18 Мозги крысы

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

Оптический Картирование Langendorff-перфузии сердца крысы

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Имплантация Engineered ткани в сердце крысы

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Первичные культуры взрослых Миоциты сердца крысы

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Выделение и первичной культуре клеток крысы Печеночная

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Крысы Брыжейка экстериоризации: модель для исследования Клеточная динамика, вовлеченных в ангиогенез

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

Эндотелия Формирование Анализ сотового трубка для<em&gt; In Vitro</em&gt; Изучение ангиогенеза

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Microperfusion Техника по расследованию Правила микрососудов проницаемость у крыс брыжейки

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...