Name: immunohistochemistry: paraffin sections using the vectastain abc kit from vector labs
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00
Duration: 21 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs at JoVE.com

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> تلطيخ أقسام البارافين </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dewax الشرائح مع الزيلين (فيشر X3 <sup>S</sup> -4) 3X لمدة 5 دقائق لكل منها (الزيلين تغيير كل شهر اعتمادا على الاستخدام والزيلين والسامة). أدلى استخدام الأطباق ويغطي لمدة 20 شرائح من المرجع فيشر 08-812 - 1A ورفوف لاحتواء هذه الأطباق. 200 مل السائل في الطبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هيدرات من خلال التدرج الكحول على النحو التالي (تغيير التدرج كل أسبوعين 2) : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2X في الإيثانول بنسبة 100 ٪ (فيشر # A406 - 20) لمدة 2 دقيقة لكل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2X في الإيثانول 95 ٪ لمدة 2 دقيقة لكل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X في الإيثانول 70 ٪ لمدة 2 دقيقة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X في الإيثانول 50 ٪ لمدة 2 دقيقة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X في الإيثانول 30 ٪ لمدة 2 دقيقة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X DDH <sub>2</sub> O 2 دقيقة عن </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع في DPBS لمدة 5 دقائق (DPBS = الفوسفات Dulbecco لتعديل التخزين المؤقت المالحة مع الكالسيوم والمغنيسيوم <sup>2 + 2 +).</sup> </li></ol><p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> مستضد الاسترداد : </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الحرارة العازلة نا السيترات (10 ملم ، ودرجة الحموضة 6.5) في فرن الميكروويف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طهي الشرائح لمدة 15 دقيقة في فرن الميكروويف. وينبغي أن الشرائح أبدا الجافة حتى تحقق كل دقيقة وإضافة نا السيترات عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لتبرد في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كتلة نشاط البيروكسيديز الذاتية مع 1 ٪ H <sub>2</sub> O <sub>2</sub> في DPBS لمدة 20 دقيقة (1.5 مل من الأسهم 30 ٪ سيغما H - 1009 في DPBS مل 50). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع في 3 DPBS 5 دقائق س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كتلة غير محددة المواقع التي يحتضنها بين عشية وضحاها في +4 درجة مئوية في المصل البقري DPBS + 5 ٪ الزلال (BSA) + 0.1 ٪ + أزيد الصوديوم 5 ٪ المصل. <em><br /></em> <br /> ملاحظة : اختيار المصل سوف يعتمد على الأنواع التي أدلى تستخدم لتلوين الأجسام المضادة. كتلة مع المصل من الأنواع التي تم فيها أب الثانوية (مترافق لالبيوتين). إذا كان هذا غير متوفر ، واستخدام المصل من فصيلة مختلفة عن تلك التي كان أدلى آب الابتدائي. <br /> <em><br /></em> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حجب المواقع البيوتين مع عدة حظر أفيدين / البيوتين (ناقلات المختبرات كتالوج # SP - 2001) : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع D أفيدين لمدة 15 دقيقة. شطف لفترة وجيزة مع DPBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع الحل البيوتين لمدة 15 دقيقة. </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في احتضان أب الأولية لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة ، في DPBS + 2 ٪ NaAzide + 0.1 ٪ + BSA 2 ٪ المصل (نفس الخطوة لحجب). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع في 3 PBS 5 دقائق س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع أب الثانوية مترافق مع البيوتين لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة في DPBS + 2 ٪ BSA + 0.1 ٪ + 2 نا آزيد ٪ المصل (نفس المستخدمة في خطوة حجب). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ABC كاشف في نفس الوقت لأنها لتطوير ما لا يقل عن 30 دقيقة قبل الاستخدام! (انظر المواد) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير في أنبوب مخروطي 50 مل. DPBS في 15 مل (أي مصل ، ولا أزيد) إضافة 3 قطرات من كاشف ألف ، وإضافة مزيج 3 قطرات من وباء كاشف المزيج. تجنب الضغط على الزجاجات والتريث لينخفض ​​إلى شكل من تلقاء نفسها. ABC مجموعة Vectastain PK - 6100 من مختبرات المتجهات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع في 3 DPBS 5 دقائق س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع كاشف ABC عن 30-45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع في 3 DPBS 5 دقائق س. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد الركيزة البيروكسيداز DAB (ناقلات مختبرات # SK - 4100) في 5 مل O <sub>2</sub> DDH في قارورة زجاجية <strong>على الفور قبل استخدامه</strong> (انظر المواد) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 قطرات من محلول المخزون الاحتياطي ، ومزيج </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4 قطرات من DAB ، مزيج من (يجب أن تصبح بنية اللون قليلا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطرات 2 H <sub>2</sub> O <sub>2</sub> ، مزيج </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انخفاض الركيزة DAB على أعلى الشرائح ومشاهدة لتلطيخ البني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الشرائح في الثلج + ماء الحنفية لوقف التفاعل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشطف تحت ماء الصنبور البارد لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملون مباين مع الهيماتوكسيلين (20 ثانية ؛ فيشر CS401 - D) وشطف في مياه الحنفية حتى يأتي الماء واضحا بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى من خلال التدرج كحول الايثانول بدءا من 30 ٪ الى 100 ٪ من الإيثانول (2 دقيقة لكل منهما). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع في الزيلين 3 دقائق و 5 ×. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل مع Permount (فيشر # SP15 - 100) : وضعت بعض المقطع أعلاه على الشريحة واضغط ببطء على الباب مع ساترة دون فقاعات الهواء. لا تحرك ساترة حتى تجف تماما ، والتي تأخذ ~ 24 ساعة. </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Xylene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>X3S-4</td>
<td>Change xylene every month depending on use. Xylene is TOXIC.</td>
</tr>
<tr>
<td>100% ethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>A406-20</td>
<td>Use to make EtOH gradient.</td>
</tr>
<tr>
<td>DPBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dulbecco&#x2019;s modified Phosphate Buffered Saline WITH Ca2+ and Mg2+</td>
</tr>
<tr>
<td>Na-Citrate buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>10 mM, pH 6.5</td>
</tr>
<tr>
<td>H2O2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H-1009</td>
<td>30% stock => Dilute to 1% in DPBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Blocking solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DPBS + 5% bovine serum albumin (BSA) + 0.1% Na Azide + 5% serum. </td>
</tr>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Azide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NaAzide</td>
</tr>
<tr>
<td>avidin/biotin blocking kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector laboratories</td>
<td>SP-2001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ab buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DPBS + 2% BSA +  0.1% Na Azide + 2% serum (same as used for the blocking step)</td>
</tr>
<tr>
<td>ABC kit Vectastain PK-6100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAB peroxidase substrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>SK-4100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ddH2O</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hematoxylin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>CS401-D</td>
<td>counterstain</td>
</tr>
<tr>
<td>Permount</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>SP15-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slides and cover-slips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>glass</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

immunohistochemistry: paraffin sections using the vectastain abc kit from vector labs

<p class="jove_content">المناعية (IHC) هي تقنية تستخدم لحصر قيمة / تصور بروتين تعبير في قسم الأنسجة المركبة باستخدام الاجسام المضادة المحددة. هناك طريقتين : الطريقة المباشرة وغير المباشرة. في هذه التجربة ، فإننا سوف تصف فقط استخدام تلطيخ IHC غير المباشرة. IHC غير المباشرة تلطيخ يستخدم محددة للغاية الأضداد الابتدائي والثانوي والبيوتين مترافق. وتستخدم الأجسام المضادة الأولية لتحديد البروتينات بتحفظ الاهتمام من جانب ملزم لحاتمة محددة ، في حين أن الأجسام المضادة الثانوية طرح لتلوين الخلفية غير محددة وتضخيم إشارة من خلال تشكيل المجمعات إلى الضد الابتدائي. إما أن تكون شرائح المتولدة من الفروع المجمدة ، وجزءا لا يتجزأ من البارافين أو المقاطع التي شنت على الشرائح الزجاجية. في هذا البروتوكول ، نناقش إعداد المقاطع البارافين مضمن بواسطة الماء ، dewaxing باستخدام التدرج الكحول ، واسترجاع الحرارة الناجمة عن مستضد ، وعرقلة النشاط البيروكسيداز المحلية والمنظمات غير محددة المواقع ملزمة. هي ملطخة ثم بعض المقاطع مع الأجسام المضادة المحددة للعلامة الخلايا التائية CD8 وبينما البعض الآخر لالملون هيدروكسيلاز التيروزين. بعد ذلك يتم التعامل مع الشرائح الأجسام المضادة الثانوية المناسبة لمترافق البيوتين ، ثم تطورت باستخدام أفيدين - مترافق البيروكسيداز الفجل (HRP) مع Diaminiobenzidine (DAB) والركيزة. التالية التنمية ، هي counterstained الشرائح للالنقيض من ذلك ، والتي شنت تحت coverslips مع permount. بعد تجفيف كافية ، وهذه الشرائح هي ثم جاهزة للتصوير.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs at JoVE.com

Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

المناعية : أقسام البارافين باستخدام ABC Vectastain مجموعة من مختبرات المتجهات

Immunohistochemistry (IHC) is a valuable technique utilized to localize/visualize protein expression in a mounted tissue section using specific ...

Research

JoVE Journal

Biology

Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit

تنقية DNA البلازميد من المستعمرات البكتيرية باستخدام Miniprep Qiagen كيت

Plasmid DNA purification from E. coli is a core technique for molecular cloning. Small scale purification (miniprep) from less than 5 ml of bacterial ...

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

تخصيب خلايا NK من دم الانسان مع مجموعة من تقنيات RosetteSep StemCell

Natural killer (NK) cells are large granular cytotoxic lymphocytes that belong to the innate immune system and play major roles in fighting against cancer ...

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

استخراج خلايا الحمض النووي الريبي من Neuroprecursor باستخدام بيو راد إجمالي RNA كيت

Immunohistochemistry on Paraffin Sections of Mouse Epidermis Using Fluorescent Antibodies

المناعية على أقسام البارافين للبشرة باستخدام الماوس أجسام نيون

In the epidermis, immunohistochemistry is an efficient means of localizing specific proteins to their relative expression compartment; namely the basal, ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of <em>Drosophila</em> Adult Muscles

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

البارافين ، جزءا لا يتجزأ من والمجمدة أقسام<em> ذبابة الفاكهة</emالعضلات الكبار>

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

استخراج الحمض النووي من مادة البارافين جزءا لا يتجزأ من التحليلات الجينية واللا جيني

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

الماوس حفظ بالبرودة والانتعاش الحيوانات المنوية باستخدام · لقد كرو كيت

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Using the STEMCCA Lentiviral Vector

جيل من صنع الإنسان من الخلايا الجذعية المحفزة الدموية المحيطية باستخدام Lentiviral STEMCCA المتجهات

Through the ectopic expression of four transcription factors, Oct4, Klf4, Sox2 and cMyc, human somatic cells can be converted to a pluripotent state, ...

Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

الكشف عن أشكال معدلة من السيتوزين عن طريق الحساسة المناعية

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

بروتوكول الآلي السريع لالعضلات تحليل الألياف السكان في الجرذ العضلات المقاطع العرضية عن طريق سلسلة الميوسين الثقيلة المناعية

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...