Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Het beschreven project werd ondersteund door Grant nummer R01HD050725 van het National Institute of Child Health and Human Development aan TAG De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en niet noodzakelijkerwijs het officiële standpunt van het National Institute of Child Health and Human Development of de National Institutes of Health. Wij danken de leden van de Godenschwege lab als Barbara Schreader voor hun inbreng aan het manuscript en video.

1. Dissectie van de ventrale zenuw snoer Dissectie en kleurstof vullen van de GF kan worden uitgevoerd bij kamertemperatuur. Voor alle dissectie stappen koud (4 ° C) zoutoplossing moet worden gebruikt om vertragen de celstofwisseling en langer houden de neuronen in leven. <ol><li> Verdoven volwassen vliegen (4 dagen of ouder) met CO 2 of chill ze op ijs totdat ze geïmmobiliseerd. Verlamming met ijs zal meer tijd nodig (tot 30 min), maar zorgt ervoor dat de vliegen geïmmobilis...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

Het zenuwstelsel kan worden ontleed zonder extraheren uit de vlieg lichaam. Dit heeft twee voordelen, ten eerste de dissectie veroorzaakt weinig schade aan het zenuwstelsel, en ten tweede, de meeste zenuwen aangesloten blijven op de spieren en de zintuigen. Het uitvoeren van de dissectie, zoals beschreven, bereidt het monster voor rechttoe rechtaan dye-etikettering van de SBO. Handig is dat de motoneuronen postsynaptische om de GFS aangesloten blijven op de spieren. Axonen, dus onbeschadigd zijn, houden van de neuronen ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Silicone elastomeer Kit </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissection Microscoop </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Schaar Superfijn </td><td> Academische Instrumenten </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Forceps Dumontstar 55 </td><td> Fijn Science Tools </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Austerlitz Insect pinnen </td><td> Fijn Science Tools </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0.1mm </td></tr><tr><td> Borosilicaatglas Elektroden </td><td> Wereld precisie-instrumenten </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Verticale Pipetteer Puller 700c </td><td> David Kopf Instrumenten </td><td> Model 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifer Yellow CH dilithium zout </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% in H 2 O </td></tr><tr><td> Vast Stage Upright Microscoop &amp; Camera </td><td> Nikon </td><td> FN-1 &amp; DS-U2 Camera </td><td></td></tr><tr><td> Plan Fluor 10X Air Doelstelling </td><td> Nikon </td><td> CFI Plan Fluor 10x NA 0.3 WD 16mm </td><td></td></tr><tr><td> Fluor 40X water dompelen Doelstelling </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40X W NA 0,80 WD 2.0mm </td><td></td></tr><tr><td> 3D-hydraulische micromanipulator </td><td> Narishige International </td><td> Model MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Versterker </td><td> Getting Instruments, Inc </td><td> Model 5A </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Het analyseren van de axonale en dendritische morfologie van neuronen, is het essentieel om het verkrijgen juiste etikettering van neuronale structuren. Goed voorbereid te zijn gelabeld monsters met weinig tot geen beschadiging van het weefsel stelt ons in staat celmorfologie te analyseren en aan de individuele monsters met elkaar te vergelijken, vandaar waardoor de identificatie van mutant afwijkingen. In de aangetoonde methode dissectie van het zenuwstelsel blijft overwegend binnen de volwassen vlieg. Via een dorsale incisie, de buik en borstkas geopend en het merendeel van de interne organen zijn verwijderd. Alleen de dorsale zijde van de ventrale zenuw snoer (VNC) en de cervicale verbindende (CVC) met de grote axonen van de reus vezels (SBO) 1 worden blootgesteld, terwijl de hersenen met de GF cellichaam en dendrieten blijft 2 in de intacte kop . In deze voorbereiding de meeste zenuwen van de VNC moeten blijven gehecht aan hun spieren. Na de dissectie, is de intracellulaire vullen van de reus vezel (GF) met een fluorescerende kleurstof gedemonstreerd. In de CVC de GF axonen bevinden zich op het dorsale oppervlak en kan dus eenvoudig worden gevisualiseerd onder een microscoop met differentieel interferentie contrast (DIC) optiek. Hierdoor kan de injectie van de GF axonen met kleurstof op deze site te labelen de gehele GF inclusief de axonen en hun terminals in de VNC. Deze methode resulteert in een betrouwbare en sterke kleuring van de SBO waardoor de neuronen direct worden afgebeeld na het vullen van een epifluorescerende microscoop. Als alternatief kan het fluorescerende signaal worden verbeterd met behulp van standaard immunohistochemie procedures 3 geschikt voor hoge resolutie confocale microscopie.

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Een<em&gt; In vivo</em&gt; Dissectie van de volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Ventrale zenuw koord (VNC) is aangetoond. Deze bijzondere dissectie methode veroorzaakt weinig schade aan de VNC waardoor de daaropvolgende etikettering van de reus vezel neuronen met fluorescerende kleurstof voor hoge resolutie imaging.

Hele Mount Voorbereiding van de Adult Drosophila Ventraal Nerve Fiber Koord voor Giant Dye Injectie

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualisatie van de embryonale zenuwstelsel in zijn geheel-mount Drosophila Embryo&#39;s

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Elektrofysiologische opnames van de Giant Fiber Pathway van D. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Gekoppelde Nanoinjection en Elektrofysiologie test voor het screenen op bioactiviteit van verbindingen met behulp van de Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproduceerbare Mouse heupzenuw Crush en de daaropvolgende beoordeling van Regeneratie door Whole Mount Muscle Analyse

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

Dii-Etikettering van de DRG neuronen om Study Axonale Vertakkingen in een hele berg Voorbereiding van muis embryonale ruggenmerg

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissectie van de Transversus Abdominis Spier voor Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hele Mount immunolabeling van olfactorische receptor neuronen in de<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenne

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Adult Mouse spier-zenuw Voorbereiding voor het bestuderen van de Firing Eigenschappen van Muscle afferenten

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hele Mount Dissection en Immunofluorescentie van de Adult Mouse Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

De Voorbereiding van de Oblique Spinal Cord Slices voor Ventral Root Stimulation

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...