Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Le projet décrit a été soutenue par la concession numéro R01HD050725 de l&#39;Institut national de la santé infantile et le développement humain de baliser le contenu est exclusivement la responsabilité de leurs auteurs et ne représentent pas nécessairement les vues officielles de l&#39;Institut national de la santé infantile et du développement humain ou de la National Institutes of Health. Nous remercions les membres du laboratoire Godenschwege ainsi que Barbara Schreader pour leur contribution au manuscrit et vidéo.

1. Dissection de la corde nerveuse ventrale Dissection et de teinture de remplissage de la GF peut être effectuée à température ambiante. Pour tous les dissections étapes froid (4 ° C) une solution saline devrait être utilisé pour ralentir le métabolisme cellulaire et de garder les neurones en vie plus longtemps. <ol><li> Anesthetize mouches adultes (4 jours ou plus) avec CO 2 ou les refroidir sur glace jusqu&#39;à ce qu&#39;ils soient immobilisés. Anesthésier avec d...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

Le système nerveux peut être disséqués sans l&#39;extraire du corps de la mouche. Cela a deux avantages, d&#39;abord, la dissection cause peu de dommages au système nerveux et, deuxièmement, la plupart des nerfs restent attachés à des muscles et des organes sensoriels. Exécution de la dissection, comme décrit, prépare l&#39;échantillon pour simple colorant d&#39;étiquetage de la SFP. Idéalement, les motoneurones postsynaptiques au GFS rester attaché aux muscles. Les axones, par conséquent, ne sont pas en...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Kit élastomère de silicone </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscope à dissection </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Ciseaux Superfine </td><td> Instruments académique </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Pince Dumont Dumontstar 55 </td><td> Outils Fine Science </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Broches insectes Austerlitz </td><td> Outils Fine Science </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0,1 mm </td></tr><tr><td> Les électrodes de verre borosilicate </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Verticale pipette Extracteur 700c </td><td> David Kopf Instruments </td><td> Modèle 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifer Yellow CH dilithium sel </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% dans H 2 O </td></tr><tr><td> Microscope scène fixe vertical et appareil photo </td><td> Nikon </td><td> FN-1 et DS-U2 Caméra </td><td></td></tr><tr><td> Objectif du Plan Fluor Air 10X </td><td> Nikon </td><td> FCI plan Fluor 10X NA 0,3 16mm DEO </td><td></td></tr><tr><td> Fluor 40X eau plongeant Objectif </td><td> Nikon </td><td> FCI Fluor 40X W NA 0,80 DEO 2.0mm </td><td></td></tr><tr><td> 3D Micromanipulateur hydrauliques </td><td> Narishige international </td><td> Modèle MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificateur </td><td> Obtenir Instruments, Inc </td><td> Modèle 5A </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Pour analyser la morphologie axonale et dendritique des neurones, il est essentiel d&#39;obtenir un étiquetage précis des structures neuronales. Préparation des échantillons bien étiquetés avec peu ou pas endommager les tissus nous permet d&#39;analyser la morphologie des cellules et de comparer des échantillons individuels les uns aux autres, permettant ainsi l&#39;identification des anomalies mutant. Dans la méthode de dissection démontré le système nerveux reste le plus souvent à l&#39;intérieur de la mouche adulte. Grâce à une incision dorsale, l&#39;abdomen et le thorax sont ouverts et la plupart des organes internes sont enlevés. Seule la face dorsale de la moelle nerveuse ventrale (VNC) et le connectif cervical (CVC) qui contient les axones des fibres grands géants (GFS) 1 sont exposées, tandis que le cerveau contenant le corps cellulaire et des dendrites GF reste deux dans la tête intacte . Dans cette préparation la plupart des nerfs de la VNC doit rester attachés à leurs muscles. Après la dissection, le remplissage intracellulaire de la fibre géante (GF) avec un colorant fluorescent est démontrée. Dans le CVC les axones GF sont situés à la surface dorsale et peut donc être facilement visualisés au microscope à contraste d&#39;interférence différentiel (DIC) optique. Cela permet l&#39;injection du colorant axones GF avec ce site à l&#39;étiquette du GF entier, y compris les axones et leurs terminaux dans le VNC. Cette méthode aboutit à coloration solide et fiable de l&#39;ETG permettant aux neurones à imager immédiatement après le remplissage avec un microscope à épifluorescence. Alternativement, le signal fluorescent peut être améliorée en utilisant des procédures standard de 3 immunohistochimie adapté à la microscopie confocale à haute résolution.

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Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Une<em&gt; In vivo</emDissection&gt; de l&#39;adulte<em&gt; Drosophile</emCordon&gt; nerveuse ventrale (VNC) est démontrée. Cette méthode de dissection particulier provoque peu de dégâts à l&#39;VNC permettant l&#39;étiquetage ultérieur de la fibre de neurones géants avec un colorant fluorescent pour l&#39;imagerie haute résolution.

Préparation Mont entiers de l&#39;Adulte Drosophile Chaîne nerveuse ventrale pour injection fibre Dye Géant

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

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La visualisation du système nerveux embryonnaire, en totalité montage Drosophile Embryons

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Recherche

Neurosciences

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

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Enregistrements électrophysiologiques de la voie des fibres Géant de D. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

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Nanoinjection paires et test d&#39;électrophysiologie à l&#39;écran de la bioactivité des composés en utilisant le Drosophila melanogaster Système de fibre géant

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

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Reproductible écrasement du nerf sciatique de souris et l&#39;évaluation subséquente de la régénération par l&#39;analyse du Mont muscle entier

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DII-étiquetage des neurones DRG pour l&#39;étude de branchement axonal dans une préparation Mont entiers de souris embryonnaires de la moelle épinière

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

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Dissection du muscle Transversus Abdominis pour l’analyse de jonction neuromusculaire à montage entier

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

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Tout le mont immunomarquage des récepteurs olfactifs neurones dans le<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenne

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

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Un<em&gt; In Vitro</emMuscle-nerf&gt; Adult Souris Préparation pour étudier les propriétés de cuisson des afférences musculaires

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Mont entiers Dissection et immunofluorescence de la cochlée de souris adultes

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

La Préparation de la moelle épinière Oblique tranches pour ventral Racine Stimulation

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...