Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Il progetto descritto è stato sostenuto dal Codice di Autorizzazione R01HD050725 dal National Institute of Child Health e lo Sviluppo Umano di TAG Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente la posizione ufficiale del National Institute of Child Health e Sviluppo Umano o il National Institutes of Health. Ringraziamo i membri del laboratorio Godenschwege così come Barbara Schreader per il loro contributo al manoscritto e video.

1. Dissezione del cordone nervoso ventrale Dissezione e tintura di riempimento del GF può essere effettuata a temperatura ambiente. Per tutti dissezione steps freddo (4 ° C) soluzione salina dovrebbe essere usato per rallentare il metabolismo cellulare e mantenere in vita i neuroni più a lungo. <ol><li> Anestetizzare le mosche adulte (4 giorni o più) con CO 2 o freddo li su ghiaccio fino a che non sono immobilizzati. Anestesia con ghiaccio richiederà più tempo (fino a 30 m...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

Il sistema nervoso può essere sezionati senza estrarre dal corpo volare. Questo ha due vantaggi, in primo luogo, la dissezione provoca pochi danni al sistema nervoso, e la seconda, più i nervi per rimanere attaccati i muscoli e gli organi sensoriali. Esecuzione della dissezione, come descritto, si prepara il campione per dritto in avanti tintura di etichettatura del GF. Per comodità, i motoneuroni postsinaptica al GF rimanere attaccati ai muscoli. Assoni, quindi, non sono danneggiati, mantenendo in vita i neuroni pi?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del reagente </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Kit silicone elastomero </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissezione Microscopio </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vännäs Forbici Superfine </td><td> Strumenti accademico </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Pinza Dumontstar 55 </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Austerlitz insetti perni </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0,1 millimetri </td></tr><tr><td> Elettrodi di vetro borosilicato </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Verticale Pipettare Puller 700c </td><td> David Kopf Instruments </td><td> Modello 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifero Giallo CH dilitio sale </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% in H 2 O </td></tr><tr><td> Fase Microscopio fisso verticale &amp; Camera </td><td> Nikon </td><td> FN-1 e DS-U2 Telecamera </td><td></td></tr><tr><td> Piano Fluor Obiettivo Air 10X </td><td> Nikon </td><td> CFI Plan Fluor 10X NA 16 millimetri 0,3 WD </td><td></td></tr><tr><td> Acqua Fluor 40X Obiettivo immersione </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40X W NA 0,80 WD 2,0 millimetri </td><td></td></tr><tr><td> 3D Micromanipolatore idraulico </td><td> Narishige internazionale </td><td> Modello MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificatore </td><td> Come Instruments, Inc. </td><td> Modello 5A </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Per analizzare la morfologia assonali e dendritiche dei neuroni è essenziale per ottenere un&#39;accurata etichettatura delle strutture neuronali. Preparazione dei campioni ben etichettati con poco o nessun danno ai tessuti ci permette di analizzare la morfologia cellulare e di confrontare singoli campioni l&#39;uno all&#39;altro, permettendo quindi l&#39;identificazione di anomalie mutante. Nel metodo dissezione dimostrato il sistema nervoso rimane per lo più all&#39;interno della mosca adulta. Attraverso una incisione dorsale, l&#39;addome e il torace sono aperti e la maggior parte degli organi interni vengono rimossi. Solo il lato dorsale del cordone nervoso ventrale (VNC) e il connettivo cervicale (CVC) contenente gli assoni grande delle fibre giganti (GF) 1 sono esposte, mentre il cervello che contiene il corpo cellulare GF e dendriti rimane 2 in testa intatta . In questa preparazione più nervi of the VNC dovrebbe rimanere attaccati alla loro muscoli. Dopo la dissezione, il riempimento intracellulare della fibra gigante (GF) con un colorante fluorescente è dimostrata. Nel CVC gli assoni GF si trovano sulla superficie dorsale e quindi possono essere facilmente visualizzati al microscopio con contrasto di interferenza differenziale (DIC) ottica. Questo permette l&#39;iniezione degli assoni GF con colorante in questo sito per etichettare il GF intero compreso gli assoni e la loro terminali nel VNC. Questo metodo si traduce in colorazione affidabile e forte del GF che permette ai neuroni di essere ripreso immediatamente dopo il riempimento con un microscopio epifluorescente. In alternativa, il segnale fluorescente può essere migliorata utilizzando procedure di immunoistochimica standard 3 adatto per la microscopia confocale ad alta risoluzione.

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Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Un<em&gt; In vivo</emDissezione&gt; dell&#39;adulto<em&gt; Drosophila</emCordone nervoso&gt; ventrale (VNC) è dimostrata. Questo metodo di dissezione particolare provoca pochi danni alla VNC che permette l&#39;etichettatura successivo dei neuroni fibra gigante con colorante fluorescente per l&#39;imaging ad alta risoluzione.

Monte Preparazione tutto il Adulti Drosophila Cordone nervoso ventrale per iniezione Giant Dye Fibra

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