Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

O projeto descrito foi apoiada pelo Grant Número R01HD050725 do Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano para TAG O conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam, necessariamente, a posição oficial do Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano ou a National Institutes of Health. Agradecemos a membros do laboratório Godenschwege bem como Schreader Barbara para a sua entrada para o manuscrito e vídeo.

1. Dissecção do cordão nervoso ventral Dissecção e corante preenchimento da GF pode ser realizada à temperatura ambiente. Para todas as etapas de dissecção fria (4 ° C) solução salina deve ser usado para desacelerar o metabolismo celular e manter os neurônios vivos por mais tempo. <ol><li> Anestesiar moscas adultas (4 dias ou mais) com CO 2 ou chill-los no gelo até que eles são imobilizados. Anestesiando com gelo vai exigir mais tempo (até 30 min), mas irá manter...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

O sistema nervoso pode ser dissecada sem extraí-lo do corpo da mosca. Isso tem duas vantagens, primeiro, a dissecção causa pouco dano ao sistema nervoso e, segundo, a maioria dos nervos ficar ligado para os músculos e órgãos sensoriais. Realizar a dissecção, como descrito, prepara a amostra para a frente de corante rotulagem do FG. Convenientemente, os motoneurônios pós-sináptico para o FG ficar ligado para os músculos. Axônios, portanto, não estão danificados, mantendo os neurônios vivos por mais tempo....

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Kit de elastômero de silicone </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscópio dissecção </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Superfine Tesoura </td><td> Instrumentos acadêmica </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Pinça Dumont Dumontstar 55 </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Insect pinos Austerlitz </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0,1 milímetros </td></tr><tr><td> Eletrodos de vidro de borosilicato </td><td> Precision Instruments mundo </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Vertical Pipetar Puller 700c </td><td> David Kopf Instruments </td><td> Modelo 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifer Yellow CH dilithium sal </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% em H 2 O </td></tr><tr><td> Microscópio Stage fixo Upright &amp; Camera </td><td> Nikon </td><td> FN-1 e DS-U2 Câmera </td><td></td></tr><tr><td> Plano de Fluor Objetivo Air 10X </td><td> Nikon </td><td> CFI Plano Fluor 10X NA 0,3 WD 16 milímetros </td><td></td></tr><tr><td> Fluor água 40X mergulhando Objetivo </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40X W NA 0,80 WD 2,0 milímetros </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulador hidráulico 3D </td><td> Narishige Internacional </td><td> Modelo MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificador </td><td> Ficando Instruments, Inc. </td><td> 5A modelo </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Para analisar a morfologia axonal e dendríticas dos neurônios, é essencial para obter a rotulagem exacta de estruturas neuronais. Preparação de amostras bem rotulados com pouco ou nenhum dano tecidual nos permite analisar a morfologia das células e comparar amostras individuais entre si, permitindo assim a identificação de anomalias mutantes. No método de dissecação demonstrou o sistema nervoso permanece na maior parte dentro da mosca adulta. Através de uma incisão dorsal, abdome e tórax são abertas ea maioria dos órgãos internos são removidos. Apenas o lado dorsal da medula nervosa ventral (VNC) e do conjuntivo cervical (CVC), que contém os axônios das fibras grandes gigantes (FG) 1 estão expostos, enquanto o cérebro com o corpo celular e dendritos GF 2 permanece na cabeça intacta . Nesta preparação mais nervos do VNC deve permanecer solidários com os seus músculos. Após a dissecção, o preenchimento intracelular da fibra gigante (GF) com um corante fluorescente é demonstrada. Na CVC os axônios GF estão localizados na superfície dorsal e, portanto, podem ser facilmente visualizadas em um microscópio com contraste de interferência diferencial (DIC) óptica. Isto permite a injeção de axônios GF com corante neste site para rotular o GF inteiro, incluindo os axônios e os terminais na VNC. Este método resulta em coloração confiável e forte da FG permitindo que os neurônios a ser trabalhada imediatamente após o enchimento com um microscópio de epifluorescência. Alternativamente, o sinal fluorescente pode ser melhorada através de procedimentos imuno-histoquímica padrão de 3 adequado para microscopia confocal de alta resolução.

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Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Um<em&gt; In vivo</em&gt; Dissecção do adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; Cordão nervoso ventral (VNC) é demonstrada. Este método de dissecação em particular cause poucos danos ao VNC permitindo a rotulagem subseqüentes dos neurônios fibra gigante com tinta fluorescente para imagens em alta resolução.

Preparação Monte todo o Adulto Drosophila Cordão nervoso ventral para injeção gigante de fibra Dye

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualização do Sistema Nervoso embrionárias no Whole-mount Drosophila Os embriões

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Neurociência

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

As gravações eletrofisiológicas da via fibra Gigante da D. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Nanoinjection emparelhado e Eletrofisiologia Ensaio para a tela de bioatividade dos compostos utilizando os Drosophila melanogaster Sistema Fibra Gigante

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

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Reprodutível mouse esmagamento do nervo ciático e subsequente avaliação de Regeneração por Análise Whole Mount muscular

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DII-rotulagem de neurônios DRG para estudar em uma ramificação axonal Preparação Monte Whole of Mouse Embryonic Spinal Cord

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

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