Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Проекта, описанного была поддержана грантом Количество R01HD050725 из Национального института детского здоровья и человеческого развития, TAG содержание несут их авторы и не обязательно отражает официальную точку зрения Национального института детского здоровья и человеческого развития или Национальный институт здоровья. Мы благодарим членов лаборатории Godenschwege а также Барбара Schreader к их участию в рукописи и видео.

1. Рассечение брюшной нервной Разбор и красителя заполнения GF могут быть выполнены при комнатной температуре. Для всех рассечение шаги холодного (4 ° С), солевой должны быть использованы для замедляют метаболизм клетки и держать нейронов живыми дольше. <ol><li> Обезболить в...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

Нервной системы можно разрезать, не извлекая его из летать тела. Это имеет два преимущества, во-первых, вскрытие причин незначительный ущерб нервной системе, во-вторых, большинство нервов пребывания придает мышц и органов чувств. Выполнение рассечение, как описано, готовит образец для ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> Sylgard 184 силиконового эластомера Kit </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Препарирование микроскоп </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Ножницы Superfine </td><td> Академические инструменты </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Дюмон Пинцет Dumontstar 55 </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Контакты Аустерлицем насекомых </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0,1 мм </td></tr><tr><td> Электроды из боросиликатного стекла </td><td> Инструменты Всемирного Precision </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Вертикальная Внесите Puller 700c </td><td> Дэвид Kopf инструменты </td><td> Модель 700C </td><td></td></tr><tr><td> Люцифер Желтый CH dilithium соли </td><td> Сигма </td><td> L0259 </td><td> 1% в H 2 O </td></tr><tr><td> Исправлена ​​этап прямой микроскоп и камера </td><td> Nikon </td><td> FN-1 и DS-U2 камеры </td><td></td></tr><tr><td> Plan Fluor 10X Цель воздуха </td><td> Nikon </td><td> CFI Plan Fluor 10X NA 0,3 WD 16 мм </td><td></td></tr><tr><td> Ярко-40X воды погружения Цель </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40X NA 0,80 Вт WD 2,0 мм </td><td></td></tr><tr><td> 3D гидравлического микроманипулятора </td><td> Международный Narishige </td><td> Модель MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Усилитель </td><td> Получение Instruments, Inc </td><td> Модель 5А </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Для анализа аксонального и дендритные морфологии нейронов, крайне важно получить точную маркировку нейронных структур. Подготовка и помечены образцы с практически нет повреждения тканей позволяет проанализировать морфологии клеток и сравнивать отдельные образцы друг с другом, следовательно, позволяющие идентификацию мутантных аномалий. В методе вскрытия показали нервной системы остается главным образом внутри взрослой мухи. Через спинной разрез брюшной полости и грудной клетки открыты, и большинство внутренних органов удаляются. Только спинной стороне брюшной нервной цепочки (VNC) и соединительной шейки (CVC), содержащих большое аксоны гигантских волокон (GFS) 1 подвергаются, в то время как мозг с телом Ф. клетки и дендриты остается 2 в нетронутыми голову . В этот препарат наиболее нервы VNC должна оставаться привязаны к своим мышцам. После вскрытия, внутриклеточные заполнение гигантского волокна (GF) с флуоресцентным красителем демонстрируется. В CVC GF аксонов расположены на спинной поверхности и тем самым могут быть легко визуализированы под микроскопом с дифференциалом интерференционного контраста (DIC) оптики. Это позволяет инъекции аксонов GF с красителем на этом сайте для обозначения всей GF включая аксонов и их терминалов в VNC. Этот метод приводит к надежным и сильным окрашивание GFs позволяет нейронам для включения в образ сразу же после заполнения epifluorescent микроскопом. Кроме того, флуоресцентный сигнал может быть усилен с помощью стандартных процедур иммуногистохимии 3 подходит для высокое разрешение конфокальной микроскопии.

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Рассечение взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt; Брюшной нервной цепочки (VNC) демонстрируется. Данный метод вскрытия причин незначительный ущерб VNC позволяет последующих маркировки гигантские нейроны волокна с флуоресцентным красителем для высоким разрешением.

Всего Подготовка горе взрослых Drosophila Брюшной нервной для инъекций Гигантские Dye Волоконно

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Визуализация Эмбриональные нервной системы в целом монтажа Drosophila Эмбрионы

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Электрофизиологические Записи из гигантских Путь волокна D. MELANOGASTER</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Парные Nanoinjection и электрофизиологии Анализ для выявления биологической активности соединений с использованием DROSOPHILA MELANOGASTER Гигантские системы волоконно

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Воспроизводимые мыши седалищного нерва и Давка Последующие оценки регенерации полного анализа горы мышц

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DII-маркировки DRG нейроны по изучению аксонального Ветвление в Всего Подготовка горе мышиных эмбриональных спинного мозга

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Рассечение мышц Transversus Abdominis для анализа нервно-мышечной развязки

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Всего Гора иммунного обонятельных рецепторов нейронов в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Антенны

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

<em&gt; In Vitro</em&gt; Взрослый мышь Muscle-нерв Подготовка к Изучая стрельбы Свойства Muscle афференты

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Всего горе Вскрытие и Иммунофлуоресценции взрослых мышей улитки

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

Получение Косой спинного мозга Ломтики для вентральных корешков стимуляции

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...