Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

El proyecto descrito fue apoyada por número de concesión R01HD050725 del Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano para etiquetar el contenido es de exclusiva responsabilidad de sus autores y no representa necesariamente las opiniones oficiales del Instituto Nacional de Salud Infantil y Desarrollo Humano o el Institutos Nacionales de Salud. Agradecemos a los miembros del laboratorio, así como Godenschwege Schreader Barbara por su aporte al manuscrito y video.

1. La disección de la cuerda ventral del nervio La disección y el tinte de llenado de la GF se puede realizar a temperatura ambiente. Para todos los pasos de la disección en frío (4 ° C) de solución salina se utiliza para disminuir el metabolismo celular y mantener las neuronas vivas por más tiempo. <ol><li> Anestesiar a las moscas adultas (4 días o más) con CO 2 o se ponen a enfriar en hielo hasta que se inmovilizan. Anestesia con hielo requerirá más tiempo (hasta 30...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

El sistema nervioso se puede diseccionar sin extraerlo del cuerpo volar. Esto tiene dos ventajas, en primer lugar, la disección causa poco daño al sistema nervioso, y en segundo lugar, la mayoría de los nervios permanecer conectados a los músculos y órganos sensoriales. Realización de la disección, como se describe, se prepara la muestra para el directo de tinte etiquetado de las finanzas públicas. Convenientemente, las motoneuronas postsináptica a la FC permanecer conectados a los músculos. Axones, por lo tan...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Kit de elastómero de silicona </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscopio de disección </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas tijeras superfinas </td><td> Instrumentos académicos </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Pinzas Dumontstar 55 </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Austerlitz alfileres de insectos </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0,1 mm </td></tr><tr><td> Los electrodos de vidrio borosilicato </td><td> Mundial de Instrumentos de Precisión </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Extractor vertical con una pipeta de 700c </td><td> David Kopf Instruments </td><td> Modelo 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifer Amarillo CH dilitio sal </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% en H 2 O </td></tr><tr><td> Microscopio de fase fija vertical y cámara </td><td> Nikon </td><td> FN-1 y la cámara DS-U2 </td><td></td></tr><tr><td> Plan Fluor Objetivo de aire 10 veces </td><td> Nikon </td><td> CFI Plan Fluor 10X NA 0.3 16 mm WD </td><td></td></tr><tr><td> Agua Fluor 40x Objetivo de inmersión </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40x W NA 0.80 WD 2.0mm </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulador hidráulica 3D </td><td> Narishige Internacional </td><td> Modelo MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificador </td><td> Cómo Instruments, Inc. </td><td> Modelo 5A </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Para analizar la morfología axonal y dendrítico de las neuronas, es esencial para obtener un correcto etiquetado de las estructuras neuronales. La preparación de muestras y etiquetado con poco o ningún daño a los tejidos nos permite analizar la morfología celular y para comparar las muestras individuales entre sí, permitiendo así la identificación de anomalías mutante. En el método de disección demostró que el sistema nervioso sigue siendo en su mayoría dentro de la mosca adulta. A través de una incisión dorsal, el abdomen y el tórax se abren y la mayor parte de los órganos internos son removidos. Sólo la parte dorsal del cordón nervioso ventral (VNC) y el conectivo cervical (CVC), que contiene los axones de las fibras grandes gigantes (FC) 1 se exponen, mientras que el cerebro contiene el cuerpo celular y las dendritas GF sigue siendo dos en la cabeza intacta . En esta preparación la mayoría de los nervios de la VNC debe permanecer unido a sus músculos. Después de la disección, el relleno intracelular de la fibra gigante (GF), con un tinte fluorescente se demuestra. En la CVC de los axones GF se encuentran en la superficie dorsal y por lo tanto pueden ser fácilmente visualizados con un microscopio con contraste de interferencia diferencial (DIC) óptica. Esto permite la inyección de los axones GF con el tinte en este sitio para la etiqueta del GF completo, incluyendo los axones y sus terminales en el VNC. Este método da lugar a manchas confiable y fuerte de la FC que permite a las neuronas para formar una imagen inmediatamente después del llenado con un microscopio de epifluorescencia. Por otra parte, la señal fluorescente se puede mejorar utilizando los métodos convencionales de inmunohistoquímica 3 adecuada para la microscopía confocal de alta resolución.

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Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Un<em&gt; In vivo</em&gt; La disección de los adultos<em&gt; Drosophila</emCable&gt; nervioso ventral (VNC) se demuestra. Este método de disección en particular causa pocos daños en el VNC que permite el posterior marcado de las neuronas de fibra gigante con tinte fluorescente para obtener imágenes de alta resolución.

Preparación Todo el montaje del Adulto Drosophila Cordón nervioso ventral para inyección gigante tinte de fibra

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualización del sistema nervioso embrionario en Todo el montaje Drosophila Los embriones

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Investigación

Neurociencias

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Registros electrofisiológicos de la ruta de fibra gigante de D. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Nanoinjection parejas y Ensayo de electrofisiología para la detección de bioactividad de compuestos utilizando el Drosophila melanogaster Sistema de fibra gigante

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Ratón reproducible aplastamiento del nervio ciático y posterior evaluación de la regeneración mediante el análisis de músculo entero Monte

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DII-etiquetado de las neuronas DRG para el Estudio de ramificación axonal en una preparación Todo el montaje del cable del ratón embrionario espinal

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Disección Del Músculo Transverso Abdominis Para El Análisis De La Unión Neuromuscular De Montaje Completo

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Todo el montaje de Immunolabeling olfativa del receptor de las neuronas en el<em&gt; Drosophila</em&gt; Antena

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Mouse Adulto Preparación músculo-nervio para estudiar las propiedades de cocción de los aferentes musculares

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Todo el montaje La disección y de inmunofluorescencia del Adulto ratón cóclea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

La Preparación de oblicua de la médula espinal ventral de segmentos para Root Estimulación

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...