Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Projektet beskrivs stöddes av licensnummer R01HD050725 från National Institute of Child Health and Human Development för att märka innehållet är uteslutande ansvarig för författare och inte nödvändigtvis representerar officiella ståndpunkter National Institute of Child Health och Human Development eller National Institutes of Health. Vi tackar medlemmar Godenschwege labbet samt Barbara Schreader för deras bidrag till manuskriptet och video.

1. Dissekering av den ventrala nerv sladden Dissektion och färg fyllning av GF kan utföras vid rumstemperatur. För alla dissektion steg kyla (4 ° C) koksaltlösning bör användas för att bromsa cellernas ämnesomsättning och hålla nervceller vid liv längre. <ol><li> Bedöva vuxna flugor (4 dagar eller äldre) med CO 2 eller kyla dem på is tills de är orörlig. Anesthetizing med is kommer att kräva mer tid (upp till 30 min) men kommer att hålla flugorna orörlig unde...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

Nervsystemet kan dissekeras utan att ta bort det från flugan kroppen. Detta har två fördelar, först orsakar dissektion små skador på nervsystemet, och för det andra, de flesta nerverna vara kopplad till muskler och sinnesorgan. Utföra dissekering, enligt beskrivningen, förbereder provet för rakt fram dye-märkning av GF. Bekvämt, de motoneurons postsynaptiska till GF förbli anslutna till musklerna. Axoner, därför är oskadade, hålla nervceller vid liv längre. Dessutom är skador på nervsystemet kommer a...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissection Mikroskop </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Saxar Superfine </td><td> Akademiska Instrument </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Tång Dumontstar 55 </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11.295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Austerlitz Insect stift </td><td> Fine Science Tools </td><td> 26.002-10 </td><td> Ø 0.1mm </td></tr><tr><td> Borosilikatglas Elektroder </td><td> Världen precisionsinstrument </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Vertikal Pipettera Puller 700C </td><td> David Kopf Instrument </td><td> Modell 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifer Gul CH dilithium salt </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% H 2 O </td></tr><tr><td> Fast Stage Upright mikroskop och kamera </td><td> Nikon </td><td> FN-1 och DS-U2 kamera </td><td></td></tr><tr><td> Plan Fluor 10X Air mål </td><td> Nikon </td><td> CFI Plan Fluor 10X NA 0,3 WD 16mm </td><td></td></tr><tr><td> Fluor 40X vatten doppning mål </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40X W NA 0,80 WD 2,0 mm </td><td></td></tr><tr><td> 3D-hydraulisk mikromanipulator </td><td> Narishige International </td><td> Modell MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Förstärkare </td><td> Komma Instruments, Inc. </td><td> Modell 5A </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Att analysera axonal och dendritiska morfologi av nervceller, är det viktigt att få en korrekt märkning av neuronala strukturer. Förbereda väl märkta prover med liten eller ingen vävnadsskada ger oss möjlighet att analysera cellmorfologin och jämföra enskilda prover med varandra, därav det möjligt att identifiera mutant anomalier. I den visade dissekeringsmetoden nervsystemet är mest inne i vuxen flyga. Genom en dorsal snitt, är buken och bröstkorgen öppnas och de flesta av de inre organen tas bort. Endast ryggsidan av den ventrala nerv sladd (VNC) och livmoderhalscancer bindväv (CVC) som innehåller den stora axoner i den gigantiska fibrer (GF) 1 är utsatta, medan hjärnan som innehåller GF cellkroppen och dendriter återstår 2 i den intakta huvudet . I denna beredning flesta nerver av VNC bör sitta kvar sina muskler. Efter dissektion, är den intracellulära fyllning av jätten fiber (GF) med en fluorescerande färg påvisas. I CVC GF axoner finns vid rygg-ytan och därmed lätt kan visualiseras i mikroskop med differential interferens kontrast (DIC) optik. Detta gör att injektionen av GF axoner med färg på denna webbplats för att märka hela GF inklusive axoner och deras terminaler i VNC. Metoden ger pålitlig och stark färgning av GF låta nervceller som ska avbildas direkt efter påfyllning av en epifluorescent mikroskop. Alternativt kan fluorescerande signalen förstärkas med hjälp av vanliga immunhistokemi procedurer 3 lämpar sig för hög upplösning konfokalmikroskopi.

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

En<em&gt; In vivo</em&gt; Dissekering av den vuxna<em&gt; Drosophila</em&gt; Ventrala nerv sladd (VNC) är påvisas. Denna speciella dissekeringsmetod orsakar små skador på VNC låta den efterföljande märkning av jätten fiber nervceller med fluorescerande färg för hög upplösning.

Hela berget Beredning av vuxna Drosophila På magen Nerve Snodd till Giant Fiber Dye Injection

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualisering av embryonala nervsystemet i hela-fäste Drosophila Embryon

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Elektrofysiologiska inspelningar från Giant Fiber stig D. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Kopplade Nanoinjection och elektrofysiologi analys för att undersöka Bioaktivitet hos föreningar med hjälp av Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproducerbar Mouse ischiasnerv krossa och påföljande bedömningen av Regeneration av Whole Mount Muscle Analys

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

Dii-märkning av DRG nervceller att Studera axonal Förgrening i en hel Mount Beredning av Mouse Embryonala ryggmärg

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissekering av Transversus Abdominis muskel för hela berget Neuromuskulär junction analys

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hela Mount immunomärkning av luktreceptor nervceller i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenn

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Ett<em&gt; In Vitro</em&gt; Adult Mouse Muskel-nerv Förberedelse för Studera Förbränningsegenskaper för Muscle afferenter

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hela Mount Dissekering och Immunofluorescence i vuxen mus Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

Beredning av Oblique ryggmärgs skivor för ventrala Root Stimulering

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...