Name: live imaging of dorsal root axons after rhizotomy
Uploaded: 2011-09-01T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy at JoVE.com

نشكر الدكتور ألان تسلر للتعليق عليها ومساعدة التحرير. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NS062320.

1. مجهر إعداد والتحضير والتصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدينا مجموعة التصوير وتتألف المجموعة من stereomicroscope MZ16 ايكا الفلورسنت مع مصراع الكاميرا بسرعة ويبرد CCD التي تسيطر عليها البرمجيات Metamorph. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد لوحة التحكم التدف...

<ol>
	<li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Watching+the+neuromuscular+junction.">Watching the neuromuscular junction.</a> J Neurocytol. 32, 767-775 (2003).</li><li>Bishop, D. L., Misgeld, T., Walsh, M. K., Gan, W. B., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+branch+removal+at+developing+synapses+by+axosome+shedding.">Axon branch removal at developing synapses by axosome shedding.</a> Neuron. 44, 651-661 (2004).</li><li>Balice-Gordon, R. J., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+visualization+of+the+growth+of+pre-+and+postsynaptic+elements+of+neuromuscular+junctions+in+the+mouse.">in vivo visualization of the growth of pre- and postsynaptic elements of neuromuscular junctions in the mouse.</a> J Neurosci. 10, 894-908 (1990).</li><li>Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vivo+imaging+of+experience-dependent+synaptic+plasticity+in+adult+cortex.">Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex.</a> Nature. 420, 788-794 (2002).</li><li>Pan, F., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+dendritic+spine+development+in+the+mouse+cortex.">Two-photon imaging of dendritic spine development in the mouse cortex.</a> Dev Neurobiol. 68, 771-778 (2008).</li><li>Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+synaptic+plasticity+and+pathology+in+the+living+mouse+brain.">Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain.</a> NeuroRx. 3, 489-496 (2006).</li><li>Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+axonal+degeneration+and+regeneration+in+the+injured+spinal+cord.">in vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord.</a> Nat Med. 11, 572-577 (2005).</li><li>Misgeld, T., Nikic, I., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+single+axons+in+the+mouse+spinal+cord.">in vivo imaging of single axons in the mouse spinal cord.</a> Nat Protoc. 2, 263-268 (2007).</li><li>Davalos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+in+vivo+imaging+of+densely+populated+glia,+axons+and+blood+vessels+in+the+mouse+spinal+cord+using+two-photon+microscopy.">Stable in vivo imaging of densely populated glia, axons and blood vessels in the mouse spinal cord using two-photon microscopy.</a> J Neurosci Methods. 169, 1-7 (2008).</li><li>Maio, D. D. i. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+dorsal+root+regeneration:+Rapid+immobilization+and+presynaptic+differentiation+at+the+CNS/PNS+border.">in vivo imaging of dorsal root regeneration: Rapid immobilization and presynaptic differentiation at the CNS/PNS border.</a> Journal of Neuroscience. 31, 4569-4582 (2011).</li></ol>

التصوير DR التجدد مباشرة في الفئران الحية تحديا من نوع خاص لأنه يتطلب استئصال الصفيحه كبيرة الظهرية لرصد النمو محوار على مساحة واسعة تليها إجراءات متعددة الغازية الجراحية والتخدير في جلسات التصوير لاحقة. وساعدت عدة استراتيجيات للتغلب على هذه التحديات. الأولى ، والت?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> H - خط thy1 YFP (2-4 أشهر من العمر ، أي من الجنسين) </td><td> مختبر جاكسون (بار هاربور ، ME) </td><td> 003782 </td><td></td></tr><tr><td> زيلازين (حقن AnaSed ، محلول معقم) </td><td> مختبرات لويد ، (شيناندواه ، LA) </td><td> 4811 </td><td> 8 ملغ / كغ </td></tr><tr><td> الكيتامين (حقن هيدروكلوريد الكيتامين ، USP) </td><td> هوسبيرا ، وشركة (ليك فورست ، IL) </td><td> 2051 </td><td> 120 ملغ / كغ </td></tr><tr><td> البوبرينورفين (Buprenex حقن) (0.05 ملغ / كلغ) </td><td> ريكيت بينكيزر الصيدلة (رمزها في ريتشموند ، فيرجينيا) </td><td> 7571 </td><td></td></tr><tr><td> الحيوانات الصغيرة كليبرز الشعر </td><td> اوستر الفنية ، (McMinnville ، TN) </td><td> 76059-030 </td><td></td></tr><tr><td> إزالة الشعر محلول </td><td> الكنيسة وشركاه دوايت (برينستون ، نيوجيرسي) </td><td> ناير النفط مع اطفال </td><td></td></tr><tr><td> الشاش الإسفنج </td><td> فيشر العلمية ، (بيتسبرغ ، السلطة الفلسطينية) </td><td> 22-362-173 </td><td></td></tr><tr><td> مسحات القطن ذات الرؤوس </td><td> فيشر العلمية ، (بيتسبرغ ، السلطة الفلسطينية) </td><td> 14-960 ، 3Q </td><td></td></tr><tr><td> 1 مل المحاقن </td><td> بيكتون ، ديكسون وشركة فرانكلين البحيرات ، ونيو جيرسي) </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr><td> تحت الجلد (الفرعية س) الإبر ، 26ga. </td><td> بيكتون ، وشركة ديكسون (فرانكلين البحيرات ، ونيو جيرسي) </td><td> 305115 </td><td></td></tr><tr><td> مقص وملقط الربيع </td><td> أدوات العلوم الدقيقة ، (فوستر سيتي ، كاليفورنيا) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2.5 ملم rongeurs المنحني </td><td> أدوات العلوم الدقيقة ، (فوستر سيتي ، كاليفورنيا) </td><td> 16221-14 </td><td></td></tr><tr><td> USP حقن Lactated رينغر </td><td> باء براون الطبية ، وشركة (ايرفين ، كاليفورنيا) </td><td> ببر - L7502 </td><td></td></tr><tr><td> محلول ملحي معقم </td><td> APP الصيدلة ، (شومبرغ ، IL) </td><td> 918610 </td><td></td></tr><tr><td> الغشاء الرقيق مصفوفة الاصطناعية (Biobrane) </td><td> Bertek الصيدلة ، (مورغانتاون ، WV) </td><td> 62794-096-251 </td><td></td></tr><tr><td> الاصطناعي الجافية </td><td> جور يستبعد دورا MVP البديل ، WL غور وشركاه ، و(فلاغستاف ، من الألف إلى الياء) </td><td> 1MVP40 </td><td></td></tr><tr><td> خيوط الحرير 5-0 </td><td> Ethicon ، وشركة (سوميرفيل ، ونيو جيرسي) </td><td> K - 580 </td><td></td></tr><tr><td> مقاطع الجرح </td><td> الكمال -- الترجمة Ets Bruneau (Burnea ، فرنسا) </td><td> A75 </td><td></td></tr><tr><td> فلوري stereomicroscope </td><td> لايكا مايكروسيستمز ، (يتزلا ، ألمانيا) </td><td> MZ16 </td><td></td></tr><tr><td> كاميرا CCD </td><td> هاماماتسو ، (بريدجووتر ، ونيو جيرسي) </td><td> ORCA - Rx2 </td><td></td></tr><tr><td> درجة الحرارة المراقب المالي </td><td> العالم الدقة الثمينة (ساراسوتا ، فلوريدا) </td><td> 1000 ATC </td><td></td></tr><tr><td> Metamorph البرمجيات </td><td> الأجهزة الجزيئية (سانيفيل كاليفورنيا) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> فوتوشوب </td><td> أدوبي سيستمز ، سان خوسيه ، كاليفورنيا </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

live imaging of dorsal root axons after rhizotomy

والمحاور الرئيسية الحسية أصيب إصابات العمود الفقري تفشل الجذرية على التجدد في النخاع الشوكي ، مما يؤدي إلى الألم المزمن وفقدان الحواس دائم. يتم منع تجديد الظهرية المحاوير (DR) الجذر في النخاع الشوكي في منطقة الجذر دخول الظهرية (DREZ) ، والتفاعل بين الجهاز العصبي المركزي والجهاز العصبي المحيطي. فهمنا من الأحداث الجزيئية والخلوية التي تمنع التجديد في DREZ غير مكتملة ، في جزء منه لأنه قد تم استنتاجها التغيرات المعقدة المرتبطة الاصابة العصبية من يحلل بعد الوفاة. يتم دراسة أفضل العمليات الخلوية الحيوية ، مثل تجديد المحور ، مع التقنيات التي التقاط الأحداث في الوقت الحقيقي مع ملاحظات متعددة من كل حيوان حي. وقد زاد من قدرتنا على رصد الخلايا العصبية في الجسم الحي بسبب متسلسل بشكل كبير على الابتكارات الثورية في علم البصريات والمعدلة وراثيا الماوس. عدة أسطر من الفئران المعدلة وراثيا thy1 - GFP ، الذي وصفت وراثيا مجموعات فرعية من الخلايا العصبية في الألوان الفلورية متميزة ، تسمح تصوير الخلايا العصبية الفردية في الجسم الحي 1. وقد استخدمت هذه الفئران على نطاق واسع في الجسم الحي لتصوير الدماغ والعضلات 2-4 5-7 ، وقدمت أفكارا جديدة في آليات الفسيولوجية التي لا يمكن أن يكون حل تحليلات ثابتة. دراسات التصوير من الخلايا العصبية في النخاع الشوكي الذين يعيشون في الآونة الأخيرة فقط بدأ. يختمن وزملاؤه أثبتت جدواها first عن طريق تتبع المصابين عمود الظهري (DC) مع المحاور واسعة المجال المجهري 8،9. الفوتون متعددة في مجال التصوير المجراة من محاور العاصمة وضعه بعمق ، الدبقية الصغيرة والأوعية الدموية كما تم إنجاز 10. على مدى السنوات القليلة الماضية ، ونحن كان لها السبق في تطبيق المجراة في مجال التصوير لرصد تجديد المحاوير DR باستخدام واسع المجال المجهري وH - خط thy1 YFP الفئران. وقد أدت هذه الدراسات لنا فرضية جديدة حول لماذا يمنعون من المحاور DR تجديد داخل الحبل الشوكي 11. في خط H - YFP من thy1 الفئران ، متوضعة بشكل سطحي متميزة YFP + المحاور ، الذي يسمح برصد محاور عدة في وقت واحد. تعلمنا أن يتم تصوير أفضل محاور DR صوله DREZ في الفقرات القطنية من العمود الفقري في عنق الرحم. في هذا التقرير عدة استراتيجيات وصفنا بأننا وجدنا من المفيد أن أؤكد التصوير ناجحة على المدى الطويل والمتكرر لتجديد المحاوير DR. وتشمل هذه الأساليب التي تقضي على التنبيب المتكررة وانقطاع التنفس ، وتقليل التوتر المصاحب لعملية جراحية وتشكيل ندبة ، والحصول على صور ثابتة بدرجة وضوح عالية دون الضيائية.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy at JoVE.com

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

و<em&gt; في الجسم الحي</emيوصف&gt; التصوير بروتوكول لرصد المحاور العصبية الحسية الأولية التالية سحق الجذرية الظهرية. إجراءات استخدام واسع الحقل المجهري مضان وthy1 - YFP الفئران المعدلة وراثيا ، والسماح التصوير المتكرر للتجديد لأكثر من 4 سم محور عصبي في الجهاز العصبي المحيطي والتفاعلات محوار مع واجهة للجهاز العصبي المركزي.

يعيش بين محاور التصوير الجذر الظهرية بعد بضع الجذور

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

مناعي لونين من الظهرية جذر الأنسجة العقد التالي من الإصابات محواري

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

دراسة وراثية من التجديد أكسون مع الكبار الظهرية مثقف الخلايا العصبية العقدة الجذر

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

تصوير لايف من النيكوتين المستحثة اشارة الكالسيوم وناقل عصبي الإصدار جنبا إلى جنب بطني الحصين المحاوير

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

الظهرية جذر حقن العقدة وظهري الجذر سحق إصابة نموذجا لالحسية أكسون التجديد

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

عزل العقد الجذرية الظهرية والثقافة الأولية لدراسة الإفراج عن ناقل عصبي

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Spectral Reflectometric Microscopy on Myelinated Axons In Situ

Spectral Reflectometric Microscopy on Myelinated Axons In Situ

مجهر ريفليكتوميتريك الطيفية على محاور عصبية ميليناتيد في الموقع

In a mammalian nervous system, myelin provides an electrical insulation by enwrapping the axon fibers in a multilayered spiral. Inspired by its ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

التحقيق إكسون الثدييات التجديد: في فيفو انهانسر من العقدة الجذر الظهرية الماوس الكبار

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

العزلة السريعة للضامة الجذرية الدجورة

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...

In Vitro Myelination of Peripheral Axons in a Coculture of Rat Dorsal Root Ganglion Explants and Schwann Cells

الميالين في المختبر للمحاور المحيطية في زراعة مشتركة لنباتات العقدة الجذرية الظهرية للفئران وخلايا شوان

The process of myelination is essential to enable rapid and sufficient signal transduction in the nervous system. In the peripheral nervous system, ...

Enrichment of Adult Mouse Dorsal Root Ganglia Neuron Cultures by Immunopanning

إثراء مزارع الخلايا العصبية للعقد الجذرية الظهرية للفأر البالغ عن طريق التحفيز المناعي

Dorsal root ganglia (DRGs) are peripheral structures adjacent to the dorsal horn of the spinal cord, which house the cell bodies of sensory neurons as ...