Name: live imaging of dorsal root axons after rhizotomy
Uploaded: 2011-09-01T12:00:00
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我々は、コメントと編集のヘルプは博士アランテスラーに感謝。この作品は、NIH NS062320によってサポートされていました。

1。セットアップ顕微鏡とイメージングの準備<ol><li>私たちのイメージングセットまでは、高速シャッターとMetamorphソフトウェアによって制御される冷却CCDカメラとライカMZ16蛍光実体顕微鏡で構成されています。 </li><li> ° C、動物の体温の間に、次の手術を維持するために、サーモスタット制御の加熱パッドを準備し、32.5に出力を調整します。 </li><li> 32.5℃まで手術中の脊髄の灌漑のため?...

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	<li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Watching+the+neuromuscular+junction.">Watching the neuromuscular junction.</a> J Neurocytol. 32, 767-775 (2003).</li><li>Bishop, D. L., Misgeld, T., Walsh, M. K., Gan, W. B., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+branch+removal+at+developing+synapses+by+axosome+shedding.">Axon branch removal at developing synapses by axosome shedding.</a> Neuron. 44, 651-661 (2004).</li><li>Balice-Gordon, R. J., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+visualization+of+the+growth+of+pre-+and+postsynaptic+elements+of+neuromuscular+junctions+in+the+mouse.">in vivo visualization of the growth of pre- and postsynaptic elements of neuromuscular junctions in the mouse.</a> J Neurosci. 10, 894-908 (1990).</li><li>Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vivo+imaging+of+experience-dependent+synaptic+plasticity+in+adult+cortex.">Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex.</a> Nature. 420, 788-794 (2002).</li><li>Pan, F., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+dendritic+spine+development+in+the+mouse+cortex.">Two-photon imaging of dendritic spine development in the mouse cortex.</a> Dev Neurobiol. 68, 771-778 (2008).</li><li>Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+synaptic+plasticity+and+pathology+in+the+living+mouse+brain.">Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain.</a> NeuroRx. 3, 489-496 (2006).</li><li>Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+axonal+degeneration+and+regeneration+in+the+injured+spinal+cord.">in vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord.</a> Nat Med. 11, 572-577 (2005).</li><li>Misgeld, T., Nikic, I., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+single+axons+in+the+mouse+spinal+cord.">in vivo imaging of single axons in the mouse spinal cord.</a> Nat Protoc. 2, 263-268 (2007).</li><li>Davalos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+in+vivo+imaging+of+densely+populated+glia,+axons+and+blood+vessels+in+the+mouse+spinal+cord+using+two-photon+microscopy.">Stable in vivo imaging of densely populated glia, axons and blood vessels in the mouse spinal cord using two-photon microscopy.</a> J Neurosci Methods. 169, 1-7 (2008).</li><li>Maio, D. D. i. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+dorsal+root+regeneration:+Rapid+immobilization+and+presynaptic+differentiation+at+the+CNS/PNS+border.">in vivo imaging of dorsal root regeneration: Rapid immobilization and presynaptic differentiation at the CNS/PNS border.</a> Journal of Neuroscience. 31, 4569-4582 (2011).</li></ol>

それはその後のイメージングセッションで複数の手術侵襲と麻酔薬の手続きが続く広範囲に軸索の成長を監視するためにかなりの背側椎弓切除を必要とするため、直接生きているマウスのイメージングDR再生は特に困難である。いくつかの戦略は、これらの課題を克服する助け。最初に、成功したイメージングは​​、麻酔や出血の持続期間を最小限に抑えることにより、マウスの死亡率を?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td> HラインTHY1 - YFP（2-4ヶ月齢、雌雄） </td><td>ジャクソン研究所（バーハーバー、ME） </td><td> 003782 </td><td></td></tr><tr><td>キシラジン（AnaSed注射、滅菌溶液） </td><td>ロイド研究所、（シェナンドア、LA） </td><td> 4811 </td><td> 8 mg / kgを</td></tr><tr><td>ケタミン（塩酸ケタミン注射、USP） </td><td>ホスピーラ社（レイクフォレスト、イリノイ州） </td><td> 2051 </td><td> 120 mg / kgの</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン（注射Buprenex）（0.05 mg / kg体重） </td><td>レキットベンキーザーティカルズ社（リッチモンド、バージニア州） </td><td> 7571 </td><td></td></tr><tr><td>小動物のバリカン</td><td>オスタープロフェッショナル、（マックミンヴィル、テネシー州） </td><td> 76059-030 </td><td></td></tr><tr><td>脱毛ローション</td><td>教会＆ドワイト共同（プリンストン、ニュージャージー州） </td><td>ベビーオイルとNairさん</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼのスポンジ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック、（ピッツバーグ、ペンシルバニア州） </td><td> 22-362-173 </td><td></td></tr><tr><td>綿棒</td><td>フィッシャーサイエンティフィック、（ピッツバーグ、ペンシルバニア州） </td><td> 14から960 - 3Q </td><td></td></tr><tr><td> 1 mLのシリンジ</td><td>ベクトン、ディクソンと会社フランクリンレイクス、ニュージャージー州） </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr><td>皮下（サブQ）針、26ga。 </td><td>ベクトン、ディクソンと会社（フランクリンレイクス、ニュージャージー州） </td><td> 305115 </td><td></td></tr><tr><td>春のはさみや鉗子</td><td>ファイン科学ツール、（フォスターシティ、カリフォルニア州） </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2.5 mmの湾曲したrongeurs </td><td>ファイン科学ツール、（フォスターシティ、カリフォルニア州） </td><td> 16221〜14 </td><td></td></tr><tr><td>乳酸加リンガー液USP </td><td> B. Braunはメディカル株式会社、（アーバイン、カリフォルニア州） </td><td> BBR - L7502 </td><td></td></tr><tr><td>滅菌生理食塩水</td><td> APPファーマシューティカル（シャンバーグ、イリノイ州） </td><td> 918610 </td><td></td></tr><tr><td>薄い合成マトリックス膜（Biobrane） </td><td> Bertek医薬品、（ウェストバージニア州モーガンタウン） </td><td> 62794-096-251 </td><td></td></tr><tr><td>人工硬膜</td><td>ゴアは、MVPデュラエースの代替、WLゴア＆アソシエイツ、（フラッグスタッフ、アリゾナ州）を排除してください</td><td> 1MVP40 </td><td></td></tr><tr><td> 5から0絹縫合糸</td><td>エチコン社（サマービル、ニュージャージー州） </td><td> K - 580 </td><td></td></tr><tr><td>創傷クリップ</td><td>パーフェクト - ETSブリュノ、（Burnea、フランス） </td><td> A75 </td><td></td></tr><tr><td>蛍光実体顕微鏡</td><td>ライカマイクロシステムズ、（ヴェッツラー、ドイツ） </td><td> MZ16 </td><td></td></tr><tr><td> CCDカメラ</td><td>浜松、（ブリッジウォーター、ニュージャージー州） </td><td> ORCA - Rx2の</td><td></td></tr><tr><td>温度コントローラ</td><td>世界精密機器（サラソタ、フロリダ州） </td><td> ATC 1000年</td><td></td></tr><tr><td> Metamorphソフトウェア</td><td> Molecular Devices社、（サニーベール、カリフォルニア州） </td><td></td><td></td></tr><tr><td>フォトショップ</td><td>アドビシステムズ、サンノゼ、カリフォルニア州</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

live imaging of dorsal root axons after rhizotomy

脊髄神経根の損傷によって負傷した一次感覚軸索は、慢性的な痛みや永続的な感覚消失につながる、脊髄に再生に失敗する。脊髄への後根（DR）軸索の再生が後根エントリゾーン（DREZ）、CNSとPNSの間の界面で阻止される。神経損傷に関連する複雑な変更は事後解析から推定されているためDREZで再生を防止する分子や細胞のイベントの我々の理解は、部分的に、不完全です。このような軸索再生のようなダイナミックな細胞プロセスは、、最高の各生きている動物の複数の観測値とのリアルタイムイベントをキャプチャするテクニックを研究しています。 生体内で連続的にニューロンを監視するために我々の能力は、光学系およびマウス遺伝子組換えの革新的な技術革新に起因し飛躍的に増加している。 THY1 - GFPトランスジェニックマウスの数行は、神経細胞のサブセットを遺伝的に異なる蛍光色でラベル付けされている、個々の神経細胞がインビボ 1 で撮像される許可。これらのマウスは、筋肉の2-4と5月7日脳のin vivoイメージングのために広く使用されており、静的解析が解決していないことを生理学的メカニズムに新たな洞察を提供している。生きている脊髄の神経細胞のイメージング研究では、ごく最近になって始めている。リヒトマンと彼の同僚は、最初のワイド視野顕微鏡8,9で負傷した脊柱（DC）軸索を追跡することによって、その実現可能性を示した。深くに位置するDCの軸索のin vivoイメージング多光子、ミクログリアと血管はまた10を達成している。過去数年間、我々は広視野顕微鏡とTHY1 - YFPマウスのHのラインを使用してDRの軸索の再生を監視するためのin vivoイメージングに適用することに先駆けて。これらの研究は、DRの軸索は、脊髄11内に再生成が禁止されている理由についての小説仮説に私たちを導いた。 THY1 - YFPマウスのHラインでは、別個のYFP +軸索は、表面的にいくつかの軸索を同時に監視できるようになる、配置されている。我々はDREZに到着DRの軸索がより頸髄よりも腰椎でイメージングされたことを知りました。本報告では、我々は再生成DRの軸索の成功を長期的かつ繰り返しイメージングを確保するために有用な発見したいくつかの戦略を説明します。これらは、繰り返し挿管と呼吸の中断をなくす手術に伴うストレスや瘢痕形成を最小限にし、光毒性なしに高分解能で安定した画像を取り込む方法が挙げられる。

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Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

アン<em&gt; in vivoで</em後根の粉砕は、次の一次感覚軸索を監視する&gt;イメージングプロトコルが記述されています。手順は、広視野蛍光顕微鏡とTHY1 - YFPトランスジェニックマウスを利用し、CNSのインタフェースを持つPNSと軸索の相互作用が4cm以上の軸索再生の繰り返しイメージングを可能にする。

根切断術後の後根の軸索のライブイメージング

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からのクロマチン免疫沈降

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

培養大人の背根神経節ニューロンの軸索再生の遺伝学的研究

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

ニコチン誘導性カルシウムシグナリングおよび腹側海馬軸索に沿って神経伝達物質放出のライブイメージング

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

後根神経節インジェクションおよび後根感覚軸索再生のためのモデルとして傷害をつぶします

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

伝達物質の放出を勉強する後根神経節細胞の分離と培養

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Spectral Reflectometric Microscopy on Myelinated Axons In Situ

Spectral Reflectometric Microscopy on Myelinated Axons In Situ

その場で有髄軸索のスペクトル反射型顕微鏡

In a mammalian nervous system, myelin provides an electrical insulation by enwrapping the axon fibers in a multilayered spiral. Inspired by its ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

成体マウス後根神経節の調査の哺乳類の軸索の再生: In Vivoエレクトロポレーション

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

ドーサルルート神経節マクロファージの迅速な分離

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...

In Vitro Myelination of Peripheral Axons in a Coculture of Rat Dorsal Root Ganglion Explants and Schwann Cells

ラット背根神経節外植片とシュワン細胞の共培養における末梢軸索のin vitro髄鞘形成

The process of myelination is essential to enable rapid and sufficient signal transduction in the nervous system. In the peripheral nervous system, ...

Enrichment of Adult Mouse Dorsal Root Ganglia Neuron Cultures by Immunopanning

イムノパンニングによる成体マウス背根神経節培養の濃縮

Dorsal root ganglia (DRGs) are peripheral structures adjacent to the dorsal horn of the spinal cord, which house the cell bodies of sensory neurons as ...