Name: tracking morphogenetic tissue deformations in the early chick embryo
Uploaded: 2011-10-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענקים GM075200 R01 ו R01 HL083393 (LAT). אנו מכירים תמיכה המילגה עבור BAF מ NIH T90 DA022871 ומכון Mallinckrodt לרדיולוגיה, ועל VDV מ 09PRE2060795 מענק מאיגוד הלב האמריקני.

1. הכנה ניסויית כללי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תרבות בינוני רקמות למכסה המנוע לזרום למינרית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדולל בינוני השתנה Dulbecco של הנשר (DMEM) (1 בקבוק עם 4.5g L / L גלוקוז, סודיום ביקרבונט, ו-L-גלוטמין). הוסף 10 מ&q...

<ol>
	<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88, 49-92 (1951).</li><li>Canfield, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dry+beveling+micropipettes+using+a+computer+hard+drive.">Dry beveling micropipettes using a computer hard drive.</a> J. Neurosci. Methods. 158, 19-21 (2006).</li><li>Voronov, D. A., Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+looping+in+experimental+conditions:+the+effects+of+extraembryonic+forces.">Cardiac looping in experimental conditions: the effects of extraembryonic forces.</a> Developmental Dynamics. 224, 413-421 (2002).</li><li>Filas, B. A., Bayly, P. V., Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+as+a+regulator+of+cytoskeletal+contractility+and+nuclear+shape+in+embryonic+epithelia.">Mechanical stress as a regulator of cytoskeletal contractility and nuclear shape in embryonic epithelia.</a> Ann. Biomed. Eng. 39, 443-454 (2011).</li><li>Kozel, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+fiber+formation:+a+dynamic+view+of+extracellular+matrix+assembly+using+timer+reporters.">Elastic fiber formation: a dynamic view of extracellular matrix assembly using timer reporters.</a> J. Cell. Physiol. 207, 87-96 (2006).</li><li>Filas, B. A., Efimov, I. R., Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+as+a+tool+for+measuring+morphogenetic+deformation+of+the+looping+heart.">Optical coherence tomography as a tool for measuring morphogenetic deformation of the looping heart.</a> Anat. Rec. 290, 1057-1068 (2007).</li><li>Varner, V. D., Voronov, D. A., Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+head+fold+formation:+investigating+tissue-level+forces+during+early+development.">Mechanics of head fold formation: investigating tissue-level forces during early development.</a> Development. 137, 3801-3811 (2010).</li><li>Van Essen, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+software+suite+for+surface-based+analyses+of+cerebral+cortex.">An integrated software suite for surface-based analyses of cerebral cortex.</a> J. Am. Med. Inform. Assoc. 8, 443-459 (2001).</li><li>Filas, B. A., Knutsen, A. K., Bayly, P. V., Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+measuring+deformation+of+folding+surfaces+during+morphogenesis.">A new method for measuring deformation of folding surfaces during morphogenesis.</a> J. Biomech. Eng. 130, 061010-061010 (2008).</li><li>Yuan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-registered+optical+coherence+tomography+and+fluorescence+molecular+imaging+for+simultaneous+morphological+and+molecular+imaging.">Co-registered optical coherence tomography and fluorescence molecular imaging for simultaneous morphological and molecular imaging.</a> Phys. Med. Biol. 55, 191-206 (2010).</li><li>Zamir, E. A., Czirok, A., Rongish, B. J., Little, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digital+image-based+method+for+computational+tissue+fate+mapping+during+early+avian+morphogenesis.">A digital image-based method for computational tissue fate mapping during early avian morphogenesis.</a> Ann. Biomed. Eng. 33, 854-865 (2005).</li><li>Blanchard, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+tectonics:+morphogenetic+strain+rates,+cell+shape+change+and+intercalation.">Tissue tectonics: morphogenetic strain rates, cell shape change and intercalation.</a> Nat. Methods. 6, 458-464 (2009).</li></ol>

שני תיוג טכניקות רקמה מוצגים לתרבות אובו לשעבר של עוברים חומוס מוקדם. הראשונה משתמשת בצבעי ניאון lipophilic שיישלח באמצעות חלקיקי ברזל מגנטי בו זמנית תווית מאות תאים. עם זאת, שיטה זו היא כיום אינו תואם טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית, כמו צבעי ניאון בדרך כלל להראות בניגוד...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> חומר / מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> DMEM - גלוקוז גבוה </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D5796 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין / neomycin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4083 </td><td></td></tr><tr><td> עוף סרום </td><td> Invitrogen </td><td> 16110-082 </td><td></td></tr><tr><td> פוספט של Dulbecco בופר </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D1408 </td><td> 10X </td></tr><tr><td> Whatman # 2 מסנן נייר </td><td> Whatman </td><td> 1002 090 </td><td> קוטר 90 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> זכוכית micropipettes </td><td> העולם Precisionמכשירים (WPI) </td><td> TW150-6 </td><td> קוטר פנימי 1.5mm </td></tr><tr><td> DiI </td><td> Invitrogen </td><td> D-282 </td><td></td></tr><tr><td> הברזל מופחת </td><td> Mallinckrodt בייקר בע&quot;מ </td><td> 5320 </td><td></td></tr><tr><td> 10 מיקרומטר קוטר microspheres (שחור) </td><td> Polysciences בע&quot;מ </td><td> 24294 </td><td></td></tr><tr><td> דלתא T דיש (לתרבות זמן לשגות) </td><td> Bioptechs </td><td> 04200415B </td><td> עבה, שחור 0.17mm </td></tr><tr><td> דלתא תרבות T4 תבשיל בקר </td><td> Bioptechs </td><td> 0420-4-03 </td><td></td></tr><tr><td> מיני משאבת זרימה משתנה התקן </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tracking morphogenetic tissue deformations in the early chick embryo

עובריים epithelia לעבור דפורמציות מורכבים (למשל, כפיפה, פיתול, קיפול, מתיחה) לטופס איברים פרימיטיביים של העובר מוקדם. מעקב אחר סמנים fiducial על פני השטח של אלה גיליונות הסלולר היא שיטה מבוססת היטב להערכת כמויות המוךפו&quot;גנטי שהולך כגון, צמיחה גזירה התכווצות,. עם זאת, לא כל תיוג טכניקות פני השטח הם להתאמה בקלות שיטות הדמיה קונבנציונאלי בעל יתרונות ומגבלות שונות. כאן, אנו מתארים שתי שיטות תיוג להמחיש את התועלת של כל טכניקה. בשיטה הראשונה, מאות תוויות ניאון מוחלים בעת ובעונה אחת לעובר באמצעות חלקיקי ברזל מגנטיים. תוויות אלה משמשים לאחר מכן כמות 2-D דפורמציות רקמות במהלך המורפוגנזה. בשיטה השנייה, פוליסטירן microspheres משמשים סוכנים בניגוד ב פולשני הדמיה טומוגרפיה אופטית (אוקטובר) כדי לעקוב אחר קוהרנטיות 3-D דפורמציות רקמות. טכניקות אלו הצליחוly מיושם במעבדה שלנו studythe המנגנונים הפיזיים של קיפול הראש בלב מוקדם, והתפתחות המוח, ויש להתאמה לתהליכים המוךפו&quot;גנטי שהולך רחב טווח.

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo at JoVE.com

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

מאמר זה מתאר תיוג פני השטח<em&gt; אובו לשעבר</em&gt; תרבות רקמות בעובר האפרוח מוקדם. טכניקות מקובל בתחום זמן לשגות בהיר, פלואורסצנציה, אופטיות הדמיה טומוגרפיה קוהרנטיות מוצגים. תוויות משטח מעקב עם רזולוציה גבוהה המאפשרת spatiotemporal כמויות kinematic כגון זני המוךפו&quot;גנטי שהולך (דפורמציות) להיות מחושב גם שניים או שלושה ממדים.

מעקב אחר דפורמציות המוךפו&quot;גנטי שהולך רקמות בעובר צ&#39;יק מוקדם

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

שיטת לתרבות מוקדם של עוברים צ&#39;יק לשעבר vivo (תרבות חדש)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

הר שלם כפול באתרו הכלאה של עוברים צ&#39;יק מוקדם

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Assay עבור אינדוקציה עצבית בעובר צ&#39;יק

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation של γH2AX מוקדים של דגימות רקמה

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

תא יחיד transfection בעוברים צ&#39;יק

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

הכרומטין Assay immunoprecipitation עבור גנים ספציפיים רקמות באמצעות שלבים מוקדמים של עוברי עכברים

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

זמן לשגות מיקרוסקופית של העובר בשלב מוקדם Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

ב electroporation לג&#39;ימי ברשתית צ&#39;יק עובריים

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

עכבר עוברי פיתוח במערכת סרום ללא תרבות שלמה עובר

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...