Name: profiling voltage-gated potassium channel mrna expression in nigral neurons using single-cell rt-pcr techniques
Uploaded: 2011-09-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Profiling Voltage-gated Potassium Channel mRNA Expression in Nigral Neurons using Single-cell RT-PCR Techniques at JoVE.com

وأيد هذا العمل عن طريق المنح والمعاهد الوطنية للصحة R01DA021194 R01NS058850.

1. إعداد شريحة الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشباب (15-40 يوما) وتستخدم للذكور والإناث ، سبراغ داولي الفئران. (ونحن أيضا استخدام هذا البروتوكول نفسه في الفئران.) تحت التخدير يوريتان العميق ، ومقطوعة الرأس ويتم تشريح الحيوانات بسرعة إلى المخ. ث?...

<ol>
	<li>J, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+pacemaker+frequency+of+individual+dopaminergic+neurons+by+Kv4.3L+and+Kchip3.1+transcription.">Tuning pacemaker frequency of individual dopaminergic neurons by Kv4.3L and Kchip3.1 transcription.</a> EMBO J. 20, 5715-5724 (2001).</li><li>Surmeier, D. J., Song, W. J., Yan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+expression+of+dopamine+receptors+in+neostriatal+medium+spiny+neurons.">Coordinated expression of dopamine receptors in neostriatal medium spiny neurons.</a> J. Neurosci. 16, 6579-6591 (1996).</li><li>Zhou, F. W., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutively+active+TRPC3+channels+regulate+basal+ganglia+output+neurons.">Constitutively active TRPC3 channels regulate basal ganglia output neurons.</a> J. Neurosci. 28, 473-482 (2008).</li><li>Zhou, F. W., Jin, Y., Matta, S. G., Xu, M., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ultra-short+dopamine+pathway+regulates+basal+ganglia+output+neurons.">An ultra-short dopamine pathway regulates basal ganglia output neurons.</a> J. Neurosci. 29, 10424-10435 (2009).</li><li>Ding, S., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kv3-like+potassium+channels+are+required+for+sustained+high-frequency+firing+in+Basal+Ganglia+output+neurons.">Kv3-like potassium channels are required for sustained high-frequency firing in Basal Ganglia output neurons.</a> J. Neurophysiol. 105, 554-570 (2011).</li><li>Zhou, F. W., Xu, J. J., Zhao, Y., Ledoux, M. S., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+functions+of+histamine+H1+and+H2+receptors+and+H3+receptors+in+substantia+nigra+pars+reticulata.">Opposite functions of histamine H1 and H2 receptors and H3 receptors in substantia nigra pars reticulata.</a> J. Neurophysiol. 96, 1581-1591 (2006).</li></ol>

مزيج من تسجيل المشبك التصحيح في الدماغ مع شريحة scRT - PCR أظهرت نقدم هنا وسيلة ممتازة للتحقيق في ملامح التعبير مرنا للقنوات ايون ، والمستقبلات ، والإنزيمات الرئيسية لتخليق الموصلات العصبية في الخلايا العصبية تتميز بشكل فردي. هذا مفيد بشكل خاص عندما لا يمكن للبروتين في ?...

<img src="/files/ftp_upload/3136/3136table1.jpg" alt="الجدول 1" /> أهم الكواشف الجدول 1. والمعدات <img src="/files/ftp_upload/3136/3136table2.jpg" alt="الجدول 2" /> الجدول 2. أزواج التمهيدي لقناة الفئران Kv3 العصبية ، هيدروكسيلاز التيروزين (TH) ، وحمض الجلوتاميك كربوكسيل 1 (GAD1) ​​mRNAs للscRT - PCR

profiling voltage-gated potassium channel mrna expression in nigral neurons using single-cell rt-pcr techniques

الثدييات في النظام العصبي المركزي ، وتختلط أنواع مختلفة من الخلايا العصبية مع مختلف الخصائص الجزيئية والوظيفية مع بعضها صعب ، وغيرها ، وكذلك لفصل لم يتم التعرف بسهولة عن طريق التشكل بهم. وهكذا ، فإنه غالبا ما يكون من الصعب تحليل التعبير الجيني في الخلايا العصبية من نوع معين. نحن هنا وثيقة إجراء من شأنه أن يجمع بين خلية كاملة تقنيات تسجيل التصحيح مع المشبك وحيدة الخلية تفاعل البلمرة عكس النسخ (scRT - PCR) للتعبير عن التعريف مرنا في أنواع مختلفة من الخلايا العصبية في أسود كبير. واستخدم لأول مرة تقنيات الكهربية لتسجيل خصائص العصبية والوظيفية للخلايا العصبية الفردية. إذن ، هو أن يستنشق السيتوبلازم من الخلايا العصبية واحدة تتميز nigral electrophysiologically وتعرض لscRT - PCR تحليل للحصول على ملامح التعبير مرنا للأنزيمات التوليف العصبي ، والمستقبلات ، وقنوات أيون. انتقائية عالية وحساسية تجعل هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص عندما لا يمكن المناعية يمكن استخدامها نظرا لعدم وجود أجسام مضادة مناسبة أو انخفاض مستوى التعبير من البروتين. هذا الأسلوب ينطبق أيضا على الخلايا العصبية في مناطق أخرى من الدماغ.

Watch this Scientific Journal Video about Profiling Voltage-gated Potassium Channel mRNA Expression in Nigral Neurons using Single-cell RT-PCR Techniques at JoVE.com

Profiling Voltage-gated Potassium Channel mRNA Expression in Nigral Neurons using Single-cell RT-PCR Techniques

وتتميز الخلايا العصبية electrophysiologically first. ثم يستنشق السيتوبلازم من الخلايا العصبية المسجلة وتعرض لعكس النسخ PCR تحليل للكشف عن التعبير عن mRNAs للأنزيمات التوليف العصبي ، وقنوات ايون ، والمستقبلات.

التنميط الجهد بوابات مرنا قناة البوتاسيوم التعبير في الخلايا العصبية Nigral باستخدام خلية واحدة RT - PCR تقنيات

In mammalian central nervous system, different types of neurons with diverse molecular and functional characteristics are intermingled with each other, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Single-cell Profiling of Developing and Mature Retinal Neurons

وحيدة الخلية التنميط من الخلايا العصبية الشبكية المتطورة والناضجة

Highly specialized, but exceedingly small populations of cells play important roles in many tissues. The identification of cell-type specific markers and ...

Recording Light-evoked Postsynaptic Responses in Neurons in Dark-adapted, Mouse Retinal Slice Preparations Using Patch Clamp Techniques

تسجيل الخفيفة أثار-الردود بعد المشبكي في الخلايا العصبية في الظلام تكييفها، الاستعدادات ماوس الشبكية شريحة عن طريق تقنيات المشبك التصحيح

The retina is the gateway to the visual system. To understand visual signal processing mechanisms, we investigate retinal neural network functions. ...

Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons

التحت خلوية تسجيلات التصحيح، المشبك من المجال Somatodendritic من سودائي الدوبامين العصبية

Dendrites of dopaminergic neurons receive and convey synaptic input, support action potential back-propagation and neurotransmitter release. Understanding ...

Reliable Identification of Living Dopaminergic Neurons in Midbrain Cultures Using RNA Sequencing and TH-promoter-driven eGFP Expression

تحديد موثوق المعيشة الدوبامين الخلايا العصبية في الدماغ المتوسط ​​الثقافات عن طريق RNA تسلسل وTH يحركها المروج EGFP التعبير

In Parkinson&#39;s Disease (PD) there is widespread neuronal loss throughout the brain with pronounced degeneration of dopaminergic neurons in the SNc, ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

كمي من إندوسوم و ليسوسوم التحركات في الخلايا العصبية المستزرعة باستخدام تحقيقات الفلورسنت

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

Adeno-associated Virus-mediated Transgene Expression in Genetically Defined Neurons of the Spinal Cord

التعبير المرتبطة بالغدة التحوير الفيروس بوساطة في المعرفة وراثيا من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي

Selective manipulation of spinal neuronal subpopulations has mainly been achieved by two different methods: 1) Intersectional genetics, whereby double or ...

Making, Testing, and Using Potassium Ion Selective Microelectrodes in Tissue Slices of Adult Brain

صنع واختبار واستخدام البوتاسيوم أيون ميكروليكتروديس انتقائية في شرائح أنسجة الدماغ الكبار

Potassium ions significantly contribute to the resting membrane potential of cells and, therefore, extracellular K+ concentration is a crucial regulator ...

Single-cell RNA Sequencing of Fluorescently Labeled Mouse Neurons Using Manual Sorting and Double In Vitro Transcription with Absolute Counts Sequencing (DIVA-Seq)

Single-cell RNA Sequencing of Fluorescently Labeled Mouse Neurons Using Manual Sorting and Double In Vitro Transcription with Absolute Counts Sequencing DIVA-Seq

تسلسل الحمض النووي الريبي خلية واحدة من الخلايا العصبية المسماة فلوريسسينتلي الماوس باستخدام الفرز اليدوي وضعف في المختبر النسخ تهم المطلق بالتسلسل (DIVA-Seq)

Single-cell RNA sequencing (RNA-seq) is now a widely implemented tool for assaying gene expression. Commercially available single-cell RNA-sequencing ...

Single-Cell Electroporation across Different Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Excitatory and Class-Specific Inhibitory Neurons

خلية واحدة Electroporation عبر مختلف الثقافة شريحة Organotypic من الإثارة فرس النهر الماوس والخلايا العصبية المثبطة فئة محددة

Electroporation has established itself as a critical method for transferring specific genes into cells to understand their function. Here, we describe a ...