Name: profiling voltage-gated potassium channel mrna expression in nigral neurons using single-cell rt-pcr techniques
Uploaded: 2011-09-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Profiling Voltage-gated Potassium Channel mRNA Expression in Nigral Neurons using Single-cell RT-PCR Techniques at JoVE.com

इस काम एनआईएच R01DA021194 और R01NS058850 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

1. मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी <ol><li> युवा (15-40 दिन पुराने) पुरुष और महिला चूहों Sprague-Dawley किया जाता है. गहरी urethane संज्ञाहरण के तहत (हम भी चूहों में यह एक ही प्रोटोकॉल का उपयोग), जानवरों decapitated और मस्तिष्क जल्दी से बाहर dissected ...

<ol>
	<li>J, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+pacemaker+frequency+of+individual+dopaminergic+neurons+by+Kv4.3L+and+Kchip3.1+transcription.">Tuning pacemaker frequency of individual dopaminergic neurons by Kv4.3L and Kchip3.1 transcription.</a> EMBO J. 20, 5715-5724 (2001).</li><li>Surmeier, D. J., Song, W. J., Yan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+expression+of+dopamine+receptors+in+neostriatal+medium+spiny+neurons.">Coordinated expression of dopamine receptors in neostriatal medium spiny neurons.</a> J. Neurosci. 16, 6579-6591 (1996).</li><li>Zhou, F. W., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutively+active+TRPC3+channels+regulate+basal+ganglia+output+neurons.">Constitutively active TRPC3 channels regulate basal ganglia output neurons.</a> J. Neurosci. 28, 473-482 (2008).</li><li>Zhou, F. W., Jin, Y., Matta, S. G., Xu, M., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ultra-short+dopamine+pathway+regulates+basal+ganglia+output+neurons.">An ultra-short dopamine pathway regulates basal ganglia output neurons.</a> J. Neurosci. 29, 10424-10435 (2009).</li><li>Ding, S., Matta, S. G., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kv3-like+potassium+channels+are+required+for+sustained+high-frequency+firing+in+Basal+Ganglia+output+neurons.">Kv3-like potassium channels are required for sustained high-frequency firing in Basal Ganglia output neurons.</a> J. Neurophysiol. 105, 554-570 (2011).</li><li>Zhou, F. W., Xu, J. J., Zhao, Y., Ledoux, M. S., Zhou, F. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+functions+of+histamine+H1+and+H2+receptors+and+H3+receptors+in+substantia+nigra+pars+reticulata.">Opposite functions of histamine H1 and H2 receptors and H3 receptors in substantia nigra pars reticulata.</a> J. Neurophysiol. 96, 1581-1591 (2006).</li></ol>

scRT-पीसीआर के साथ पैच मस्तिष्क टुकड़ा में क्लैंप रिकॉर्डिंग के संयोजन हम यहाँ आयन चैनल, रिसेप्टर्स, और व्यक्तिगत विशेषता न्यूरॉन्स में neurotransmitter संश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण एंजाइमों के लिए mRNA अभिव्यक्ति प?...

<img src="/files/ftp_upload/3136/3136table1.jpg" alt="तालिका 1" /> तालिका 1. कुंजी अभिकर्मकों और उपकरण <img src="/files/ftp_upload/3136/3136table2.jpg" alt="तालिका 2" /> टेबल 2 चूहे neuronal चैनल Kv3, tyrosine hydroxylase (HI) और glutamic एसिड 1 decarboxylase (GAD1) ​​scRT-पीसीआर के लिए mRNAs के लिए प्राइमर जोड़े

profiling voltage-gated potassium channel mrna expression in nigral neurons using single-cell rt-pcr techniques

स्तनधारी केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में, विविध आणविक और कार्यात्मक विशेषताओं के साथ न्यूरॉन्स के विभिन्न प्रकार के साथ एक दूसरे को अलग करने के लिए मुश्किल और भी उनके आकारिकी द्वारा आसानी से पहचान नहीं intermingled रहे हैं. इस प्रकार, यह अक्सर मुश्किल होता है एक विशिष्ट न्यूरॉन प्रकार में जीन की अभिव्यक्ति का विश्लेषण है. यहाँ हम एक प्रक्रिया है कि एकल कोशिका रिवर्स प्रतिलेखन पोलीमरेज़ चेन प्रोफ़ाइल mRNA अभिव्यक्ति के लिए पर्याप्त nigra में न्यूरॉन्स के विभिन्न प्रकार में रिएक्शन (scRT पीसीआर) के साथ पूरे सेल पैच दबाना रिकॉर्डिंग तकनीकों को जोड़ती है दस्तावेज़. Electrophysiological तकनीकों के लिए पहली बार व्यक्तिगत न्यूरॉन्स के neurophysiological और कार्यात्मक गुणों रिकॉर्ड के लिए उपयोग किया जाता है. फिर, एक electrophysiologically विशेषता nigral न्यूरॉन्स के cytoplasm से aspirated और scRT-पीसीआर विश्लेषण के अधीन neurotransmitter संश्लेषण एंजाइमों, रिसेप्टर्स, और आयन चैनल के लिए mRNA अभिव्यक्ति प्रोफाइल प्राप्त है. उच्च चयनात्मकता और संवेदनशीलता के लिए इस पद्धति का विशेष रूप से उपयोगी है जब immunohistochemistry उपयुक्त एंटीबॉडी या कम प्रोटीन की अभिव्यक्ति के स्तर की कमी के कारण नहीं किया जा सकता है. इस विधि को भी अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों में न्यूरॉन्स के लिए लागू है.

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Profiling Voltage-gated Potassium Channel mRNA Expression in Nigral Neurons using Single-cell RT-PCR Techniques

न्यूरॉन्स को पहली बार electrophysiologically विशेषता है. फिर दर्ज न्यूरॉन से cytoplasm से aspirated है और प्रतिलेखन - पीसीआर विश्लेषण रिवर्स neurotransmitter संश्लेषण एंजाइमों, आयन चैनल, और रिसेप्टर्स के लिए mRNAs की अभिव्यक्ति का पता लगाने के अधीन है.

Nigral न्यूरॉन्स में एकल सेल RT-पीसीआर तकनीक का उपयोग वोल्ट gated पोटेशियम चैनल mRNA अभिव्यक्ति रूपरेखा

In mammalian central nervous system, different types of neurons with diverse molecular and functional characteristics are intermingled with each other, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

विच्छेदन और भ्रूणीय स्पाइनल कॉर्ड से Commissural न्यूरॉन्स की संस्कृति

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Single-cell Profiling of Developing and Mature Retinal Neurons

विकासशील और परिपक्व रेटिना न्यूरॉन्स की रूपरेखा एकल कक्ष

Highly specialized, but exceedingly small populations of cells play important roles in many tissues. The identification of cell-type specific markers and ...

Recording Light-evoked Postsynaptic Responses in Neurons in Dark-adapted, Mouse Retinal Slice Preparations Using Patch Clamp Techniques

रिकॉर्डिंग पैच दबाना तकनीकों का प्रयोग काले अनुकूलित, माउस रेटिना टुकड़ा तैयारी में न्यूरॉन्स में में postsynaptic प्रतिक्रियाएँ प्रकाश पैदा

The retina is the gateway to the visual system. To understand visual signal processing mechanisms, we investigate retinal neural network functions. ...

Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons

Nigral डोपामाइन न्यूरॉन्स की Somatodendritic डोमेन से Subcellular पैच दबाना रिकॉर्डिंग

Dendrites of dopaminergic neurons receive and convey synaptic input, support action potential back-propagation and neurotransmitter release. Understanding ...

Reliable Identification of Living Dopaminergic Neurons in Midbrain Cultures Using RNA Sequencing and TH-promoter-driven eGFP Expression

Midbrain संस्कृतियों में रहने वाले डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के विश्वसनीय पहचान आरएनए अनुक्रमण और वें प्रमोटर संचालित EGFP अभिव्यक्ति का उपयोग

In Parkinson&#39;s Disease (PD) there is widespread neuronal loss throughout the brain with pronounced degeneration of dopaminergic neurons in the SNc, ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

फ्लोरोसेंट जांच के उपयोग के संवर्धित न्यूरॉन्स में एंडोसोम और लियोसोम की क्षमताओं का मात्रा

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

Adeno-associated Virus-mediated Transgene Expression in Genetically Defined Neurons of the Spinal Cord

Adeno-संबद्ध वायरस-रीढ़ की हड्डी की आनुवंशिक रूप से परिभाषित न्यूरॉन्स में मध्यस्थता Transgene अभिव्यक्ति

Selective manipulation of spinal neuronal subpopulations has mainly been achieved by two different methods: 1) Intersectional genetics, whereby double or ...

Making, Testing, and Using Potassium Ion Selective Microelectrodes in Tissue Slices of Adult Brain

बनाने, परीक्षण, और वयस्क मस्तिष्क के ऊतक स्लाइस में पोटेशियम आयन चयनात्मक Microelectrodes का उपयोग

Potassium ions significantly contribute to the resting membrane potential of cells and, therefore, extracellular K+ concentration is a crucial regulator ...

Single-cell RNA Sequencing of Fluorescently Labeled Mouse Neurons Using Manual Sorting and Double In Vitro Transcription with Absolute Counts Sequencing (DIVA-Seq)

Single-cell RNA Sequencing of Fluorescently Labeled Mouse Neurons Using Manual Sorting and Double In Vitro Transcription with Absolute Counts Sequencing DIVA-Seq

एकल सेल आरएनए अनुक्रमण के साथ फ्लोरोसेंट लेबल माउस ंयूरॉंस मैनुअल छंटाई और डबल इन विट्रो प्रतिलेखन के साथ निरपेक्ष गणना अनुक्रमण (DIVA-Seq)

Single-cell RNA sequencing (RNA-seq) is now a widely implemented tool for assaying gene expression. Commercially available single-cell RNA-sequencing ...

Single-Cell Electroporation across Different Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Excitatory and Class-Specific Inhibitory Neurons

माउस हिप्पोकैम्पल उत्तेजक और कक्षा-विशिष्ट निरोधात्मक न्यूरॉन्स की विभिन्न ऑर्गैग्निक स्लाइस संस्कृति में एकल-सेल इलेक्ट्रोपशन

Electroporation has established itself as a critical method for transferring specific genes into cells to understand their function. Here, we describe a ...