Name: dissecting host-virus interaction in lytic replication of a model herpesvirus
Uploaded: 2011-10-07T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus at JoVE.com

Yazarlar, Dr James (Zhijian) teşekkür etmek istiyorum Mavs içeren esansiyel reaktifleri, sağlamak için Chen (Güneybatı UT, Moleküler Biyoloji) - / - fareler ve Dr Ren Sun (California-Los Angeles Üniversitesi, Farmakoloji ve Moleküler Tıp ) bu çalışma için γHV68 bakteriyel yapay kromozom sağlamak için.

1. ΓHV68 ile Fare enfeksiyonu <ol><li> Altı-sekiz haftalık, cinsiyet açısından Kardeş fareler (8 ila 12 fare / grup) viral enfeksiyon için kullanılır. Fareler sevkiyat sonra dört tam gün (96 saat) boyunca gelmesini bekleyin. </li><li> Virüs kullanarak Protokol adımları standart BSL2&#39;ye önlemler kullanılarak biyogüvenlik düzeyi 2 (BSL-2) bir kabin içinde yapılmalıdır. </li><li> Sadece deneme önce fare başına steril PBS 30 ul γHV68 (40 1 x 10 5 plak oluşturan birim [PFU]) viral...

<ol>
	<li>Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen+recognition+and+innate+immunity.">Pathogen recognition and innate immunity.</a> Cell. 124, 783-801 (2006).</li><li>Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+microorganisms+and+activation+of+the+immune+response.">Recognition of microorganisms and activation of the immune response.</a> Nature. 449, 819-826 (2007).</li><li>Speck, S. H., Virgin, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+and+viral+genetics+of+chronic+infection:+a+mouse+model+of+gamma-herpesvirus+pathogenesis.">Host and viral genetics of chronic infection: a mouse model of gamma-herpesvirus pathogenesis.</a> Curr. Opin. Microbiol. 2, 403-409 (1999).</li><li>Speck, S. H., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+latency+and+its+regulation:+lessons+from+the+gamma-herpesviruses.">Viral latency and its regulation: lessons from the gamma-herpesviruses.</a> Cell Host Microbe. 8, 100-115 (2010).</li><li>Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+gamma-herpesvirus+68+hijacks+MAVS+and+IKKbeta+to+initiate+lytic+replication.">Murine gamma-herpesvirus 68 hijacks MAVS and IKKbeta to initiate lytic replication.</a> PLoS Pathog. 6, e1001001-e1001001 (2010).</li><li>Strauss, W. M., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+genomic+DNA+from+mammalian+tissues.">Preparation of genomic DNA from mammalian tissues.</a> Current Protocols in Molecular Biology. , 2-2 (1998).</li><li>Song, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+viral+genes+essential+for+replication+of+murine+gamma-herpesvirus+68+using+signature-tagged+mutagenesis.">Identification of viral genes essential for replication of murine gamma-herpesvirus 68 using signature-tagged mutagenesis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 3805-3810 (2005).</li><li>Hirt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+extraction+of+polyoma+DNA+from+infected+mouse+cell+cultures.">Selective extraction of polyoma DNA from infected mouse cell cultures.</a> J. Mol. Biol. 26, 365-369 (1967).</li><li>Eva-Maria Borst, E., Crnkovic-Mertens, I., Messerle, M., Zhao, S., Stodolsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+&#946;-herpesvirus+genomes+as+bacterial+artificial+chromosomes.">Cloning of &#946;-herpesvirus genomes as bacterial artificial chromosomes.</a> Methods in Molecular Biology. , 256-256 (2004).</li><li>Sun, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specific+and+essential+role+of+MAVS+in+antiviral+innate+immune+responses.">The specific and essential role of MAVS in antiviral innate immune responses.</a> Immunity. 24, 633-642 (2006).</li><li>Seth, R. B., Sun, L., Ea, C. K., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+MAVS,+a+mitochondrial+antiviral+signaling+protein+that+activates+NF-kappaB+and+IRF+3.">Identification and characterization of MAVS, a mitochondrial antiviral signaling protein that activates NF-kappaB and IRF 3.</a> Cell. 122, 669-682 (2005).</li><li>Kawai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IPS-1,+an+adaptor+triggering+RIG-I-+and+Mda5-mediated+type+I+interferon+induction.">IPS-1, an adaptor triggering RIG-I- and Mda5-mediated type I interferon induction.</a> Nat. Immunol. 6, 981-988 (2005).</li><li>Meylan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardif+is+an+adaptor+protein+in+the+RIG-I+antiviral+pathway+and+is+targeted+by+hepatitis+C+virus.">Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus.</a> Nature. 437, 1167-1172 (2005).</li><li>Xu, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VISA+is+an+adapter+protein+required+for+virus-triggered+IFN-beta+signaling.">VISA is an adapter protein required for virus-triggered IFN-beta signaling.</a> Mol. Cell. 19, 727-740 (2005).</li></ol>

Viral enfeksiyon yanıt olarak, Mavs-bağımlı doğuştan gelen bağışıklık sinyal yollarının antiviral 10-14 enflamatuvar sitokinlerin üretimini teşvik etmek için aktif hale getirilir. İnsan onkojenik Kaposi sarkomu-ilişkili herpes ve Epstein-Barr virüsü 3,4 için model virüs olarak mürin γHV68 kullanarak, γHV68 usurps Mavs-IKKβ yolu transkripsiyonel aktivasyonu 5 ile viral litik replikasyon teşvik etmek olduğunu keşfetti. Genetiği değiştirilmiş MEFS ve molekü...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Lipofektamin 2000 </td><td> Invitrogen </td><td> 11668-019 </td></tr><tr><td> Elektro-MAX DH10B yetenekli hücrelerin </td><td> Invitrogen </td><td> 18290-015 </td></tr><tr><td> Metilselüloz </td><td> Sigma </td><td> M0512 </td></tr><tr><td> POWERPREP HP Plazmid Miniprep Sistemi </td><td> OriGene </td><td> NP100004 </td></tr><tr><td> POWERPREP HP Plazmid Midiprep Sistemi </td><td> OriGene </td><td> NP100006 </td></tr></tbody></table>

dissecting host-virus interaction in lytic replication of a model herpesvirus

Viral enfeksiyon yanıt olarak, bir dizi gibi antiviral sitokin üretimini 1,2 yol doğuştan gelen bağışıklık sinyal yolakları aktive gibi çeşitli savunma yanıtları, geliştirir. Ana koloni için, virüs konak antiviral yanıtları kaçmasına ve sinyal yolları işlemek için zorunlu bulunmaktadır. Konak-virüs etkileşimi unraveling viral enfeksiyona karşı yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi ışık tutacaktır. Mürin γHV68 yakından insan onkojenik Kaposi sarkomu-ilişkili herpes ve Epsten-Barr virüsü 3,4 ilişkilidir. laboratuvar farelerde γHV68 enfeksiyonu insan herpesvirüslerinin için mevcut değildir vivo, konak yanıtları ve viral enfeksiyon tüm kurs incelemek için uysal küçük bir hayvan modeli sağlar. Bu protokol, biz γHV68 litik replic bir fenotipik karakterizasyon yöntemleri paneli ve ana sinyal bileşenlerinin moleküler diseksiyonu sunmakvivo ve ex vivo hem ation. Genetiği değiştirilmiş fare suşlarının durumu vivo γHV68 akut enfeksiyon sırasında ana sinyal yollarının rolleri sorgulamaya izin verir. Buna ek olarak, bu eksik fare suşu izole edilmiş fare embriyo fibroblast (MEFS) ileri γHV68 litik çoğaltma ex vivo sırasında bu moleküllerin rolleri incelemek için kullanılabilir. Virolojik ve moleküler biyoloji deneyleri kullanarak, konak-virüs etkileşimlerinin moleküler mekanizması kesin ve viral litik replikasyon için gerekli ana ve viral genleri tespit edebilirsiniz. Son olarak, bakteriyel suni bir kromozom (BAC) sistemi özellikle ev sahibi-virüs etkileşim kesme viral faktör (ler) içine mutasyonların girişini kolaylaştırır. Bu mutasyonlar taşıyan rekombinant γHV68 bileşenleri sinyal anahtar konak içinde eksik MEFS içinde γHV68 litik çoğaltma fenotipleri tekrarlamak için de kullanılabilir.Bu protokol vivo ve ex vivo müdahale birden çok düzeyde konak-patojen etkileşimi sorgulamak için mükemmel bir strateji sunar. Son zamanlarda, biz γHV68 usurps doğuştan gelen bağışıklık sinyalizasyon yolağı viral litik replikasyon 5 teşvik etmek olduğunu keşfettiler. Özellikle, γHV68 de novo enfeksiyonu bağışıklık kinaz IKKβ aktive Olmanız IKKβ viral transkripsiyonel aktivasyon teşvik etmek, ana viral transkripsiyon faktörü, çoğaltma ve Transaktivatörü (RTA) fosforile. Bunu yaparken, γHV68 verimli çiftler doğal immün aktivasyon ev sahipliği için transkripsiyonel aktivasyon, böylece viral transkripsiyon ve litik replikasyon kolaylaştırmak. Bu çalışmada ana-virüs etkileşimi sorgulamak diğer virüsler uygulanabilir mükemmel bir örnek sağlar.

Watch this Scientific Journal Video about Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus at JoVE.com

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

Biz bir model herpes, gamma herpes 68 (γHV68) litik çoğaltma konak sinyal molekülleri arasında önemli rolleri tanımlamak için bir protokol açıklar. Genetiği değiştirilmiş fare suşları ve γHV68 litik replikasyon için embriyonik fibroblastlar kullanarak, protokol fenotipik karakterizasyonu ve viral litik çoğaltma virüs konak etkileşimler moleküler sorgulama hem de izin verir.

Model Herpesvirüs Litik çoğaltma Diseksiyon Host-virüs Etkileşim

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

Sitokin Üretimi Viral Evasion Doğuştan Bağışıklık Sinyalizasyonu Diseksiyon

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

Hepatit C Virüsü Çoğaltma Analizi için Protokol

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

Fenotipinin yüksek verim Deneyi<em&gt; Salmonella enterica</em&gt; Typhimurium Derneği, Invasion, ve Makrofagların Çoğaltma

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt;: Arası Ana aracılı Etkileşim Modeli<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ve<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Ana Hücreleri ile Anaerobik Bakteriler Etkileşim değerlendirilmesi için bir model organizma olarak Porphyromonas gingivalis

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

Development and Validation of a Quantitative PCR Method for Equid Herpesvirus-2 Diagnostics in Respiratory Fluids

Solunum Sıvılarda equid Herpes-2 Teşhis için bir Nicel PCR Yöntemi Geliştirilmesi ve Validasyonu

The protocol describes a quantitative RT-PCR method for the detection and quantification of EHV-2 in equine respiratory fluids according to the NF U47-600 ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; Empedans Spektroskopisi kullanarak kan-beyin bariyerinin Model: T Hücre-endotelyal hücre Etkileşim Üzerine Bir Odak

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

İnsan Tüm Kan Natural Killer Hücre Parçalayıcı Faaliyet Akışı Sitometrik Analizi

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

Bimolecular tamamlayıcı benzeşme arıtma (BiCAP) tarafından parçalanmış çok protein sinyal kompleksleri

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...