Name: a quantitative assay for insulin-expressing colony-forming progenitors
Uploaded: 2011-11-28T12:00:00
Duration: 14 min 39 s
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저자는 murine Ngn3 - EGFP 배아 줄기 세포 라인 부인, 루시 브라운과 셀 정렬에 도움에 대한 분석 Cytometry 코어의 선물 박사 클라우스 Kaestner 감사하고 싶습니다. 이 작품은 MW와 LS에게 수여 훈련 보조금 HTK에게 수여 NIH 보조금 R21DK069997와 R01DK081587에 의해 및 재생 의료 (CIRM)의 캘리포니아 연구소에서 일부 재정 지원되었다

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	<li>Ku, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Committing+embryonic+stem+cells+to+early+endocrine+pancreas+in+vitro.">Committing embryonic stem cells to early endocrine pancreas in vitro.</a> Stem cells. 22, 1205-1217 (2004).</li><li>Ku, H. 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우리는 공개 아무것도 없어.

개별 췌장 progenitors의 양적 및 기능적 평가를 허용 식민지의 assays는 크게 췌장 줄기 및 전구 세포 생물학의 연구에 진전을 방해하는, 지금까지 제한하고 있습니다. 식민지 분석의 본질은 전구 세포의 기능과 혈통의 잠재력을 관찰 수 있도록, 내장 전구 세포의 능력보다는 전적으로 자신의 표현형을 측정하는 것입니다. 또한 주어진 인구 progenitors의 수를 결정할 수 있습니다 양적 도구입니다. 조혈 줄기 세포 분야에서 식민지의 assays는 식별에 중요한 역할을뿐만 아니라, 이러한 세포의 혈통의 의지를 지배하는 성장 인자 요구 사항, 상호 작용, 그리고 메커니즘을 해독했습니다. 6 췌장 전구 세포 생물학, 췌장 장기 7 입력란에 , 8 또는 일괄 문화 9-13 고안되었습니다 그러나, 이러한 assays는 생물 학적 questi를 해결하지단일 세포 수준에서 기능. 단일 세포 분석없이, 다중 잠재적인 췌장 줄기 / progenitors의 존재는 명백하게 입증되지 않을 수 있습니다. 14 여기는 것을 보여줄 인슐린 표현 식민지 - 형성 progenitors 것은 3 차원, Matrigel 함유, 세미 솔리드 문화 시스템을 사용 assayed 수 있습니다. 서스펜션 문화 시스템 15,16가 분아 따위에 의해 중식 및 &quot;pancreatospheres&quot;로 차별화하는 데 하나의 성인 췌장 progenitors를 허용하는 개발되었습니다 있지만, 우리의 식민지 분석 추가 이점을 제공합니다. 첫째, 우리 세미 솔리드 문화 미디어 시스템은 최대 24 자 당 500 μL 문화 미디어 당 25,000 정렬 세포로의 도금 선형 범위의 결과 식민지 형성을 유지하면서. 2 대조적으로, 서스펜션 pancreatosphere 분석은 하나의 사용을 필요로 수 세포 분류기에서 전지 증착 방법은 단일 세포 분석을 허용하고, 따라서 문화 매체와 인큐베이터 공간의 큰 볼륨으로이 필요합니다. 따라서, 우리의 식민지 분석은 다른 세포의 다수가 전구 활동을 동시에 비교해야 할 때 실시하는 비교적 쉽고 비용 효과적입니다. 둘째, 우리 세미 솔리드 미디어 세포외 기질 구성 요소 및 증식과 분화가 모두 같은 잘 발생 수 성장 요인의 균일한 분포를하실 수 있습니다. 반대로, 그것은 서스펜션 문화에 세포 이러한 환경, 특히 매트릭스를 제공하기가 더 어렵습니다. 두 가지 progenitors가 무작위로 서로 양식을 한 식민지 근처에 위치 수 있으므로 우리의 방법으로 그것이 정말 로요, 각 식민지가 세포 하나에서 파생되는 것을 증명 수 없다는 것을 알고 있습니다. 그러나이 문제는 단일 세포 조작을 사용하여 보조 분석에 의해 극복할 수 있습니다. 정렬 단일 세포를 직접 손으로 따기가 정말 로요 각 식민지의 단세포 출처를 보여줍 수 있습니다. 요약에서 프로의 식민지 - 성형 활동을 인슐린을 표현반 고체 미디어 genitors 언급된 단일 세포 수준에서 췌장 progenitors의 기계론의 연구에 대한 독특한 기회를 제공합니다 설명했다. 예를 들어, 이전 보고서에서 우리는 문화에 미디어가 인슐린을 표현 세포외 매트릭스를 제안 Ngn3 - EGFP + 세포, 2 식민지 것은 형성에 필요한, Matrigel, 세포외 기질 단백질의 원유 혼합물의 추가 발견 그 progenitors 위해 중요합니다. 이 식민지 분석을 사용하여 이제 더 이상 해부하다와 같은 활동에 대한 구체적인 매트릭스 요구 사항을 정의하는 것이 가능합니다. 마우스 배아 줄기 세포에서 파생된 progenitors를 공부하는 것 외에도, 우리는 현재이 시험 관내 분석 시스템은 다른 독특한 perinatal 성인 생쥐의 췌장과 간장에서 파생된 식민지뿐만 아니라, 결여된 인간 시체 같은 췌장 조직의 형성을 지원하는지 여부를 조사하고 있습니다 islets니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 재료 / 시약 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 수 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 1X DMEM / F - 12 (1:1) </td><td> Mediatech </td><td> 15-090 - 이력서 </td><td></td></tr><tr><td> 소태아 혈청 </td><td> 조직 문화 체액 </td><td> 201 </td><td> 섹션을 참조하십시오 1.1 </td></tr><tr><td> L - 글루타민 </td><td> Gibco </td><td> 25030-081 </td><td></td></tr><tr><td> 1X Dulbecco의 PBS </td><td> Mediatech </td><td> 21-031 - 이력서 </td><td></td></tr><tr><td> 소 혈청 알부민 </td><td> 시그마 </td><td> A8412 </td><td> 7.5 % </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 356,231 </td><td> 감소 성장 인자 </td></tr><tr><td> 메틸 셀룰로오스 </td><td> Sinetsu 화학, 도쿄, 일본 </td><td></td><td> 1500 centipoise (높은 바이올렛scosity) </td></tr><tr><td> 니코틴 </td><td> 시그마 </td><td> N0636 </td><td></td></tr><tr><td> 사람의 재조합 Activin βB </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 659 - AB - 025 </td><td></td></tr><tr><td> Exendin - 4 </td><td> 시그마 </td><td> E7144 </td><td></td></tr><tr><td> 사람의 재조합 VEGF - A </td><td> R &amp; D 시스템 </td><td> 293 - VE - 010 </td><td></td></tr><tr><td> 24 잘 접시 </td><td> Costar </td><td> 3473 </td><td> 초저 부착 </td></tr><tr><td> 60mm 페트리 접시 그리드와 함께 </td><td> Nunc </td><td> 169,558 </td><td></td></tr></tbody></table>

a quantitative assay for insulin-expressing colony-forming progenitors

췌장 줄기 및 전구 세포 생물학 분야는 단일 세포의 분석을 위해 허용 체외 기능 및 정량 assays에의 부족에 의해 방해되었다. 그들은 명백하게 개별 progenitors의 혈통 잠재력을 증명하는 확실한 방법을 제공하기 때문에 단일 progenitors의 분석 매우 중요 있습니다. 방법은 하나의 세포에서 서스펜션 문화 &quot;pancreatospheres&quot;을 생성 고안되어 있지만, 몇 가지 제한이 존재합니다. 첫째, 단일 셀 전지의 대규모 번호를 증착, 회전 명령의 문화 매체와 공간의 대량.을 수행하려면 시간이 많이 소요됩니다 결과 pancreatospheres의 둘째, 세는 법은 pancreatosphere - 시작 progenitors의 빈도가 낮은 특히, 노동 집약이다. 셋째, pancreatosphere 분석을 다시 같은 문화의 확산과 췌장 progenitors의 차별이 모두 잘 수 있도록 효율적인 방법은 아닙니다분석의 유용성을 stricting. 이러한 한계를 극복하기 위해 췌장 progenitors을위한 세미 솔리드 미디어 기반의 식민지 분석이 개발되었고이 보고서에 표시됩니다. 이 방법은 그들이 확산뿐만 아니라 차별을 받다으로 전구 세포가 3 차원 공간에 머물 수 있도록 메틸 셀룰로오스가 언론에 점도를 제공하는 데 사용되는 조혈 식민지 분석에서 기존의 개념을 활용합니다. 풍성하게하기 위해 인슐린을 표현하는 이질적인 인구에서 progenitors을 식민지를 형성, 우리는 세포를 이용 것을 표현 neurogenin (NGN) 3, 췌장 내분비 전구 세포 마커. Murine 배아 줄기 (ES)는 향상된 녹색 형광 단백질 기자와 태그 Ngn3 표현 세포가 정렬되었습니다 잘 따라 많은 25,000으로 세포가 낮은 첨부 24 - 물론 문화 요리에 도금되었다 셀 - 파생. 다음과 같은 주요 구성 요소와 세미 솔리드 미디어의 각 잘 포함된 500 μL가 : 만났다hylcellulose, Matrigel, 니코틴, exendin - 4, activin βB 및 시설 언론 murine ES 세포 - 유래 췌장 같은 세포에서 수집했습니다. 문화의 8~12일 후, 인슐린은 - 표현 특유의 형태로 식민지 것은 형성되었으며 추가로 각 식민지의 혈통 구성을 결정하는 정량 RT - PCR과 immunoflourescent 염색법을 사용하여 췌장 유전자 표현 분석 수 있습니다. 요약 우리의 식민지 분석 쉽게 감지 및 세포의 이질적인 인구 내에서 기능 progenitors의 부량 수 있습니다. 또한, 반 고체 미디어 형식은 체외에서 세포 분열 따위에 의해 번식하고 차별화하는 데 progenitors을 활성화, 세포 세포외 기질 구성 요소와 성장 요인 유니폼 프레 젠 테이션을하실 수 있습니다. 이 식민지 분석은 단일 세포 수준에서 췌장 전구 세포의 기계론의 연구에 대한 독특한 기회를 제공합니다.

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A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

췌장과 같은 progenitors은 인슐린을 표현 식민지로 차별화할 수있는 3 차원 clonogenic 분석이 설명되어 있습니다. 이 방법은 메틸 셀룰로오스, Matrigel 및 성장 요인을 포함하는 반 고체의 미디어 활용,하는 하나의 progenitors는 분아 따위에 의해 중식과 차별<em&gt; 체외에서</em&gt; 인구의 기능 progenitors의 수를 부량를 허용.

인슐린을 표현 콜로니를 형성 Progenitors에 대한 정량 분석

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

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