Name: isolation &#38; characterization of hoechstlow cd45negative mouse lung mesenchymal stem cells
Uploaded: 2011-10-26T13:00:00
Duration: 16 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי מענקים SMM: GIA0855953G AHA, NIH 1R01 HL091105-01. תמיכה נוספת סופק על ידי: DW: NIH RO1DK075013, DDK וקרן Kleberg; תזרים UCCC cytometry Core (NIH 5 P30 CA 46934-15), את UCCC microarray הליבה (NCI P30 CA 46934-14).

<ol>
	<li>Goodell, M., Brose, K., Paradis, G., Conner, A. S., Mulligan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+functional+properties+of+murine+hematopoietic+stem+cells+that+are+replicating+in+vivo.">Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are replicating in vivo.</a> J. Exp. Med. 183, 1797-1806 (1996).</li><li>Jun, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Pathology+of+Bleomycin+Induced+Fibrosis+is+Associated+with+Loss+of+Resident+Lung+Mesenchymal+Stem+Cells+Which+Regulate+Effector+T-Cell+Proliferation.">The Pathology of Bleomycin Induced Fibrosis is Associated with Loss of Resident Lung Mesenchymal Stem Cells Which Regulate Effector T-Cell Proliferation.</a> STEM CELLS. , (2011).</li><li>Martin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+lung+side+population+cells+have+mesenchymal+stem+cell+potential.">Adult lung side population cells have mesenchymal stem cell potential.</a> Cytotherapy. 10, 140-151 (2008).</li><li>Majka, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+progenitor+populations+in+skeletal+muscle+are+bone+marrow+derived+and+exhibit+different+cell+fates+during+vascular+regeneration.">Distinct progenitor populations in skeletal muscle are bone marrow derived and exhibit different cell fates during vascular regeneration.</a> The Journal of Clinical Investigation. 111, 71-79 (2003).</li><li>Goodell, M. A., McKinney-Freeman, S., Camargo, F. D., Helgason, D. C., Miller, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+Molecular+Biology.">Methods in Molecular Biology.</a> Basic Cell Culture Protocols. 290, 343-352 (2005).</li><li>Tadjali, M., Zhou, S., Rehg, J., Sorrentino, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+Isolation+of+Murine+Hematopoietic+Stem+Cells+by+Expression+of+an.">Prospective Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells by Expression of an.</a> Abcg2/GFP Allele. Stem Cells. 24, 1556-1563 (2006).</li><li>Zhou, S., Schuetz, J. D., Bunting, K. D., Colapietro, A. -. M., Sampath, J., Morris, J. J., Lagutina, I., Grosveld, G. C., Osawa, M., Nakauchi, H., Sorrentino, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ABC+transporter+Bcrp1/ABCG2+is+expressed+in+a+wide+variety+of+stem+cells+and+is+a+molecular+determinant+of+the+side-population+phenotype.">The ABC transporter Bcrp1/ABCG2 is expressed in a wide variety of stem cells and is a molecular determinant of the side-population phenotype.</a> Nature Medicine. 7, 1028-1034 (2001).</li><li>Chateauvieux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profile+of+mouse+stromal+mesenchymal+stem+cells.">Molecular profile of mouse stromal mesenchymal stem cells.</a> Physiological Genomics. 29, 128-138 (2007).</li><li>Gregory, C. A., Prockop, D. J., Spees, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-hematopoietic+bone+marrow+stem+cells:+Molecular+control+of+expansion+and+differentiation.">Non-hematopoietic bone marrow stem cells: Molecular control of expansion and differentiation.</a> Experimental Cell Research. 306, 330-335 (2005).</li><li>Menicanin, D., Bartold, P., Zannettino, A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+Profiling+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">Genomic Profiling of Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 5, 36-50 (2009).</li><li>Summer, R., Fitzsimmons, K., Dwyer, D., Murphy, J., Fine, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+an+Adult+Mouse+Lung+Mesenchymal+Progenitor+Cell+Population.">Isolation of an Adult Mouse Lung Mesenchymal Progenitor Cell Population.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 37, 152-159 (2007).</li><li>Waid, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+T+cell+subset+described+as+CD4loCD40++T+cells+(TCD40)+in+human+type+1+diabetes.">A unique T cell subset described as CD4loCD40+ T cells (TCD40) in human type 1 diabetes.</a> Clinical Immunology. 124, 138-148 (2007).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

אנחנו צריכים להתאים שיטה המשמשת בתחילה כדי לזהות תאים hematopoietic BM לבודד אוכלוסייה ספציפית של MSC ריאות תושב. בשל שחזור של בידוד תאים אלה היו אז מאופיין גם MSC. המוצא שלהם הוגדר תושב בריאה עכבר בוגר (להבדיל BM נגזרת) ופרופיל פנוטיפי מולקולרית מתועד 2. היכולת שוב ושוב לבודד אוכלוסיה זו מתאפיינת מאפשר מחקר נוסף של חשיבות ביולוגית תפקיד של MSC הריאה במהלך הומאוסטזיס רקמה ומחלות. ההגדרה האחרונה של אוכלוסייה זו in vivo ברקמת הריאה הן Murine האדם ומקל על הפיתוח של אסטרטגיה טיפולית המכוונת להציל את התאים אנדוגני כדי להקל לתקן ריאות במהלך פציעה ומחלה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> פוספט בופר סליין (PBS) </td><td> סיגמא </td><td> P-5368 </td><td></td></tr><tr><td> הנקס שנאגרו תמיסת מלח (HBSS) </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30588.01 </td><td></td
></tr><tr><td> 0.2% וורטינגטון סוג 2 collagenase </td><td> וורטינגטון ביוכימיקלים </td><td> LS004202 </td><td></td
></tr><tr><td> תא דם אדום תמוגה חיץ </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4333-57 </td><td></td
></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> 11965-092 </td><td></td
></tr><tr><td> Hoechst 33342 צבע </td><td> סיגמא </td><td> B2261 </td><td></td
></tr><tr><td> CD45-APC </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559864 </td><td></td
></tr><tr><td> Propidium יודיד </td><td> סיגמא </td><td> 81845 </td><td></td
></tr><tr><td> , ממ </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30265.01 </td><td>; </td
></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 16000-069 </td><td></td
></tr><tr><td> 0.5% טריפסין / EDTA </td><td> Cellgro </td><td> 25-053-Cl </td><td></td
></tr><tr><td> MesenCult השלם בינוני </td><td> תא גזע טכנולוגיות </td><td> 05511 </td><td></td
></tr><tr><td> 0.4% w / v Giemsa פתרון מכתים </td><td> סיגמא </td><td> GS1L </td><td></td
></tr><tr><td> 4% paraformaldehyde </td><td> מיקרוסקופית אלקטרונים שירותים </td><td> 15710 </td><td> Paraformeldehyde 16% הוא מדולל ל -4% באמצעות PBS </td
></tr><tr><td> Carboxyfluorescein succinimidyl אסתר (CFSE) </td><td> סיגמא </td><td> 21888 </td><td></td
></tr></tbody></table>

isolation &#38; characterization of hoechstlow cd45negative mouse lung mesenchymal stem cells

תושב רקמות mesenchymal בתאי גזע (MSC) הם הרגולטורים חשוב לתיקון רקמות או התחדשות, סיסטיק דלקת, אנגיוגנזה היווצרות הגידול. יחדיו מחקרים אלה מראים כי MSC ריאות תושב לשחק תפקיד במהלך הומאוסטזיס פגיעה ברקמת הריאה, ולתקן במהלך מחלות כגון פיברוזיס ריאתי (PF) ויתר לחץ דם עורקי (PAH). כאן אנו מתארים בטכנולוגיה כדי להגדיר אוכלוסייה של MSC ריאות תושב. ההגדרה של אוכלוסייה זו ברקמת הריאה vivo באמצעות להגדיר סט של סמנים מאפשר בידוד חוזרות ונשנות של אוכלוסייה היטב מאופיינת בתאי גזע על ידי זרימת cytometry ולימוד סוג תא תפקוד ספציפי.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

במאמר זה אנו מדגימים את הבידוד של Murine ריאות תושב בתאי גזע mesenchymal (ריאות MSC), הרחבה שלהם, אפיון וניתוח של מאפייני המערכת החיסונית.

בידוד &amp; אפיון Hoechst נמוך CD45 שלילי עכבר mesenchymal ריאות בתאי גזע

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

בידוד בעלי חיים הרחבת חינם סרום של טבורי האדם נגזר תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) ו האנדותל יצירת המושבה ובתאים (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

בידוד גזירת תאים עובריים בעכבר ז&#39;רמינל

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

בידוד והתרבות של תאי גזע השיניים אפיתל ממבוגרי העכבר הארקטיק

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of CD146+ Resident Lung Mesenchymal Stromal Cells from Rat Lungs

Isolation of CD146+ Resident Lung Mesenchymal Stromal Cells from Rat Lungs

בידוד של CD146<sup&gt; +</sup&gt; תאי סטרומה mesenchymal ריאות התושב מריאות העכברוש

Mesenchymal stromal cells (MSCs) are increasingly recognized for their therapeutic potential in a wide range of diseases, including lung diseases. Besides ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

תא הטרנס-הפנימית המוני הזרקה של תאי גזע עובריים מוביל שיעור גבוה יותר של Chimerism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Isolation, Characterization, And High Throughput Extracellular Flux Analysis of Mouse Primary Renal Tubular Epithelial Cells

ניתוח השטף חוץ-תאי בידוד, אפיון, תפוקה גבוהה של העכבר הראשי כליות צינורי בתאי אפיתל

Mitochondrial dysfunction in the renal tubular epithelial cells (TECs) can lead to renal fibrosis, a major cause of&#160;chronic kidney disease (CKD). ...